Isolement et quantification du virus d’Epstein-Barr à partir de la lignée cellulaire P3HR1

Le virus d’Epstein-Barr (EBV) est le premier virus tumoral humain à avoir été isolé¹. Le VEB, officiellement appelé herpèsvirus humain 4 (HHV-4)², fait partie de la sous-famille des virus de l’herpès gamma de la famille des virus de l’herpès et est le prototype du genre Lymphocryptovirus. Près de 90 à 95% de la population adulte mondiale est infectée par le virus³. Dans la plupart des cas, l’infection initiale survient au cours des 3 premières années de vie et est asymptomatique, cependant, si l’infection survient plus tard au cours de l’adolescence, elle peut donner lieu à une maladie appelée mononucléose infectieuse⁴. Le VEB est capable d’infecter les lymphocytes B au repos, les incitant à devenir des lymphoblastes B prolifératifs dans lesquels le virus établit et maintient un état d’infection latente⁵. Le VEB peut se réactiver à tout moment et ainsi entraîner des infections récurrentes⁶.

Au cours des 50 dernières années, l’association entre certains virus et le développement de tumeurs malignes humaines est devenue de plus en plus évidente, et on estime aujourd’hui que 15% à 20% de tous les cancers humains sont liés à des infections virales⁷. Les virus de l’herpès, y compris EBV, sont parmi les exemples les mieux étudiés de ces types de virus tumoraux⁸. En fait, le VEB peut causer de nombreux types de tumeurs malignes humaines, comme le lymphome de Burkitt (LB), le lymphome hodgkinien (LH), le lymphome diffus à grandes cellules B et les maladies lymphoprolifératives chez les hôtes immunodéprimés ^9,10. Il a également été démontré que le VEB est associé au développement de maladies auto-immunes systémiques. Quelques exemples de ces maladies auto-immunes sont la polyarthrite rhumatoïde (PR), la polymyosite-dermatomyosite (PM-DM), le lupus érythémateux disséminé (LED), la maladie mixte du tissu conjonctif (MCTD) et le syndrome de Gougerot-Sjögren (SS)¹¹. Le VEB est également associé au développement d’une maladie inflammatoire de l’intestin (MII)¹².

Bon nombre de ces maladies peuvent être étudiées ou modélisées à l’aide de cultures cellulaires, de souris ou d’autres organismes infectés par le VEB. C’est pourquoi les particules EBV sont nécessaires pour infecter des cellules ou des organismes, que ce soit in vitro ou in vivo modèles^13,14,15,16, d’où la nécessité de développer une technique permettant d’isoler les particules virales à faible coût. Le protocole décrit ici fournit des lignes directrices pour un moyen facile d’isoler de manière fiable les particules EBV d’une lignée cellulaire relativement accessible et de quantifier les particules en utilisant la PCR en temps réel, qui est rentable et facilement disponible pour la plupart des laboratoires. Ceci est en comparaison avec plusieurs autres méthodes qui ont été décrites pour isoler le VEB de différentes lignées cellulaires^17,18,19,20.

P3HR-1 est une lignée cellulaire BL qui se développe en suspension et est infectée de manière latente par une souche EBV de type 2. Cette lignée cellulaire est productrice d’EBV et peut être induite à produire des particules virales. L’objectif de ce manuscrit est de présenter une méthode qui permet d’isoler les particules d’EBV de la lignée cellulaire P3HR-1, suivie d’une quantification du stock viral qui pourrait ensuite être utilisée pour des modèles expérimentaux de VEB in vitro et in vivo .