Summary

Gefäßrekonstruktion mit der Manschettentechnik bei der orthotopen Lebertransplantation der Maus

Published: December 01, 2023
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Summary

Dieses Protokoll enthält technische Informationen für die Gefäßrekonstruktion mit der Manschettentechnik bei der orthotopen Lebertransplantation der Maus.

Abstract

Die orthotope Lebertransplantation der Maus ist eine effektive Methode zur Untersuchung der zugrundeliegenden Mechanismen von Leberischämie und Reperfusionsschäden. Die technischen Herausforderungen stellen jedoch ein Hindernis dar, um dieses wertvolle experimentelle Modell zu nutzen und diese Fähigkeiten an die nächste Generation weiterzugeben. Der schwierigste Aspekt dieses Eingriffs ist die Gefäßrekonstruktion, einschließlich der Pfortader (PV), der infrahepatischen unteren Hohlvene (IHIVC) und der suprahepatischen unteren Hohlvene. Die Verwendung von Kunststoffmanschetten anstelle von Nähten ermöglicht eine reibungslosere PV- und IHIVC-Rekonstruktion. Bei der Rekonstruktion der Gefäße wird eine Manschette aus einem intravenösen Katheter an der Spitze des Transplantatgefäßes befestigt und die Manschette in das Empfängergefäß eingesetzt. Die beiden wichtigsten Aspekte sind die richtige Visualisierung des inneren Lumens des Gefäßes und die Vermeidung übermäßiger Krafteinwirkung. Unser Ziel ist es, einen technischen Überblick über Gefäßrekonstruktionen mit der Manschettentechnik in der Empfängerchirurgie zu geben. Diese technischen Tipps für die Manschettentechnik sollen Mikrochirurgen dabei helfen, die Gefäßrekonstruktion zu erleichtern und ihre Forschung voranzutreiben.

Introduction

Die orthotope Lebertransplantation (MOLT) der Maus ist eine wirksame experimentelle Methode, über die erstmals 1991 berichtetwurde 1. Dieses experimentelle Modell, das genetisch veränderte Mäuse und verschiedene Forschungsreagenzien verwendet, hat eine entscheidende Rolle bei der Untersuchung von warmer und kalter Ischämie und Reperfusionsverletzungen gespielt. Die hohe technische Komplexität des Modells hat jedoch die Entwicklung einer Basismedizin für die Lebertransplantation behindert2. Die MOLT umfasst drei Hauptschritte: (1) die Entnahme der Leber aus der Spendermaus, (2) die Operation am Rückentisch und (3) die Implantation der Leber in den Empfänger. Unter diesen Empfängerverfahren stellt die vaskuläre Anastomose die größte Herausforderung dar. Während die suprahepatische Anastomose der unteren Hohlvene typischerweise durch eine Handnahtvervollständigt wird 2, können die infrahepatische untere Hohlvene (IHIVC) und die Pfortader (PV) mit Kunststoffmanschetten anstelle von handgenähten Nähten effizienter rekonstruiert werden.

Die anhepatische Periode bezeichnet das Intervall zwischen der Entnahme der nativen Leber des Empfängers und der Implantation des Transplantats. Um konsistente Ergebnisse zu gewährleisten, ist es zwingend erforderlich, die anhepatische Zeit auf weniger als 20 Minuten zu begrenzen. Folglich wurden Studien, die dieses Modell anwendeten, aufbestimmte Institutionen beschränkt 3,4,5,6,7,8,9. Unter den verschiedenen Stadien der MOLT ist eine reibungslose PV- und IHIVC-Rekonstruktion entscheidend, um die anhepatische Zeit zu minimieren und eine erfolgreiche Transplantation zu gewährleisten.

Die PV- und IVC-Rekonstruktion wird in der Regel mit Hilfe von Gefäßmanschetten durchgeführt, da die Manschettentechnik die Gefäßanastomose im Vergleich zu handgenähten Nähten vereinfacht 2,5,8. Die Technik, die mit der Vorbereitung der Gefäßmanschette und der sicheren Befestigung der Manschette verbunden ist, hat einen erheblichen Einfluss auf die Komplexität der Gefäßrekonstruktion des Empfängers. Unser Ziel ist es, eine detaillierte visuelle Anleitung für zahlreiche technische Tipps im Zusammenhang mit der Manschettenmethode zu geben und so die Lernkurve zu verkürzen. Diese Videoclips vermitteln ein klares Verständnis dafür, wie die Manschette an den Gefäßen befestigt und die PV und IHIVC während der Empfängeroperation rekonstruiert werden.

Protocol

Das Versuchsprotokoll wurde vom Tierversuchsausschuss der Universität Kyoto genehmigt. In der Studie wurden C57BL/6-Mäuse verwendet, die über 10 Wochen alt waren und zwischen 25 g und 30 g wogen, die aus einer kommerziellen Quelle gewonnen wurden (siehe Materialtabelle). Alle Tiere wurden mit 2,5 % Isofluran betäubt (nach institutionell anerkannten Protokollen), unter spezifischen pathogenfreien Bedingungen gehalten, und alle experimentellen Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den Tierversuchsvo…

Representative Results

Die PV-Rekonstruktion ist erfolgreich, wenn beim Lösen der Pfortader keine Tortuosität auftritt und die Leber gleichmäßig durchblutet ist. Die anhepatische Zeit sollte unter 20 Minuten liegen, da anhepatische Zeiten von mehr als 25 Minuten das Mortalitätsrisiko bei Mäusen erhöhen. Die IHIVC-Rekonstruktion gilt als erfolgreich, wenn keine Blutinsuffizienz aus dem Transplantat vorliegt. Die Lagerung des Transplantats bei kalten Temperaturen für 1 h mit Organkonservierungslösung führt z…

Discussion

Das Erlernen der Gefäßrekonstruktion ist der schwierigste Aspekt auf dem Weg zu einem erfolgreichen MOLT. Die Qualität der Manschette hat einen erheblichen Einfluss auf die Schwierigkeit der Rekonstruktion, da die Größe der Mäusegering ist 5. Dieser Artikel enthält ein detailliertes Protokoll für die Vorbereitung, Befestigung und Rekonstruktion der Manschette.

Obwohl es keine großen Unterschiede zu früheren Berichten bezüglich der Manschettenpräparation und …

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Arbeit wurde durch die JST-Grundlagenforschung 2022 (The Japanese Society for Transplantation) unterstützt.

Materials

16 G intravenous catheter TERUMO SR-FF2032 IHIVC cuff
20 G intravenous catheter TERUMO SR-FF1651 PV cuff
8-0 braid silk Natsume Seisakusho CR9-80B2 8-0 silk
Belzer UW Cold Storage Solution  Astellas Organ preservation fluid
Bulldog clamp B BRAUN FB329R Bulldog clamp
C57BL/6 mice   Oriental Bio Service
Isoflurane inhalation solution Viatris Anesthesic
Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm  F.S.T 11253-20 Straight microforceps
Micro Serrefine Clamp Applicator with Lock F.S.T 18056-14 Vessel clip applicator
Micro Serrefines  F.S.T 18055-4 Vessel clip
No.11 Spare Blades FEATHER Safety Razor 11 Blades
Ophthalmic scissor, round handle B BRAUN FD103R Microscissor
Plastic rectangular-shaped container   Daiso 10 cm long, 15 cm wide and 6 cm high
SuperGrip Tips F.S.T 00649-11  Curved microforceps
SZX7 Olympus SZX7 Microscope

Referenzen

  1. Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
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Diesen Artikel zitieren
Tanaka, K., Uchida, Y., Kageyama, S., Nakamura, K., Hirao, H., Kadono, K., Kawamoto, H., Saga, K., Kidoguchi, Y., Watanabe, T., Hatano, E. Vascular Reconstruction with the Cuff Technique in Mouse Orthotopic Liver Transplantation. J. Vis. Exp. (202), e66215, doi:10.3791/66215 (2023).

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