Summary

알레르기성 접촉성 피부염 평가를 위한 마우스 귀 모델

Published: March 24, 2023
doi:

Summary

여기에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)에 의해 마우스 귀에 알레르기성 접촉성 피부염을 유도하는 방법과 알레르기성 접촉성 피부염의 중증도를 평가하는 방법을 설명합니다.

Abstract

피부는 인체의 첫 번째 방어선이며 환경 화학 물질에 가장 많이 노출되는 기관 중 하나입니다. 알레르기성 접촉 피부염(ACD)은 국소 발진, 발적 및 피부 병변으로 나타나는 흔한 피부 질환입니다. ACD의 발생과 발달은 유전적 요인과 환경적 요인의 영향을 받습니다. 최근 몇 년 동안 많은 학자들이 일련의 ACD 모델을 구축했지만 이러한 모델의 실험 프로토콜이 모두 다르기 때문에 독자가 잘 확립하기가 어렵습니다. 따라서 안정적이고 효율적인 동물모델은 아토피성 피부염의 발병기전을 더 연구하는데 큰 의미가 있다. 이 연구에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)을 사용하여 생쥐의 귀에 ACD 유사 증상을 유도하는 모델링 방법을 자세히 설명하고 모델링 중 피부염의 중증도를 평가하는 몇 가지 방법을 설명합니다. 이 실험 프로토콜은 일부 실험에 성공적으로 적용되었으며 ACD 연구 분야에서 특정 판촉 역할을 합니다.

Introduction

알레르기성 접촉성 피부염(ACD)은 접촉 부위의 습진과 유사한 증상, 중등도의 경우 부종 및 홍반, 심한 경우 구진, 미란, 삼출 또는 다량의 흉터를 특징으로 하는 흔한 피부 질환입니다1. 인구의 최대 20%에 영향을 미치며 모든 연령대의 사람들에게 영향을 미칠 수 있습니다2. ACD는 알레르겐에 반복적으로 노출된 사람에게서 자주 발생하며, 가정이나 직장에서 하나 이상의 알레르겐에 대한 개인의 면역 반응으로 인해 발생할 수 있다3. IV형 지연성 과민증은 ACD4에서 주요 유형의 면역 반응으로 간주됩니다. 알레르겐에 반복적으로 노출된 피부 부위에서는 순환 기억 T 세포가 다량으로 축적되어 면역 및 염증 반응을 유도한다 3,5,6. 이 연구의 목적은 ACD 발병에서 면역학적 및 염증 반응에 대한 추가 조사를 위한 신뢰할 수 있는 실험실 기술을 제안하는 것입니다.

ACD의 발병은 일반적으로 화학 물질에 반복적으로 노출되어 발생하는 접촉 과민증으로 인한 것입니다. 많은 연구자들이 질병의 발병을 시뮬레이션하기 위해 지난 수십 년 동안 집 쥐 7,8, 기니피그 9,10 및 기타 동물에서 다양한 ACD 동물 모델을 개발했습니다. 대부분의 실험 방법은 복부 감작 (유도)과 등 또는 귓불에 자극 제공 (자극)의 두 단계로 구성됩니다. 일반적으로 사용되는 화학 물질은 주로 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)/1-클로로-2,4-디니트로벤젠(DNCB)8,9,11, 옥사졸론12, 우루시올 13 등을 포함합니다. 그 중 DNFB와 DNCB가 가장 널리 사용되며 1958년 10월10일에 처음 보고되었습니다. 니켈 감작 모델(14)과 광알레르기성 접촉 피부염 모델(15)도 자주 사용된다.

ACD 모델을 구축하기 위한 실험적 방법을 제시한다. 이 방법은 이전 연구 및 여러 실험과의 비교를 기반으로 요약되고 최적화됩니다. 다른 ACD 모델과 비교할 때 이 모델은 작은 개인차, 짧은 실험 기간, 소량의 화학적 자극 등과 같은 몇 가지 장점이 있습니다. 또한, 이 연구는 경제적일 뿐만 아니라 유전자 녹아웃 또는 형질전환 마우스 준비에 대한 더 많은 옵션을 가지고 있는 마우스에 적용할 수 있다16. 또한 귀 두께 측정, 염증 삼출물 측정을 위한 Evans blue 염료 사용 등과 같이 실험에서 ACD 진행을 모니터링하는 데 사용되는 다양한 방법을 설명합니다. 이 모델은 ACD의 발병기전을 탐색하기 위해 실험실 수단으로 마우스 귀, 혈액, 비장 및 기타 샘플을 분석할 수 있을 뿐만 아니라 특정 판촉 의미가 있는 새로운 치료 방법의 전임상 평가에도 적용할 수 있습니다.

Protocol

생쥐의 모든 관리 및 치료는 Yangzhou University의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 수립한 지침에 따라 이루어졌으며 프로젝트 라이선스 SYXK(SU)2022-0044에 따라 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다. 이 연구에는 6-8주령의 BALB/c 수컷 및 암컷 마우스가 사용되었습니다. 각 그룹은 6마리의 마우스로 구성되었습니다( 재료 표 참조). 케이지는 음식과 물에 자유롭게 접근할 수…

Representative Results

반복적인 DNFB 자극 하에서 DNFB 그룹의 마우스 귀는 ACD에 필적하는 명백한 임상 증상을 보였으며 민감한 부위는 발적, 건조, 심지어 미란 및 삼출의 전형적인 증상을 보였습니다. 그러나 순수(대조군) 또는 용매 대조군(비히클 그룹)의 귀 투여는 유사한 증상을 나타내지 않았습니다(그림 4). 한편, DNFB 그룹에서는 치료되지 않은 오른쪽 귀에 비해 DNFB 자극 ?…

Discussion

마우스의 귀에서 ACD 유사 증상을 유도하기 위해 여기에 설명된 프로토콜은 ACD의 병태생리학을 연구하고 신약 개발을 위한 스크리닝 도구로 사용할 수 있습니다.

ACD 모델을 확립하는 데는 초기 감작과 후속 자극의 두 가지 주요 단계가 있습니다. 복부는 일반적으로 초기 감작 부위이지만 후속 자극 부위는 약간 다르게 선택되었습니다. 이전 연구에 따르면 대부분의 학자들은 ?…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC)이 N.-N.에 지원했습니다. Y. (81904212); 장쑤 성 중국 전통 의학 과학 기술 프로젝트 (YB201995); 중국 박사후 연구원을 위한 특별 자금 지원 프로젝트(2020T130562).

Materials

1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) Merck 200-734-3 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99%
Acetone Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD 10000418 ≥99.5%
Aluminum foil  Cleanwrap CF-2
Evans blue dye Solarbio 314-13-6 Dye content approx. 80%
Mouse fixator ZHUYANBANG GEGD-SM1830
Olive oil Solarbio 8001-25-0 500 ml
Pipet tip Biofount FT-200 10 – 200 μl
Pipettor Eppendorf AG 3123000250 20 – 200 μl
Razor blade Shanghai Gillette Co. LTD 74-S
Vernier calipers Delixi Electric DECHOTVCS1200

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Diesen Artikel zitieren
Shao, H., Deng, J., Liu, Y., Yang, N. A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation. J. Vis. Exp. (193), e65120, doi:10.3791/65120 (2023).

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