DREAM 植入物：一种轻便、模块化且经济高效的植入系统，用于头部固定和行为自由的小鼠的慢性电生理学

所有实验程序均根据马克斯·普朗克学会的机构指导方针进行，并经当地政府伦理委员会（Beratende Ethikkommission nach §15 Tierschutzgesetz， Regierungspräsidium Hessen，项目批准代码：F149-2000）批准。 图 1：植入物设计。 （A） 植入物叠加在小鼠头骨上的3D渲染，硅探针连接到探针连接器。头板的中心孔径约为 10 毫米，用于缩放。驱动器的高度约为 17 mm。未显示形成法拉第冠外部的铜网以及接地/参考线。（B） 与 （A） 相同，连接到放大器板而不是探针连接器。（C） 植入物的爆炸技术图，显示了其组件。（D） 渲染一个可以植入微型驱动器下方的倾斜垫片，允许始终以预定义的角度（此处：20°）植入微型驱动器。（E） 集成头部固定机构的渲染图，显示了植入法拉第冠的头部板，以及周围的头部固定夹和用于设置的燕尾连接。（F） 使用植入物的集成头部固定机构将鼠标头部固定在跑步机上的图像。 请单击此处查看此图的较大版本。 注意：第 1 节和第 2 节讨论了术前准备 1. 硅探针的准备 如果探针重复使用，请根据探针供应商的建议清洁硅探针。将探针浸泡在酶清洁剂中（参见 材料表）5-10 分钟，然后用软化水冲洗。移植后尽快执行此操作。在（重新）植入前一天，将探针浸泡在 70% 乙醇中至少 30 分钟进行消毒。 测量通道阻抗以确保它们在所记录信号的规格范围内。遵循 Neuropixels 用户手册22 中的噪声级测试协议，通过所需的记录软件（例如 https://open-ephys.github.io/gui-docs/User-Manual/Plugins/Acquisition-Board.html#impedance-testing）测量阻抗，并遵循硅探针制造商或数据表提供的目标通道阻抗。如果阻抗太高，请考虑重新涂覆电极位点23。 将 0.05 英寸焊尾插座（参见 材料表）焊接到探头的接地 （GND） 线上。在手术过程中将插座连接到 GND 引脚（下一步）。注意：在此协议中，不使用单独的参考 （REF） 引脚，因为 GND 和 REF 在所使用的头级上短路。因此，协议的其余部分将仅提及 GND pin。如果使用单独的 REF，请对 REF 引脚重复以下步骤。 要准备 GND 引脚，请反复将 0.05“ 焊尾插座的引脚侧（参见 材料表）插入 GND 0.05” 焊尾插座，直到插入基本不费吹灰之力。使用镀金销可以减少对这种平滑步骤的需求。这确保了 GND 引脚和插座在手术过程中可以轻松连接，而无需施加过大的压力，从而降低了对动物和探针造成伤害的风险。 如果使用用于硅探针的植入式前置放大器，请按照供应商的程序为慢性植入做好准备。然后，使用硅胶石膏将放大器/连接器粘在法拉第笼的环上，将其粘合到设计用于固定放大器的法拉第环区域（见 图 1）。注意：按照供应商的程序为硅探针准备植入式前置放大器以进行长期植入，可能包括将它们涂在硅或环氧树脂中，以避免受潮损坏电子设备，以及在录音期间将放大器连接到录音系统时反复插接放大器连接器以减少插拔力。这对 Omnetics 用户特别有用。 2. 准备微型驱动器和头带 转动微驱动器主体上的螺钉，使微驱动器梭几乎完全向上缩回。 或者，用氰基丙烯酸酯胶或牙科粘结剂将倾斜垫片（参见 图 1D）连接到微型驱动器的底部，这可用于允许使用特定程度的倾斜，例如，当通过中央沟内某个区域的皮质层进行记录时，或在可能需要非垂直方法的深层结构中（对于倾斜的垫片， 参见 材料表）。 将微型驱动器水平放在微型驱动器支架上（补充图 1）。 将一小块粘性腻子（参见 材料表）放在微型驱动器支架上，距离将放置头部级连接器的微型驱动器上方一段距离。这个距离取决于将硅探头连接到头部连接器的柔性电缆的长度。 将一小滴硅胶石膏（参见 材料表）放在梭子上。 在钝的软头镊子的帮助下，将硅探针从包装中取出。通过在标准尖嘴镊子上涂上直径为 3 mm 的热缩管来制作这些（参见 材料表）。首先将带有柔性电缆的探头放在微型驱动器的梭子上，使柔性电缆的底部边缘略微悬在微型驱动器梭子的底部边缘上。 轻轻地将柔性电缆拉向微型驱动器的顶部，直到柔性电缆的底部边缘与微型驱动器穿梭机的底部边缘相遇。在此步骤中，确保将柔性电缆推向微型驱动器梭子的左边缘，使其完全垂直放置在微驱动器末端。此时，确保硅胶探针的柄不会（或仅最小）突出超过微型驱动器的下边缘（取决于探针柄的确切长度和目标大脑区域的深度）。 将探头的头部连接器放在支架顶部的粘性腻子上，以防止探头脱落。 使用 27 G 注射器针头在柔性电缆和梭子之间滴一小滴氰基丙烯酸酯胶（参见 材料表），以将探头固定到位。确保胶水不会流到微型驱动器上或沿着穿梭车外的柔性电缆流淌（这非常重要） 将柔性电缆粘合到位后，使用硅胶石膏将放大器连接到冠环（参见 材料表）。然后，将柔性电缆连接到放大器，并用一层薄薄的硅胶石膏覆盖连接和电缆。 5 分钟后，当石膏凝固时，安全地存放微型驱动器和探针，直到进一步使用。 将铜网片（参见 材料表）切割成开放的甜甜圈形状（参见 补充图 2 中的切割图案）以覆盖法拉第笼。 用小滴环氧树脂将铜网切口固定在法拉第笼上（参见 材料表）。对于这一步，还可以用牙科水泥代替环氧树脂。注意：法拉第笼包含一个空间，用于容纳探头连接器或放大器。这个空间在设计文件中用 X 标记，它包含一个用于放大器/连接器的支撑底座，以及壳体两个相邻辐条之间的更大距离。为了在放大器/连接器周围创造足够的空间，请在两个相邻的辐条之间固定少量额外的网格，从而形成一个突起。这确保了放大器/连接器以后可以放置在这个“口袋”中，而无需接触法拉第笼。为确保牢固粘附且翘曲最小，请使用直接放置在表冠上的冠环来保持形状并支撑冠状的细辐条。此外，在干燥过程中使用焊接辅助手固定牙冠和网孔。如果在接受手术时难以保持牙冠的形状，请尝试一次只对两个牙冠臂进行环氧树脂处理，以防止翘曲。 如果需要法拉第笼的单独接地，请将一个小接头引脚焊接到 30 mm 接地线上（参见 材料表），然后使用导电环氧树脂将导线粘附到铜网切口上。注意：实验室中不遵守此步骤。 此时，请安全地存放准备好的部件，并在以后进行手术。注意：第 3-6 节讨论了微型驱动器和头带的植入。 3. 手术：准备探头和工作区 按照批准的程序对手术器械进行消毒并将手术器械放置在手术工作区中。注：这可能包括使用微珠灭菌器、高压灭菌仪器或用 30% 过氧化物或 90% 乙醇冲洗，具体取决于批准的实验方案。 按照牙科粘固剂套件中的说明，将用于制备牙科粘固剂的陶瓷皿放入冰箱、冰箱或冰柜中（见 材料表）。在水泥搅拌过程中使用冷却的陶瓷皿，以增加水泥的延展时间。每当需要更长的胶合步骤时，请使用冷却皿。 如果需要在实验结束时对探针位置进行组织学验证，请在手术前逆时针转动微型驱动器上的螺丝来延长硅探针，并通过将亲脂性染料（参见 材料表）浸入一小滴染料中将探针涂在探针上。从市售的二甲基亚砜 （DMSO） 或乙醇 （EtOH） 稀释的储备溶液（参见 材料表）制备亲脂性染料，方法是将其稀释在合适的缓冲液（如 PBS）中以 1-5 μM 的浓度稀释。 4. 手术：动物的准备 遵循批准的麻醉方案，在无菌条件下进行 2-4 小时的啮齿动物手术。这可能包括全身麻醉和局部麻醉、镇痛、涂抹眼药膏和注射生理盐水。在这里，使用注射麻醉剂（氯胺酮 100 [mg/kg]/美托咪定 0.5 [mg/kg]）以及局部镇痛霜和眼膏（见 材料表），并将动物放在加热垫上以调节体温。 当动物完全麻醉后，将其移至单独的非无菌剃须区域。确保动物充分加热;例如，将其放在加热垫上。去除颅骨顶部的毛发。使用电动剃须刀或脱毛霜（见 材料表）或用覆盖有 70% 乙醇的手术刀反复剃须头顶。 小心去除松散的毛发，以确保它们以后不会与暴露的组织接触。要去除毛发，请使用用 70% 乙醇和/或挤压球泵润湿的组织等。如果使用脱毛膏，请确保使用棉签和生理盐水将其彻底去除。 用含碘消毒剂（见 材料表）和酒精使用棉签对剃须区域进行多次消毒，从头部中央移动到两侧，从切口部位刷走任何残留的松散毛发。 使用 betadine 对头部和周围的皮毛进行消毒。这确保了无菌的工作区域，并保护手术器械和材料不与未消毒的毛皮接触。 使用耳杆和鼻托将动物放在立体定向框架中（参见 材料表）。 使用小手术剪刀（ 材料 表），在颅骨顶部的皮肤上切出一个杏仁形的开口，从 lambda 缝合线的后部一直延伸到眼睛之间。 在仍然湿润的情况下切开皮下膜和骨膜，然后用手术刀刀片刮擦颅骨，以去除颅骨表面可能阻碍牙科粘结剂粘附的软膜组织。 可选：清除颅骨上的膜组织后，短暂涂抹一层 0.5% 过氧化物的薄层，并用水基碘消毒剂（例如 Betadine）洗掉，然后使颅骨表面变粗糙，以提高底漆与颅骨的粘附性。 通过刮擦十字交叉图案，将手术刀的尖端倒置，小心地使颅骨表面粗糙。这有助于牙科粘固剂稍后粘附在颅骨上。注意：不要在缝合线顶部用力抓挠，因为这会导致缝合线破裂并渗出颅内液，从而损害牙科粘接剂的粘附力。 在手术刀刀片和无菌棉签之间交替使用，轻轻刮擦/推开附着在 lambda 缝合线两侧的颈部肌肉，直到肌肉被推回小脑顶部的颅骨“边缘”。这有助于最大限度地减少神经元记录中的肌肉噪声。 用 27 G 针头（参见 材料表）填充 1 mL 注射器，加入少量外科瞬干胶（参见 材料表）。然后，使用注射器将皮肤粘在颅骨边缘，在其上涂抹微小的强力胶滴。将组织尽可能平整地粘在颅骨上，为植入物留出空间。该程序可确保皮肤和肌肉不会与植入物的某些部分直接接触，从而避免了记录中的肌肉噪音并提高了牙科粘固剂的附着力。 在颅骨上涂抹牙科粘固底漆以增加附着力，并用紫外线固化（见 材料表）。这提高了牙科粘接剂的粘附力，并防止颅缝线泄漏并随着时间的推移削弱颅骨粘接剂的粘合。 找到探针植入相对于前囟或 lambda 的目标位置，并用手术标记勾勒出其周围的开颅手术。将头板放在颅骨上，使开颅手术位于颅骨内，在开颅手术的一侧为微型驱动器留出空间，以及 1-2 个接地引脚。 使用牙科粘固剂植入头板。在指定的冷却陶瓷皿中混合牙科水泥（参见步骤 3.2）。确保头板从四面八方都粘附在颅骨上，形成一个水密的“井”。 使用牙钻（尺寸为 US 1/2 HP），在大脑区域上钻一个与 1.4 步骤中准备的针座引脚宽度相同的小毛刺孔，以用作 GND/REF。如果需要将法拉第笼接地，请在靠近法拉第笼边缘的地方为 Faraday-GND 接头引脚钻另一个小毛刺孔。注意：对于 GND/REF 接头引脚，请将开颅手术室放置在距笼边缘足够远的位置，以便稍后可以在不接触法拉第笼的情况下将接头引脚本身放入其中。 用注射器轻轻将无菌盐水滴在开颅手术上，然后用不脱落的湿巾将其去除，以清洁开颅手术（见 材料表）。重复此过程，直到去除所有血液和松散组织。 在盐水中制备 0.7% 琼脂（参见 材料表）溶液，稍微冷却，然后使用 1 mL 注射器上的 27 G 针头将其引入开颅手术。 轻轻地将 GND 引脚（参见步骤 1.3）插入上一步中钻出的每个开颅手术中。针脚将在四面八方被琼脂包围（参见步骤 4.17）。在接头引脚周围涂抹水泥以固定它们并提供电气隔离。 清洁陶瓷盘并将其放回冰箱/冰柜中。 使用牙钻，通过稳定地移动边缘来钻出较大开颅手术（圆形或方形）的轮廓。确保开颅手术为 1 毫米 x 1 毫米至 2 毫米 x 2 毫米，以便对探针的位置进行小幅调整，以避免血管而不会暴露太多皮层。如果可能，请避免在缝合线上放置开颅手术。以 20-30 秒的轮次钻孔，并在两次钻孔之间用盐水冷却颅骨。注意：开始钻孔时，用记号笔标记出微型驱动器的前缘很有用，从而确保在钻孔时可以形成与微型驱动器前缘平行的直边。这提高了在将微型驱动器固定到位时避免开颅手术中粘接物的机会，并提高了粘附力，防止了微型驱动器悬垂在开颅手术机上，并在将微型驱动器相对于最终记录部位位置放置时允许更大的横向机动性。 在最初的几轮钻孔后，用细镊子（尺寸 5 或更细;见 材料表）轻轻推动骨头的钻孔部分，以测试该部分的阻力。在钻孔轮次之间继续测试，直到骨头在推动时开始在镊子下方“弹跳”。在这种情况下，在开颅手术顶部加入一滴生理盐水以软化骨头，然后用镊子轻轻取出钻出的骨头。 如果无法轻轻地去除骨骼，请进行另一轮钻孔，重点关注骨骼仍然更牢固地附着的点。一般来说，在完全钻穿颅骨之前，用镊子轻轻按压将其取出，因为这通常可以最大限度地减少组织损伤。注意：确保硬脑膜表面定期湿润，无论是在钻孔以降低温度期间还是在去除骨瓣之后。这通过防止硬脑膜干燥和变得更难穿透，提高了探针轻松插入的机会。如果硬脑膜被证明太硬而无法穿透，或者正在使用钝探针或多柄探针，则通过用 27 G 针提起硬脑膜并在盐水浸泡下做一个小切口来进行硬脑膜切开术，以防止硬脑膜粘在大脑表面。 用浸泡在凉爽无菌盐水中的止血海绵（ 材料 表）覆盖开颅手术，以保护硬脑膜和大脑。 5. 手术：探针植入 将定制的微型驱动器支架（参见 材料表）连接到立体定向装置的臂上。如果在探针准备后从微型驱动器支架中取出了微型驱动器，请将带有附加硅探针的微型驱动器放入微型驱动器支架中。根据需要调整立体臂的角度以到达所需的目标大脑区域。将带有附加放大器的冠环放在微型驱动器支架背面的三个垂直引脚上（参见 补充图 1）。 将微型驱动器降低到开颅手术的 ~0.5 毫米范围内，然后使用镊子将连接到探头的 GND/REF 接头引脚连接到植入颅骨上的相应 GND/REF 引脚（参见步骤 4.14-4.15）。参见 补充图 3 和 补充图 4 ，了解驱动、开颅手术和 GND/REF 引脚布局的示例。 就位后，可以选择用一滴导电银环氧树脂固定引脚（参见 材料表），以实现更坚固的连接。银环氧树脂固化后，用少量牙科水泥覆盖连接的针脚（见 材料表），以确保连接长期保持稳定，并且与周围组织和/或种植体元件没有电气连接。 从开颅手术中取出止血海绵（参见步骤 4.22）。 将带有微型驱动器的立体定向臂放在开颅手术机上。注意：如果探头缩回，请确保将微型驱动器放置在探头可以接触到不包含大血管的开颅手术部分。 如有必要，通过调整位置和角度来降低微型驱动器，直到探头柄接触到目标区域的硬脑膜或大脑表面（参见步骤 4.21）。 在指定的陶瓷皿中混合牙科水泥（参见步骤 3.2），并将微型驱动器的底座固定到位，重点关注微型驱动器底座不面向电极的三个侧面。确保水泥不接触可移动“底座”上方的微型驱动器（参见 图 1D）。确保基底和颅骨之间的任何空间都用牙科水泥完全覆盖。清洁陶瓷盘并将其放回冰箱/冰柜中。等待水泥固化，大约 10-15 分钟。注意：在微型驱动器底座和颅骨之间留有一个小间隙，并使用最流畅的水泥来填充它。一旦水泥略微变厚，微驱动器底座壁和颅骨之间的水泥就会堆积起来。始终使用非常少量的水泥，因为物质的流动是不可预测的，并且较大的体积可能会流入不需要的区域。少量蘸有生理盐水的止血海绵可用于覆盖开颅手术的部分。如果粘接剂意外流到开颅手术上，一旦粘接剂进入薄膜状稠度，就用镊子将其去除。 将硅探针降低到大脑上，通过显微镜仔细监测探针位置。当探针柄接触大脑时，将探针快速降低 ~250 μm（螺钉旋转一整圈为 282 μm），以确保探针突破硬脑膜/皮质表面的阻力。直观地验证这一点。如果探针没有突破皮层，请等待 5 分钟，然后尝试在硬脑膜/皮层受到探针尖端的张力下，通过反复升高和降低探针几十微米来用柄尖端蚀刻硬脑膜。 一旦探针突破了皮层表面，以较慢的速度（100-200 μm /min）逐渐降低它，直到达到目标坐标或探针移动了 1000 μm 以上。如果目标要求探针移动超过 1000 μm，请在以下记录会话中以最大 1000 μm/会话的步骤推进探针，直到达到目标坐标。注意：如果首选在降低硅探针的同时监测神经元信号，请跳过此步骤。第 7 节 中介绍了此操作的步骤。 根据说明准备有机硅弹性体（见 材料表），并使用 1 mL 注射器将一小滴滴入开颅手术中（见 材料表）。 干燥后，用 50/50 的骨蜡和矿物油混合物覆盖有机硅弹性体。此步骤进一步保护探头并防止碎屑和干血浆在开颅手术上积聚，使提取更简单、更安全。要小心，因为在探头降低时在探头周围工作可能会导致破损。 6. 手术：法拉第笼植入 当牙科粘固剂完全凝固时，用内六角扳手松开固定驱动器的横向螺钉，以松开微型驱动器支架（参见 补充图 1）。轻轻缩回支架 ~1 厘米，使微型驱动器独立，但探针放大器/连接器仍固定在植入物支架上，而不会拉伸柔性电缆。 将预制的牙冠和法拉第网放在头板上，方法是在开口处拉伸笼并将其水平插入微型驱动器和柔性电缆上，然后用牙科水泥将其固定在头板上。注意：确保用牙科粘结剂封闭法拉第保持架和颅骨之间的所有空间，以保护植入物免受污染。 将带有探头连接器/头的法拉第冠环（参见 材料表）放在冠上，将探头放大器/连接器的集成支架与法拉第冠上缩进的“X”标记的区域对齐（参见步骤 2.13）。 在每个辐条环连接处用一小滴氰基丙烯酸酯胶或牙科水泥将环固定到法拉第笼上。 将带有集成探针放大器/连接器的法拉第环固定到位后，用微型驱动器支架完全缩回立体定向臂。有关组装这些组件的分步指南，请参见 补充图 3 。 7. 术后检查记录 将探头放大器/连接器连接到记录硬件并开始记录。 如果在初始插入期间探针尚未到达其目标位置（参见步骤 5.9），请逆时针缓慢转动微驱动器螺钉以降低探针，同时监测神经元信号。注意：信号应发生变化 a） 当电极接触开颅手术上方的硅橡胶层时，以及 b） 当电极开始进入大脑时（参见步骤 7.2）。高频神经元活动将由完全插入大脑的电极记录，而与大脑表面的 CSF 接触的电极通常会显示低通过滤的神经元群信号，而没有尖峰活动（类似于脑电图轨迹），空气中的记录点会记录到增加的电噪声。在测试记录后，可以通过测量各个通道的阻抗来额外验证探头插入深度。与空气接触的通道应显示高阻抗（表示开路）和阻抗，就像手术前为接触 CSF 或已经在大脑中的通道测量的阻抗一样。每次会话将硅探针推进最大总距离约 1000 μm，最大速度约为 75 μm/min（参见步骤 5.5）。 当探针上可以看到神经局部场电位和/或探针最大前进 1000 μm 时，结束测试记录并断开头部tage 连接器。 8. 恢复 用自粘性兽医包裹物覆盖法拉第笼（参见 材料表）。 结束麻醉并按照批准的实验指南让动物恢复几天。 如果硅探针上的电极尚未位于所需的目标位置，请以小步长转动微型驱动器的螺钉，每次最多转动四整圈（或 ~1000 μm）。如有必要，请在几天内重复此过程，直到达到目标。建议将探针移动与同步记录相结合，以评估横向区域的电生理活动。 9. 行为实验和慢性记录 对于任务执行期间的慢性头部固定记录，通过手动打开夹子并夹紧植入的头板，将法拉第笼底部的头板连接到头部固定夹上（参见 图 1C、E、F）。注意：如果不需要头部固定，该植入系统也可用于自由移动的录音。对于自由移动的录音，请跳过步骤 9.1 和 9.7。 从植入物上取下自粘性兽医包裹物。注意：为了尽量减少动物的不适，建议在此步骤之前开始一项简单、有益的行为任务，以分散实验者使用植入物的注意力。 将放大器/连接器连接到录音设备。 在动物执行任务时进行神经元记录。注意：如果目标是最大化记录的细胞外单位的数量，则每当某个位置的神经产量降低时，将梭子移动几十微米。请注意，移动探头后，信号可能需要几分钟到几小时才能稳定下来。因此，在会话结束时移动探测器可能是有益的，这样信号就可以恢复，直到下一个会话开始。 在行为记录结束时，断开记录设备并用新的兽医包裹物覆盖植入物。 打开头部固定夹，将动物从头部固定装置上分离。 10. 探针恢复 在最终记录结束时，顺时针转动螺钉，将硅探针尽可能缩回微型驱动器上。当动物头部固定并行为正常或在手术设置中麻醉动物时执行此操作。通过同时监测神经元信号并检查浸入大脑、接触大脑表面或与空气接触的电极的特征，绘制探针从大脑中的出口（参见步骤 7.3）。注：根据组织学方案和探针，在缩回探针之前进行电解损伤，以确定探针上某些电极的确切位置。如果不需要通过神经元记录来监测探针的出口，也可以在动物终止后收回探针。 按照批准的指南处决动物（如果计划固定大脑以进行后续组织学，这包括灌注动物）。 动物死亡后等待 ~ 10 分钟。然后，将动物头部固定在立体模型中，确保动物的头部在外植体期间不能移动，以防止探针破损。 在开颅手术顶部滴一滴生理盐水，让它浸泡几分钟，以软化探针柄上的干燥生物组织并降低探针柄断裂的机会。 将立体定向支架放在微型驱动器上方约 0.5 厘米处。然后用小手术剪刀剪断法拉第笼辐条的上端（参见 材料表），以释放固定放大器/连接器的法拉第环，并将环转移回立体定向支架顶部的垂直销钉上（参见步骤 5.1 和 补充图 1）。 用相同的手术剪刀小心地剪掉铜网，在法拉第冠的辐条之间剪出 U 形网眼区域。然后，剪掉表冠底部处的塑料辐条。注意： 避免在切割打印的塑料辐条时弯曲它们，因为它们可能会折断并使塑料碎屑飞向探头。 降低立体定向支架，直到可以使用支架的横向螺钉将微型驱动器固定在支架中，固定微型驱动器，然后松开将微型驱动器主体连接到微型驱动器底座的 T1 螺钉。 用植入物支架慢慢缩回立体定向臂，将微型驱动器从其底座上提起。确保微驱动器与底座以垂直角度分离（即，与底座“垂直”）。注意：如果微型驱动器主体和底座不容易分离，请验证立体定向臂的运动是否与微型驱动器方向相比没有成一定角度。如有必要，通过稍微松开动物头部的固定并相应地重新定位，将支架和微型驱动器彼此重新对齐。正确对齐是轻松恢复微型驱动器的关键方面之一。此外，检查是否有残留的牙科粘结剂连接微型驱动器和微型驱动器底座（参见步骤 5.5）。如果是这样，根据水泥的使用量，用手术刀和/或牙钻小心地刮掉水泥。 用连接的探头抬起立体定向臂，使其下方留出足够的空间。 将动物从立体体中取出，并根据需要按照批准的组织学方案准备大脑。回收植入的微型驱动器底座，并将其浸泡在丙酮中数小时以备后用。 将干净的微型驱动器底座放在粘性腻子上（参见 材料表），然后将微型驱动器降低到底座上并拧紧螺丝。为防止破损，请在整个过程中在显微镜下监测探针位置。如果需要先清洁植入的 microdrive 底座以供重复使用，则可以在以后完成此步骤。注意：该协议要求使用粘性腻子作为底座的平台，这一点至关重要，因为它既可以固定底座，又具有一定程度的弹性，确保底座不会滑动并与探头碰撞。腻子应在微驱动器底座的一侧形成垂直的“悬崖面”，探头将在那里下降。这确保了如果探头下降到底座之外，它不会与下面的腻子接触。油灰“塔”也应该足够高，如果它降低到微驱动器底座之外，探头不会与放置油灰的台面接触。最后，将腻子很好地固定在表面上，以防止其滑落或掉落。将微型驱动器降低到油灰固定的微型驱动器底座上时，请确保显微镜的侧面剖面视图以监控进度，以便在探头降低时，它不会与底座或油灰发生碰撞。 按照制造商的说明对探头进行清洁和消毒。对于最常用的探针，将它们浸泡在酶清洁剂（参见 材料表）中 12 小时，然后用软化水冲洗并用酒精消毒。通过将探针放入装有酶清洁剂的大烧杯中，同时仍连接到立体定向臂上的微驱动器支架上来执行此操作。注意：如果需要，清洁后测量探头上电极的阻抗，以监测单个电极的电位退化。 将带有清洁探针的微型驱动器安全地存放，直到下一次实验。