通过等密度梯度纯化对U937细胞进行细胞分级分离

亚细胞分级分离是通过多种方法裂解细胞并将其分离成其组成成分的过程。研究人员可以使用这种技术来确定哺乳动物细胞中的蛋白质定位或富集否则无法检测到的低丰度蛋白质。虽然目前存在亚细胞分离的方法，也可以购买商业试剂盒，但它们受到该程序试图克服的几个限制。大多数细胞分级分离方法^{完全基于洗涤}剂1，2^，依赖于使用含有越来越多的去垢剂的缓冲液来溶解不同的细胞成分。虽然这种方法快速方便，但它会导致不纯的馏分。这些旨在使研究人员能够轻松分离细胞的一种或两种成分，但还不够复杂，无法同时从样品中分离出多个亚细胞组分。仅依靠洗涤剂通常会导致膜封闭的细胞器和质膜被不加选择地溶解，从而使这些成分的分离变得困难。使用这些试剂盒的另一个复杂因素是研究人员无法针对特定应用对其进行更改/优化，因为大多数组件都是专有配方。最后，这些试剂盒可能非常昂贵，使用次数有限，因此对于较大样品来说不太理想。

尽管有不依赖去垢剂的线粒体分离试剂盒，但它们并非设计用于分离质膜，并且产生的样品量明显低于标准分离方案^3，4。虽然差速离心方法更耗时，但它们通常会产生不同的馏分，而仅使用基于洗涤剂的试剂盒无法获得¹。无需单独使用增溶去垢剂的分离还允许使用超速离心和等密度梯度进一步纯化，从而减少交叉污染。该分级分离方案展示了使用基于去垢剂和高速离心的方法的组合从U937单核细胞中分离亚细胞级分。该方法将有助于分离哺乳动物细胞的核、细胞质、线粒体和质膜成分，而馏分之间的污染最小。