Summary

En modifierad transkraniell ocklusionsmodell för mellersta hjärnartären för att studera strokeresultat hos åldrade möss

Published: May 05, 2023
doi:

Summary

Detta protokoll demonstrerar en unik musslagsmodell med en medelstor infarkt och en utmärkt överlevnadsgrad. Denna modell gör det möjligt för prekliniska strokeforskare att förlänga ischemins varaktighet, använda åldrade möss och bedöma långsiktiga funktionella resultat.

Abstract

I experimentell strokeforskning används mellersta cerebral artärocklusion (MCAO) med ett intraluminalt filament i stor utsträckning för att modellera ischemisk stroke hos möss. Filament MCAO-modellen uppvisar vanligtvis en massiv hjärninfarkt hos C57Bl/6-möss som ibland inkluderar hjärnvävnad i det territorium som tillhandahålls av den bakre hjärnartären, vilket till stor del beror på en hög förekomst av bakre kommunicerande artäratresi. Detta fenomen anses vara en viktig bidragande orsak till den höga dödlighet som observerats hos C57Bl/6-möss under långvarig återhämtning efter filament MCAO. Således utnyttjar många studier av kronisk stroke distala MCAO-modeller. Dessa modeller ger dock vanligtvis bara infarkt i cortex-området, och följaktligen kan bedömningen av neurologiska brister efter stroke vara en utmaning. Denna studie har etablerat en modifierad transkraniell MCAO-modell där MCA vid bålen delvis är ockluderad antingen permanent eller tillfälligt via ett litet kranialfönster. Eftersom ocklusionsplatsen är relativt proximal till MCA:s ursprung, genererar denna modell hjärnskador i både cortex och striatum. Omfattande karakterisering av denna modell har visat en utmärkt långtidsöverlevnad, även hos åldrade möss, samt lätt detekterbara neurologiska brister. Därför representerar MCAO-musmodellen som beskrivs här ett värdefullt verktyg för experimentell strokeforskning.

Introduction

Nästan 800 000 människor drabbas av stroke i USA varje år, och de flesta av dessa stroke är ischemiskatill sin natur. Snabb återställning av det cerebrala blodflödet med vävnadsplasminogenaktivator (tPA) och/eller trombektomi är för närvarande den mest effektiva behandlingen för strokepatienter. Fullständig återhämtning av neurologiska funktioner på lång sikt är dock sällsynt 2,3. Att söka efter ny strokebehandling som syftar till funktionell förbättring är därför ett intensivt forskningsområde som kräver kliniskt relevanta djurmodeller av stroke.

Den vanligaste ischemiska strokemodellen hos gnagare använder intraluminal mellersta cerebral artärocklusion (MCAO) för att inducera stroke. I denna modell, som ursprungligen utvecklades av Zea Longa 1989, förs ett nylonfilament in i den inre halspulsådern (ICA) för att blockera blodflödet till den mellersta hjärnartären (MCA)4. Den här modellen har dock begränsningar. För det första, när filamentet sätts in i ICA, kan blodflödet till den bakre hjärnartären (PCA) också delvis blockeras, särskilt hos möss. Den bakre kommunicerande artären (PcomA), en liten artär som förbinder främre och bakre hjärncirkulationen, är ofta underutvecklad hos vissa musstammar, såsom C57Bl/6, den stam som främst används i experimentell strokeforskning. Denna patens hos PcomA tros bidra till variationen i lesionsstorlek hos möss efter stroke5. Faktum är att när blodflödet till PCA sjunker brant under MCAO, och PcomA inte kan ge tillräckligt kollateralt blodflöde, kan strokeinfarkten expandera till PCA:s territorium. Dessutom, i denna modell, leder en lång varaktighet av ischemi till en högre risk för dödlighet hos möss. Följaktligen används vanligtvis en kort MCAO-varaktighet på 30-60 minuter på möss. De flesta strokepatienter upplever dock några timmars ischemi före reperfusionsbehandling. Således är en musslagmodell med förlängd varaktighet av ischemi av hög klinisk relevans.

Det övergripande målet med denna procedur är att modellera ischemisk stroke hos möss som har en medelstor infarkt och en utmärkt överlevnadsgrad. Denna transkraniella MCAO-modell adresserar kritiska attribut för klinisk stroke, eftersom långvarig ischemi kan utföras, och åldrade möss tolererar denna modell väl, vilket möjliggör långsiktig bedömning av funktionell återhämtning.

Protocol

Alla procedurer som beskrivs i detta arbete utförs i enlighet med NIH:s riktlinjer för vård och användning av djur i forskning, och protokollet godkändes av Duke Institute Animal Care and Use Committee (IACUC). Unga (8-10 veckor gamla) och åldrade (22 månader gamla) C57Bl/6-hanmöss användes för den aktuella studien. En översikt över detta protokoll illustreras i figur 1. 1. Kirurgisk förberedelse Undersök musen för grova a…

Representative Results

Med en direkt vy under ett kirurgiskt mikroskop kan det visuellt bekräftas att MCA-blodflödet blockeras under ischemi. Vår tidigare studie visade en minskning av blodflödet med >80 % i det ischemiska området med hjälp av en laserdopplermonitor6. För att bestämma förändringar i blodflödet efter MCAO kan LSCI användas för att ytterligare bekräfta den ischemiska förolämpningen och reperfusionen (Figur 1). I figur 3A observera…

Discussion

Den första transkraniella MCA-ocklusionsmodellen etablerades hos råttor 198111,12 och ersattes av den icke-kraniektomi MCAO-modellen 19894. Den initiala transkraniella MCA-ocklusionen hade ett brett kirurgiskt fält, så att hela den zygomatiska bågen togs bort och musklerna drogs i sidled. Lokala vävnader svullnade upp efter operationen, vilket orsakade stress och minskat födointag för djuren. I vår modifierade transkraniella MCAO-…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Författarna tackar Kathy Gage för hennes redaktionella stöd. Schemafigurer skapades med BioRender.com. Denna studie stöddes av medel från Department of Anesthesiology (Duke University Medical Center) och NIH-anslag (NS099590, HL157354, NS117973 och NS127163).

Materials

0.25% bupivacaine Hospira NDC 0409-1159-18
0.9% sodium chloride ICU Medical NDC 0990-7983-03
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC)  Sigma or any available vendor
20 G IV catheter BD 381534 20 GA 1.6 IN
30 G needle BD 305106
4-0 silk suture Look SP116 Black braided silk
8-0 suture with needle  Ethilon 2822G
Alcohol swabs BD 326895
Anesthesia induction box Any suitable vendor Pexiglass make 
Electrical grinder JSDA JD 700
High temperature cautery loop tip Bovie AA03
Isoflurane Covetrus NDC 11695-6777-2
Laser doppler perfusion monitor Moor Instruments moorVMS-LDF1
Lubricant eye ointment Bausch + Lomb 339081
Mouse rectal probe Physitemp RET-3
Nitrous Oxide Airgas UN1070
Otoscope Welchallyn 728 2.5 mm Speculum
Oxygen Airgas UN1072
Povidone-iodine CVS 955338
Recovery box Brinsea  TLC eco
Rimadyl (carprofen) Zoetis 6100701 Injectable 50 mg/mL
Rodent ventilator Harvard Model 683
Temperature controller Physitemp TCAT-2DF 
Triple antibioric & pain relief CVS NDC 59770-823-56
Vaporizer RWD R583S

Referenzen

  1. Tsao, C. W., et al. Heart disease and stroke statistics-2022 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 145 (8), e153 (2022).
  2. Nogueira, R. G., et al. Thrombectomy 6 to 24 hours after stroke with a mismatch between deficit and infarct. The New England Journal of Medicine. 378 (1), 11-21 (2018).
  3. Fisher, M., Savitz, S. I. Pharmacological brain cytoprotection in acute ischaemic stroke-renewed hope in the reperfusion era. Nature Reviews Neurology. 18 (4), 193-202 (2022).
  4. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  5. Knauss, S., et al. A semiquantitative non-invasive measurement of PcomA patency in C57BL/6 mice explains variance in ischemic brain damage in filament MCAo. Frontiers in Neuroscience. 14, 576741 (2020).
  6. Yang, Z., et al. Post-ischemia common carotid artery occlusion worsens memory loss, but not sensorimotor deficits, in long-term survived stroke mice. Brain Research Bulletin. 183, 153-161 (2022).
  7. Wang, Z., et al. Increasing O-GlcNAcylation is neuroprotective in young and aged brains after ischemic stroke. Experimental Neurology. 339, 113646 (2021).
  8. Jiang, M., et al. XBP1 (X-box-binding protein-1)-dependent O-GlcNAcylation Is neuroprotective in ischemic stroke in young mice and its impairment in aged mice is rescued by thiamet-G. Stroke. 48 (6), 1646-1654 (2017).
  9. Li, X., et al. Single-cell transcriptomic analysis of the immune cell landscape in the aged mouse brain after ischemic stroke. Journal of Neuroinflammation. 19 (1), 83 (2022).
  10. Li, X., et al. Beneficial effects of neuronal ATF6 activation in permanent ischemic stroke. Frontiers in Cellular Neuroscience. 16, 1016391 (2022).
  11. Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. Focal cerebral ischaemia in the rat: 2. Regional cerebral blood flow determined by [14C]iodoantipyrine autoradiography following middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 1 (1), 61-69 (1981).
  12. Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 1 (1), 53-60 (1981).

Play Video

Diesen Artikel zitieren
Sheng, H., Dang, L., Li, X., Yang, Z., Yang, W. A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice. J. Vis. Exp. (195), e65345, doi:10.3791/65345 (2023).

View Video