임상 관련성 및 메커니즘을 검사 하는 연구에 대 한 모델을 사용 하 여 쥐에 짧은 기간 저온증 유도

모든 실험 절차는 과학적 목적을 위해 동물의 관리 및 사용을위한 호주 관행 규범에 따라 뉴캐슬 대학의 동물 관리 및 윤리위원회 (A-2013-343 및 A-2020-003)에 의해 승인되었습니다. 아래에 설명된 저체온증 유도 방법 외에도, 다음과 같은 프로토콜은 저체온증과 함께 일상적으로 수행됩니다: 혈압과 심박수를 모니터링하는 대모랄 라인캐너레이션(21)및 실험적인뇌졸중(22). 1. 데이터로거 이식 참고: 이 프로토콜에 사용된 데이터로거 장치는 체온을 실시간으로 판독할 수 없었습니다. 데이터 로거가 동물에서 제거되고 컴퓨터에 다시 연결되면 판독이 가능합니다. 그 결과, 직장 온도 프로브는 냉각 및 재웜 과정에서 실시간 정보를 제공하는 데 사용됩니다. 또한, 직장 프로브는 또한 이 방법에 필수적이다 때문에 수술 중에 동물이 배치되는 수술 열 매트는 직장 프로브 시스템에 의해 조절되기 때문이다. datalogger는 또한 자유롭게 움직이는, 깨어 있는 쥐에 있는 온도 데이터를 제공하는 귀중한 목적을 제공하고 정규 화 후 정상 체온이 유지되도록 하는 데 중요합니다. 따라서 이 프로토콜에는 두 온도 모니터링 장치가 모두 중요합니다. 50% N2 및 50% O2 혼합물에서 이소플루란(유도용 5%, 유지 보수의 경우 2-2.5%)을 가진 10-12주 된 남성 외식 위스타 쥐를 마취시합니다. 유도에 따라, 수술 열 매트에 경향이 위치에 쥐를 배치합니다. 코가 코 콘에 앉아 있도록 쥐를 배치합니다. 수술용 테이프로 코를 고정하여 가스가 빠져나가지 않도록 하십시오. 오른쪽 아래 복부에서 털을 면도하고 국소 마취제, 부피바카인 0.2 mL, 0.05 %로 피하 부위를 피하한다. 갓 면도된 부위에 방부제 용액을 적용합니다. 살균 수술 도구를 사용하여 오른쪽 허벅지에 근접한 오른쪽 복부 부위를 따라 2cm 세로 절개를 합니다. 복부 허벅지 주름의 공간을 노출할 수 있을 만큼 절개를 깊게 만듭니다. hemostats와 집게를 사용하여 장치를 보유 할 만큼 큰 피부 아래에 ‘포켓’을 만듭니다. 온도 모니터링 데이터로거 장치를 주머니에 넣고 5-0 실크 봉합사를 사용하여 근육과 피부를 닫습니다. 여기에 기재된 피하 방법은 덜 침습적이고 절차 후 더 나은 회복을 허용하기 때문에 복막 내 방법에 바람직하다. 온도 모니터링을 위해 데이터 로거와 직장 프로브가 교차 보정되었는지 확인합니다(토론 참조). 데이터 로거가 삽입 후 동물의 열 매트에 대해 쉬지 않도록 하십시오. 도 1: 데이터로거 장치의 이식. (A)왼쪽에서 오른쪽으로 패널이 쥐의 하복부 의 오른쪽에 약 2cm의 절개를 표시한다. (B)온도 모니터링 데이터로거는 포켓 절개에 피하삽입하였다. (C)절개는 나일론 봉합사로 닫혔다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 2. 기계학 연구를위한 활성 (빠른) 저체온증의 유도 저체온증을 위해 설정합니다(그림 2참조). 쥐의 몸 의 양쪽에 클램프가있는 두 개의 레토르트 스탠드를 놓습니다. 60mm 12 v/130 mA 팬을 각 레토르트 스탠드에 부착하여 팬이 쥐의 허리를 향하도록 합니다. 클램프와 쥐 사이의 거리는 약 20cm입니다. 사용된 팬의 속도는 4,000rpm이어야 합니다. 옆면이나 세 번째 레토르트 스탠드에 동물 열램프를 준비하십시오. 원하는 대상 온도에 동물 열 매트를 조정 하 여 저체온증을 시작 합니다. 이 예에서, 32.5°C는 목표 온도(온도 제어 부상에서 3.75)이다. 두 팬을 켜고 쥐의 허리에 70 % 에탄올 (표준 플라스틱 스프레이 병)의 3 ~ 4 스프레이를 적용합니다. 더 빠른 냉각 유도를 위해 살포 할 때 동물 모피를 주름.참고: 에탄올은 증발 속도가 빠르기 때문에 물에 비해 바람직한 용액으로 사용되므로 더 빠른 저체온증 유도가 발생합니다. 이는 목표 온도의 과다 촬영에 기여할 수 있기 때문에 모피를 과포화하지 않도록 주의하십시오.참고: 팬들은 에탄올 증발및 냉각 공정을 가속화합니다. 쥐의 직장 온도를 주시하면서 에탄올 응용 프로그램 사이의 짧은 간격을 허용합니다. 직장 온도가 목표 온도의 1 °C 이내로 도달하면 에탄올의 추가 적용을 중단하십시오. 온도가 목표 온도의 0.5 °C 이내에 도달하면 두 팬을 끕니다 (이 경우 33 °C).참고: 대상 온도에 도달하기 전에 팬을 끄면 쥐가 필요한 온도를 초과하여 과냉각되는 것을 방지할 수 있습니다. 온도가 32.5 °C로 떨어지도록 합니다. 과냉각이 발생하면 동물 열램프를 사용하여 동물을 다시 대상으로 약간 따뜻하게 하십시오. 한 팬의 도움으로 인해 오버슈트가 다시 발생하지 않도록 할 수 있습니다. 목표 온도에 도달하고 안정화되면 온도를 계속 모니터링합니다. 온도는 일반적으로 살포, 팬 의 사용 또는 열 램프의 사용없이 저체온증 기간의 나머지 부분에 대한 매우 안정적으로 유지됩니다. 저체온증의 끝에서 동물을 다시 데우기 위해 열 매트 온도를 다시 37 °C (이 예에 사용되는 온도 제어 장치에 6)로 조정하고 동물이 30 분 동안 열조절을 할 수 있도록합니다.참고: 온도 제어 장치의 온도 설정은 다를 수 있으므로 개별 장치에서 대상 저체온증 및 normothermia에 대한 설정을 결정해야 할 수 있습니다. 3. 활성 피부 냉각 없이 임상적으로 달성 가능한 점진적 발병 저체온증의 유도 필요한 목표 온도로 작은 증분에서 주부열 매트를 규제하는 코어 온도의 온도를 감소시킴으로써 저체온증을 달성한다. 그림 예에서(도 3B),30분마다 1°C 증분이 사용되었다. 원하는 기간 동안 온도를 대상으로 동물을 냉각시(설명된 예에서 2h). 냉각되면 원하는 간격을 위해 대상에서 유지합니다. 일반적으로 원하는 대상 온도에 대해 설정된 홈더믹 히트 매트에서 유지되는 경우 더 이상 개입이 필요하지 않습니다. 마취가 코어 체온의 정상적인 조절을 방지하기 때문에 이 프로토콜에는 외부 냉각이 필요하지 않습니다.참고: 저체온증으로 이소플루란 요구 사항이 감소합니다. 대부분의 동물에서는 2%의 시작 이소플루란 농도를 20-30분마다 0.1%씩 감소시킬 수 있어 안정된 호흡률(>50 호흡/분), 심박수 및 혈압을 유지하고 반사 반응억제를 유지할 수 있다. 저체온증 후 동물을 다시 데우기 위해 열 매트를 조정하여 동물이 원하는 간격으로 다시 따뜻하도록 합니다. 예에서, 37°C(예에 사용된 FHC 온도 제어 부상에서 6)로 의 단일 조정으로 재보온은 30분 동안 달성되었다. 동물 회복이 필요한 장기 연구의 경우, 동물이 열 조절을 허용하고 우발적 인 수술 후 저체온증을 피하기 위해 열 매트 위에 반쯤 놓인 케이지에 동물을 유지하십시오. 직장 파라세타몰 (250 mg/kg) 복구 및 ovrenight 통증 완화를 위해 관리 될 수 있습니다. 피하 식염수 주사 (2 x 1.5 mL)는 마취 및 외과 수술로 인한 탈수를 방지하기 위해 주어질 수 있습니다.