Summary

Ein Schweinebrandmodell zur Untersuchung des Heilungsprozesses bei mehrfachtiefen Brandwunden

Published: February 23, 2024
doi:

Summary

Dieses Protokoll beschreibt ein reproduzierbares Modell einer mehrfachtiefen Brandwunde bei einem Yucatán-Minischwein.

Abstract

Die Heilung von Brandwunden ist ein komplexer und langwieriger Prozess. Trotz umfangreicher Erfahrung stehen plastische Chirurgen und spezialisierte Teams in Verbrennungszentren immer noch vor großen Herausforderungen. Zu diesen Herausforderungen gehört, dass sich das Ausmaß des verbrannten Weichgewebes in der Frühphase entwickeln kann, wodurch ein empfindliches Gleichgewicht zwischen konservativen Behandlungen und der Entfernung von nekrosierendem Gewebe entsteht. Thermische Verbrennungen sind die häufigste Art, und die Brenntiefe hängt von mehreren Parametern ab, wie z. B. Temperatur und Expositionszeit. Die Brenntiefe variiert auch im Laufe der Zeit, und die sekundäre Verschlimmerung der “Schattenzone” ist nach wie vor ein wenig verstandenes Phänomen. Als Reaktion auf diese Herausforderungen wurden mehrere innovative Behandlungen untersucht, und weitere befinden sich in der frühen Entwicklungsphase. Nanopartikel in modernen Wundauflagen und künstlicher Haut sind Beispiele für diese modernen Therapien, die sich noch in der Evaluierung befinden. Zusammengenommen müssen sowohl die Verbrennungsdiagnose als auch die Behandlung von Verbrennungen erheblich verbessert werden, und Forschungsteams benötigen ein zuverlässiges und relevantes Modell, um neue Instrumente und Therapien zu testen. Unter den Tiermodellen sind Schweine aufgrund ihrer starken Ähnlichkeit in der Hautstruktur mit dem Menschen am relevantesten. Genauer gesagt zeigen Yucatan-Minischweine interessante Merkmale wie Melaninpigmentierung und langsames Wachstum, was die Untersuchung hoher Phototypen und eine langfristige Heilung ermöglicht. Ziel dieses Artikels ist es, ein zuverlässiges und reproduzierbares Protokoll zur Untersuchung von mehrtiefen Brandwunden bei Yucatan-Minischweinen zu beschreiben, das eine langfristige Nachbeobachtung ermöglicht und ein relevantes Modell für Diagnosen und therapeutische Studien bereitstellt.

Introduction

Verbrennungen sind ein großes Problem der öffentlichen Gesundheit und betreffen jedes Jahr mehr als 480.000 Patienten in den USA, so das National Burn Repository 1,2. Dies führt zu mehr als 50.000 jährlichen Krankenhauseinweisungen wegen nicht tödlicher komplexer Fälle, die eine eingehende Behandlung erfordern2. Darüber hinaus sind Verbrennungen eine der Hauptursachen für die Mortalität und Morbidität bei Militärangehörigen und für 10 % bis 30 % der militärischen Verluste verantwortlich 3,4. Die Behandlung von Verbrennungen ist trotz ihrer immensen und vielfältigen Auswirkungen auf die Patienten, die von physisch über psychisch bis hin zu emotional reichen, lange Zeit nahezu unverändert geblieben5.

Die Erstdiagnose und Beurteilung von Brandverletzungen führt zu einer grundlegenden Klassifizierung nach der Art der Verbrennungen (erste, zweite und dritte) oder der Tiefe des betroffenen Gewebes (oberflächliche, partielle Dicke und tiefe Verbrennungen)6,7,8. Teildickenverbrennungen (ersten und zweiten Grades) betreffen die Epidermis und unterschiedliche Tiefen der Dermis (oberflächliche oder tiefe Dermis, d. h. oberflächliche und tiefe Verbrennungen zweiten Grades)9. Insbesondere schließt eine Schädigung der Gliedmaßen in der tiefen Dermis die Möglichkeit einer Re-Epithelisierung aus dem Adnexepithel10 aus. Definitionsgemäß erreichen Verbrennungen in voller Dicke das Unterhautfett, die Faszien und/oder den darunter liegenden Muskel (Verbrennungen dritten Grades) und manchmal auch den Knochen (auch als Verbrennungen vierten Grades bezeichnet)11,12.

Nach dem Krankenhausaufenthalt erhalten Patienten mit Verbrennungen eine besondere Betreuung, die eine Strategie verfolgt, die aus einem empfindlichen Gleichgewicht zwischen Gewebedebridement und -erhaltung besteht. Das geschädigte und/oder sekundär infizierte Weichgewebe muss schrittweise entfernt werden, bis gesundes Gewebe freigelegt ist, was die Verwendung spezifischer Verbände und Hauttransplantate zur Verbesserung des Heilungsprozesses ermöglicht 13,14,15,16. Während der Operation ist jedoch Vorsicht geboten, um eine unbeabsichtigte Entfernung von heilendem Gewebe zu vermeiden und Komplikationen für eine optimale Genesung zu reduzieren. Biologisch gesehen weisen Verbrennungen einen zentralen nekrotischen Bereich auf, der von einer “Schatten”- oder “Stasis”-Zone umgeben ist, was auf eine potenziell reversible Ischämie hinweist. Dieser Bereich kann sich entweder verschlechtern, was zu einer ausgedehnten Nekrosezone führt, oder durch Umkehrung des apoptotischen Prozesses heilen17,18. Diese unterschiedliche Schwere von Verbrennungen stellt für Chirurgen eine Herausforderung dar, eine genaue Beurteilung vorzunehmen, was das Gleichgewicht zwischen konservativen Behandlungen und chirurgischer Exzision erschwert19. Bisher gibt es kein effizientes Werkzeug, um diese “Schattenzone” vor der Brandumwandlung zu charakterisieren. Die Entwicklung solcher Werkzeuge ist entscheidend, um dieses empfindliche Gleichgewicht zu optimieren.

Es wurden mehrere Behandlungen getestet, um die Umwandlung von sekundären Verbrennungen zu verringern. In der Klinik gibt es derzeit jedoch keine spezifische Therapie18. Weitere Beispiele für Fortschritte bei der Behandlung von Verbrennungen sind die Entwicklung moderner Wundauflagen und Nanomaterialien20,21, Tissue-Engineering-Haut22,23 und neuartiger epidermaler Kulturansätze24,25. Auch die moderne rekonstruktive Chirurgie und die fasziokutanen Lappen haben die Behandlung von Langzeitnachwirkungen, insbesondere von Verbrennungskontrakturen nach pathologischer Heilung von Faltenbereichen, verbessert26,27. Diese Fortschritte bieten vielversprechende Aussichten für Verbrennungspatienten, indem sie ihre Behandlungsstrategien und ihre Lebensqualität verbessern, aber die jüngsten Ergebnisse zeigen, dass die funktionellen Auswirkungen sowohl im physischen als auch im psychischen Bereich nach wie vor erheblich sind28. Zusammengenommen ist die Nachfrage nach innovativen Fortschritten sowohl bei der Diagnose als auch bei der Behandlung von Verbrennungen erheblich.

Insgesamt zielen viele Ansätze darauf ab, die Diagnose, das Management und die Behandlung komplexer Verbrennungsfälle zu verbessern, und die Forscher benötigen ein reproduzierbares und relevantes Modell, um diese neuen Ansätze zu testen. Aufgrund seiner biologischen Komplexität, an der mehrere Organe und systemische Reaktionen beteiligt sind, erwies sich kein In-vitro-Modell als relevant für die Untersuchung des Verbrennungswundenprozesses29. Nagetiermodelle haben große Diskrepanzen mit dem Menschen gezeigt, die auf große Unterschiede in der Biologie, der Hautarchitektur, der Elastizität und der mangelnden Einhaltung der zugrunde liegenden Strukturen zurückzuführensind 29. Im Gegensatz dazu hat sich das Schweinemodell aufgrund der strukturellen Ähnlichkeit von Schweinehaut und menschlicher Haut als relevant erwiesen 30,31,32. Es weist eine ähnliche Vaskularisierung, elastische Faserzusammensetzung und einen ähnlichen Erneuerungszeitpunkt auf. Darüber hinaus ermöglichen der Haarfollikel und die apokrinen Anhänge eine isolierte Reepithelisierung, wie sie bei klinischen oberflächlichen Verbrennungen beobachtet werden kann33,34. Genauer gesagt bieten Yucatán-Minischweinemodelle interessante Merkmale, die sie für die Untersuchung pigmentierter Haut35 und langfristiger Ergebnisse mit minimalen körperlichen Veränderungen36 relevant machen.

Der Zweck dieses Artikels ist es, ein zuverlässiges Modell für mehrgradige Verbrennungen bei Yucatán-Schweinen zu beschreiben, das die Untersuchung mehrerer Verbrennungen zweiten und dritten Grades am selben Subjekt ermöglicht. Damit steht ein relevantes und reproduzierbares Modell für die Untersuchung diagnostischer und therapeutischer Innovationen für das Management von Verbrennungen zur Verfügung. Darüber hinaus zeichnet sich dieses Modell durch unterschiedliche Arten und Schweregrade von Verbrennungen, eine Langzeitbeobachtung, die die Untersuchung von Verbrennungskontrakturen und pathologischer Heilung ermöglicht, sowie ein differentielles Verhalten der pigmentierten Haut aus, von dem bekannt ist, dass es spezifische Merkmale aufweist.

Protocol

Alle Tierarbeiten wurden in Übereinstimmung mit der ARRIVE-Checkliste37 (Animal Research: Reporting In Vivo Experiments) durchgeführt und waren konform mit dem Massachusetts General Hospital Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) gemäß Protokoll #2021N000271. Die Tiere wurden artgerecht versorgt, wobei dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Versuchstieren38 gefolgt wurde. Für diese Experimente wurden fünf 30 kg schwere weibliche Yucatán-Minischweine verwendet. Die Tiere wurden aus einer kommerziellen Quelle gewonnen (siehe Materialtabelle). 1. Präoperative Betreuung und Anästhesie Fasten Sie die Tiere 12 Stunden lang, bevor Sie eine Vollnarkose durchführen. Beginnen Sie die Anästhesie durch eine intramuskuläre Injektion von 2-4 mg/kg Tiletaminhydrochlorid und Zolazepamhydrochlorid und 1-2 mg/kg Xylazin, gefolgt von der Inhalation von Isofluran (2-3% Sauerstoff) (siehe Materialtabelle), um die Anästhesie während des Eingriffs aufrechtzuerhalten. 2. Design und Randomisierung von Brandwunden Um sowohl partielle als auch vollständige Verbrennungen mit Negativkontrollen am selben Tier (keine interindividuellen Variationen) zu untersuchen, legen Sie acht Wunden am Rücken jedes Schweins im paravertebralen Bereich an. Führen Sie drei Wunden in voller Dicke, drei Wunden mit teilweiser Dicke und zwei Kontrollwunden durch. Nummerieren Sie die Wunden von 1 bis 8 und führen Sie eine Randomisierung durch, um verschiedene Verbrennungsgrade (partielle Dicke, volle Dicke, Kontrolle) verschiedenen anatomischen Stellen auf dem Rücken zuzuweisen.HINWEIS: Die Randomisierung jeder Wunde (Tiefe und Lage) wird durchgeführt, um die Signifikanz zu verbessern: Es ist bekannt, dass die Schweinedermis in Bezug auf Dicke und Kollagenzusammensetzung variiert39. Daher wird die Randomisierung jedes Tieres verwendet, um potenzielle Verzerrungen zu verringern. 3. Abgrenzung der Tätowierungswunde HINWEIS: Das erste Verfahren besteht darin, kreisförmige Tätowierungen auf dem Rücken des Schweins zu erstellen, um die randomisierten Wunden zu lokalisieren und zu nummerieren (Abbildung 1). Dies wird zwei Tage vor der ersten Verbrennung durchgeführt, um eine bessere Akklimatisation zu ermöglichen, kann aber auch am Tag der Verbrennung durchgeführt werden. Nach der Anästhesie (siehe Schritt 1) und der orotrachealen Intubation in Rückenlage40 bringen Sie das Schwein in die Bauchlage und legen Sie weiche Keile (Bettlaken) unter das Tier, um es bequem zu halten und zu stabilisieren (unter den Vordergliedmaßen, dem Nabelbereich und den Hintergliedmaßen)41. Legen Sie eine Umluft-Wärmedecke auf Kopf und Hals des Tieres, um eine angemessene Körpertemperatur aufrechtzuerhalten. Platzieren Sie eine gerade Linie mittig auf dem Rücken des Schweins, um die Symmetrie der Zeichnungen zu ermöglichen. Zeichnen Sie mit einem dermographischen Stift (siehe Materialtabelle) zwei vertikale Linien auf beiden Seiten der Mittellinie, die 6,5 cm seitlich von ihr platziert sind. Die beiden Seitenlinien werden verwendet, um den Mittelpunkt der Kreise zu platzieren. Zeichnen Sie jedes Paar Kreise mit einem Durchmesser von 4,5 cm symmetrisch und halten Sie dabei einen Mindestabstand von 4 cm zwischen zwei unterschiedlichen Kreisen ein (Abbildung 1A). Sobald die Zeichnungen fertig sind, führen Sie eine einstufige Hautvorbereitung (Povidon-Jod 7,5%) durch, um die Bakterienflora der Haut zu verringern. Führen Sie die Tätowierungsprozedur42 von acht 4,5 cm großen Kreisen mit einer Nadel-Tätowiermaschine, steriler schwarzer Tinte und einer sterilisierten 5-Punkt-Nadel durch (siehe Materialtabelle). Das Endergebnis ist in Abbildung 1B dargestellt. Im Falle einer verzögerten Brandentstehung tragen Sie eine dreifache antibiotische Salbe auf die Tätowierungen auf und bedecken Sie sie mit transparenten Klebeverbänden. 4. Entstehung von Brandwunden und fortschrittliche Wundauflage HINWEIS: Verbrennungen werden erzeugt, indem der Messingblock in Kontakt mit der Haut für 30 s (unveränderlich) an der dafür vorgesehenen Stelle platziert wird (Randomisierung). Die Temperatur bestimmt die Brenntiefe. Am Tag der Verbrennung, sobald das Tier betäubt und in die Bauchlage gebracht wurde, wie in Schritt 1 beschrieben, legen Sie zylindrische Messingblöcke in Edelstahlbehälter, die mit Aluminiumperlen gefüllt sind (siehe Materialtabelle). Stellen Sie die Behälter auf eine temperierte Kochplatte. Stellen Sie eine Heizplatte auf 65 °C (für die Teildickenverbrennungen) und die zweite auf 93 °C (für die Volldickenverbrennungen, Abbildung 2) ein.HINWEIS: Der Behälter kann trocken gehalten werden, um Verbrühungen zu vermeiden (2-3 Stunden werden benötigt, um das Temperaturgleichgewicht zu erreichen) oder kann zur Hälfte mit Wasser gefüllt werden (30 Minuten, um das Temperaturgleichgewicht zu erreichen). Bei Verwendung von Wasser müssen die Messingblöcke vor Schritt 4.5 gründlich getrocknet werden, um spätere Verbrennungen durch Verbrühungen zu vermeiden. Führen Sie ein Thermometer über die zentrale Öffnung in den Messingzylinder ein, um die Kerntemperatur zu überwachen, und bestätigen Sie die Oberflächentemperatur mit einer Temperaturpistole. Erhöhen Sie bei Bedarf die Temperatur der Heizplatte im Zylinder trotz geringer Wärmeabgabe auf 65 °C bzw. 93 °C.HINWEIS: Aluminiumfolie kann verwendet werden, um den Behälter abzudecken und die Wärmeableitung weiter zu minimieren, wodurch die gewünschte Temperatur schneller erreicht wird. Parallel dazu bringen Sie das Tier für die Verbrennung in Bauchlage, ähnlich wie bei der Tätowierung (Schritt 3.1). Sobald das Tier in Bauchlage bereit ist, bereiten Sie die Haut in drei Schritten vor (Povidon-Jod 7,5%, Kochsalzlösung 0,9%, Trocknen). Fassen Sie den Messingblock mit hitzebeständigen Handschuhen an und platzieren Sie ihn je nach Randomisierung auf der entsprechenden Tattoo-Stelle. Starten Sie den Timer, sobald der Messingblock die Haut berührt. Achten Sie darauf, nicht mehr Druck auf die Haut auszuüben als das Eigengewicht des Messingblocks. Entfernen Sie nach 30 s den Messingblock von der Haut und legen Sie ihn wieder in den dafür vorgesehenen Heizbehälter. Überwachen Sie die Temperatur, bis sie das Ziel erreicht, und wiederholen Sie den Vorgang für alle Wunden. Führen Sie einen fortschrittlichen mehrschichtigen Verband durch, um die Stabilität des Verbandes zu gewährleisten, nachdem sich das Tier erholt hat.Legen Sie eine mit Erdöl imprägnierte Gaze auf jede Brandstelle, einschließlich der Bedienelemente, und decken Sie sie mit einer trockenen Vliesgaze und einem großen transparenten Klebeverband ab. Sprühen Sie eine Tinktur aus Benzoelösung auf die umgebende Haut, damit die transparenten Verbände besser auf der Haut haften. Wickeln Sie das Tier in einen selbstklebenden Klebewickelverband und achten Sie darauf, ihn nicht zu fest anzuziehen (Einschränkung des Lungenvolumens). Vervollständigen Sie das Dressing, indem Sie eine letzte Schicht röhrenförmiges Stockinette (Größe dem Tier angepasst) hinzufügen (siehe Materialtabelle). Alternativ können individuell angepasste Schweinejacken verwendet werden, wenn das Tier nicht in der Lage ist, den Verband für die Dauer der Studie sauber zu halten Stellen Sie eine korrekte Analgesie sicher, indem Sie ein transdermales Opioid (Fentanyl)-Pflaster auf den Hals des Tieres legen, nachdem Sie eine Einzeldosis Buprenorphin (0,05-0,1 mg/kg, IM) und eine Einzeldosis Carprofen (2-4 mg/kg, IM) injiziert haben. Nach jeder Anästhesie ist die Tiere bis zu 2 Stunden nach der Genesung engmaschig zu überwachen. Verwenden Sie bei Bedarf ein warmes Polster und geben Sie nach Erreichen einer vollständigen Standposition frei Futter. 5. Verbrennungen-Escharotomie in voller Dicke HINWEIS: Zwischen 1 und 3 Tagen nach der Operation erhalten die Tiere nach den Verbrennungen dritten Grades eine chirurgische Entfernung des Schorfs in voller Dicke. Nach einer ähnlichen Vorbereitung des Tieres, einschließlich Anästhesie, Intubation und Versetzen des Tieres in Rückenlage, bereiten Sie die Haut über die dreistufige Hautvorbereitung vor und führen Sie eine sterile Drapierung des Rückens des Tieres durch. Führen Sie 4-mm-Stanzbiopsien (siehe Materialtabelle) an der Wunde durch, um die Art der Verletzung zu bestätigen. Die Scharorotomie43,44 wird durch einen kreisförmigen Schnitt des Schorfs mit einer sterilen Skalpellklinge (Nr. 15) bis zur tiefen Dermis durchgeführt. Fassen Sie eine Seite des Schorfs mit einer sterilen Adson-Gewebezange (mit 2/1 Zähnen) fest an (siehe Materialtabelle) und koppeln Sie sie nach oben, um die tiefe Grenze des Schorfs freizulegen. Setzen Sie die Öscharotomie mit der Skalpellklinge fort, während Sie in der gleichen Ebene innerhalb der tiefen Dermis/darunter liegenden Faszie bleiben. Eine blutende Dermis gilt als Zeichen für die Lebensfähigkeit des Gewebes.Wenn während des Prozesses eine Arteriole durchtrennt wird, führen Sie eine minimale Kauterisation mit einer bipolaren Gerinnungszange durch (siehe Materialtabelle). ACHTUNG: Eine großflächige Verätzung des angelegten Wundbettes kann eine verzögerte Heilung zur Folge haben und sollte strikt vermieden werden. Legen Sie einen ersten Satz trockenen Guaze für 5 Minuten auf das Wundbett, um die lokale Blutstillung zu verbessern, bevor Sie den endgültigen Verband legen. Verbinden Sie die Wunden ähnlich wie zuvor (Schritt 4.7), indem Sie mehrere trockene Gazen hinzufügen, um die Höhle zu füllen. Tragen Sie die gleichen Schichten wie zuvor erwähnt auf: Tinktur-Benzoe-Spray, selbstklebender transparenter Verband, selbstklebende Folie, röhrenförmige glatt mir. Stellen Sie eine Analgesie bereit, indem Sie das transdermale Opioidpflaster wechseln und Caprofen (2-4 mg/kg, IM) injizieren. 6. Nachsorge von Wundauflagen HINWEIS: Nachfolgende Verbände werden alle 2 bis 7 Tage durchgeführt, abhängig vom Versuchsschema der Behandlung und der Verträglichkeit des Tieres. Wundauflagen können nach 21 Tagen abgesetzt werden, um eine erneute Epithelisierung in einer trockenen Umgebung zu ermöglichen und die Toleranz des Tieres zu verbessern. Wenn die Behandlungsgruppe eine feuchte oder feuchte Umgebung erfordert, können die Verbände alternativ bis zum Ende der Studie verlängert werden. Die Nachbeobachtungszeit wurde um bis zu 10 Wochen verlängert, um sowohl die akuten als auch die anhaltenden Heilungsprozesse zu untersuchen. Betäuben Sie das Tier für kurze Zeit und bringen Sie es mit einem Nasenkonus in Rückenlage (Isofluran 2-5 L/min). Entfernen Sie die vorherigen Verbände und reinigen Sie die Wunden mit steriler 0,9%iger Kochsalzlösung und steriler Gaze. Wenden Sie gegebenenfalls die experimentelle Behandlung an. Führen Sie während dieses Verfahrens in ähnlicher Weise nachfolgende Biopsien durch, falls dies für die Studie erforderlich ist. Das Tier sollte dann Schmerzmittel wie Carprofen (2-4 mg/kg, IM, 24 h Wirkung) erhalten. Decken Sie alle Wundstellen, einschließlich Kontrollwunden, mit erdölimprägnierter oder gleichwertiger Gaze, trockener Vliesgaze und transparentem Klebeverband ab.

Representative Results

Abbildung 2A,B zeigt die Ergebnisse mehrerer Verbrennungen am Rücken eines Yucatàn-Minischweins. Die Wunden (I) und (VII) sind Kontrollwunden (37 °C). Wunden zweiten Grades (II; III und VIII) zeigen sich mit starken Rötungen und Bläschen. Im Gegensatz dazu sind Wunden dritten Grades (IV; V; und VI) sind blaß und bis zum Abtasten verhärtet. Es ist zu beachten, dass Wunde VIII zwischen dem zweiten und dritten Grad liegt: Für die Zwecke…

Discussion

Die Wundheilung nach Brandverletzungen ist ein langwieriger Prozess, der bis zu mehreren Monaten dauern kann, mit verschiedenen Behandlungsoptionen und Überlegungen zur Patientenversorgung 2,13. Um es zu untersuchen, wird ein zuverlässiges und reproduzierbares Modell benötigt. Es wurden mehrere Tiermodelle beschrieben, darunter hauptsächlich Nagetiere 29,45,46</s…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Arbeit wurde mit großzügigen Mitteln aus dem Shriners Children’s Research Grant an S.N.T. Y.B. wurde vom Shriners Hospital for Children unterstützt. Wir danken auch für die Finanzierung von S.N.T. durch das US National Institute of Health (K99/R00 HL1431149; R01HL157803; R01DK134590, R24OD034189), American Heart Association (18CDA34110049), Harvard Medical School Eleanor and Miles Shore Fellowship, Polsky Family Foundation und der Claflin Distinguished Scholar Award im Namen der MGH Department of Surgery und/oder des MGH Executive Committee on Research. Darüber hinaus danken wir dem Massachusetts General Hospital Executive Committee of Research für die Verleihung des Fund for Medical Discovery (FMD)-Preises an R.J. Schließlich wird die Unterstützung von Y.B. durch die “Fondation des Gueules Cassées” (Frankreich), die Universität Rennes (Frankreich), das CHU de Rennes (Frankreich) und die Französische Gesellschaft für Plastische Chirurgie sehr geschätzt. Die Autoren danken dem Knight Surgery Research Laboratory für seinen Beitrag und seine Hilfe bei der Anästhesie der Tiere.

Materials

Adson tissue forceps Jarit 130-234
Aluminum beads Lab Armor 42370-002 Lab Armor Beads 
Buprenorphine hydrochloride Ranbaxy Pharmaceuticals NDC:12469-0757-01 Buprenex Injectable
Carprofen Pfizer NADA 141-199 Rymadyl 50mg/ml injectable 
Cylindric brass block Hand-made N/A Engineering drawing included in the manuscript
Dermographic pen McKesson Surgical Skin Marker Sterile
Disposable #15 surgical scalpels Medline MDS15315 Scalpel blades
Fentanyl patch Mylan NDC:60505-7082 Fentanyl Transdermal System
Isoflurane  Piramal NDC:66794-013-25 Isoflurane, USP
McPherson Bipolar coagulation forceps Bovie A842 Reusable, autoclavable
Miltex assorted biopsy punches (3,4 and 5 mm) Integra 33-38 Biopsy punches- size to adapt to the study
Non woven gauze Starryshine GZNW22 2 x 2" non woven 4 ply medical gauze pads
Povidone-Iodine Betadine NDC:0034-9200-88 Surgical scrub 7.5% 
Sterile isotonic sodium chloride solution 0.9% Aqualite System RL-2095 Sterile saline solution
Tattoo ink Spaulding & Rogers Black – 2 oz – #9053
Tattoo marker Spaulding & Rogers Special Electric Tattoo Marker
Tattoo needle Spaulding & Rogers 1310251 Tattoo 5 point needle
Tegaderm Transparent Film Dressing 3M 1.628 Large transparent adhesive dressing
Temperature-controlled hot plate Cole-Parmer 03407-11 StableTemp hot plate stirrer
Thermometer American Scientific U14295 Tube mercury thermometerr
Tiletamine and zolazepam hydrochloride Zoetis NDC:54771-9050 Telazol
Tincture of Benzoin Spray Smith&Nephew 407000 Adhesive layer spray
Triple Antibiotic ointment Fougera NDC 0168-0012-31 Triple antibiotic ointment
Tubular stockinette Medline NONNET02 Curad Medline Latex Free Elastic Nets
Warming blanket 3M Bair Hugger 750 warming unit
Xeroform Occlusive Gauze Strip Covidien 8884433301 Xeroform petrolatum wound dressings
Xylazine Vetone NDC:13985-704-10 AnaSed LA
Yucatàn minipigs (female, 30 kg) Sinclair Bio Resources N/A Full pigmentation 

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