腎動脈を介した腎臓への直接薬物送達

実験的な手順は、ヨーテボリ、スウェーデンの地域実験動物倫理委員会によって承認されました。 1. 術前ケア 感染を避けるために無菌技術を使用してください。 麻酔(例えば、イオブルラン)の下で、可能な限り無菌的な方法で働いて、手術領域を剃り、脱毛クリームで毛皮を取り除く。クリームを約1分間放置します(皮膚にやけどを避けるため最大2分間)。水で丁寧に洗います。この第一ステップは、手術の直前に動物の余分な冷却を避けるために、手術の1〜2日前に行うことが好ましい。 目の上に眼用潤滑油を塗布して乾燥を防ぎます。 感染を避けるために、手術領域を消毒用の皮膚クレンザーで洗浄し、手術直前に消毒剤(クロルヘキシジン)で領域を拭いてください。 鎮痛 動物が末期手順でない場合は鎮痛薬で動物を投与する前に:ブプレノルフィン(例えば、テムゲシック)0.05-0.1 mg/kg s.c。 抗 凝固 剤 血栓を避けるために抗凝固剤を使用してください: 手術の直前に尾静脈を介してヘパリンの10 IU (最大 5 mL/kg). 2. 外科的処置 器具をオートクレーブし、滅菌カテーテルを使用します。石鹸とヒビスクラブで急いで洗い流し、フェイスマスク、ヘアネット、無菌の外科用ガウンと手袋を着用してください。第二の人が動物とすべての「汚い」タスクを処理してもらいます。 麻酔の場合は、イオブルランを使用してください。5%のイオブルランを使ってマウスを麻酔ボックスに入れることで麻酔を誘発する。誘導後、反射神経と呼吸を確認して麻酔の深さを確認します。 手術中にマウスにフェイスマスクを置き、2%イオブルランの維持用量を与える。 手術台に置く前に、ヒビスクラブとクロルヘキシジンで動物を洗ってください。 麻酔後、熱くなった外科用パッドの上にマウスを置き、低タック粘着テープを使用して上下の手足をパッドに固定します。肺の圧迫を防ぐために、上肢が正常な位置に維持されていることを確認してください。可能であれば、非電気熱源を使用してください。注:手術中の調整を容易にするため、吸入麻酔(イオブルランなど)を使用しています。 マウスをラップでドレープし(例えば、プレスンシール)、手術顕微鏡で作業を行います。 常に手術領域に生理を加えることによって乾燥から組織を保護します。これはまたティッシュの伸縮性を保つのを助け、外科を行っている間損傷の危険を最小にする。生理液は動物の冷却を避けるために約37°Cでなければなりません。 鉗子とはさみで正中切開で腹腔を開いた後、湿った折り畳み、圧縮して他のすべての臓器を押しのけて手術領域を良く見ることができます。 手術領域(5 mm鈍いフック)の良い概要を持っているレトラクターを使用してください。 大大小と左腎臓を局所化する。 2つのマイクロサージャリー鉗子を使用して、腎臓から大歯(2.10.1を参照)と尾行(2.10.2を参照)の両方を腎臓から静かにきれいにし、その下に合字を置きます(6-0シルク)。構造物をつままないように注意してください。組織を優しく伸ばして引っ張り、可能な限り腎動脈に近づけることによって、あなたの方法を働かしてください。血管の周りには、容易に発見できないいくつかの神経があります。損傷した神経は麻痺または他の問題を引き起こす可能性があるので、この覚えておいてください。 腎臓(上記)を、この合字を使用して大麦を持ち上げて、注射を行いながら血流を一時的に閉塞する。この位置では、腎動脈の真上、大動脈が反対方向に分岐する(腸に対して、 図1を参照)。この方法で注入を押すことを避けるために、この枝の下に合字を置きます。注入手順を開始するまで、緊張せずに合字を残します。 Caudally (下) 腎臓, 他の潜在的な枝を避けるために大動脈が腎臓/腎動脈に分岐する場所の近くに切開を置きます.腎臓から尾大動脈は腹部静脈に非常に近い。静脈を損傷しないように非常に注意してください。 注射 すべての合字が整っている場合。最初に下の合字を伸ばし、上合字を伸ばして血流を閉塞させ、注入された液体を腎臓に向ける。 鍼針(Ø 0.25 mm)を使用して、カテーテルの先端(32GA)を大間に穿刺して導き、射出中に移動したり漏れたりしないように合字に1つの結び目を付けて固定します。(図1)。はさみの代わりに鍼治療針を使用すると、血管内の最小限の入り口穴を作ります。 50 μLの液体を注入します。腎臓は青白くなり、注射が腎臓を浸透させ、運命の場所に終わったことを示す。 この時点で、2 つの異なるシナリオが考えられます。 入り口穴を閉じる前に、上合字の緊張を慎重に緩めることによって腎臓に循環を返します。このようにして虚血は改善されるが、注入された液体は潜在的に腎静脈を介して急速にクリアされ、したがって十分な留まる時間を許さないことに注意してください。 または血流を返さずに手術を進める。 上合字を再び締めた後、カテーテルを引き出し、大間を縫合し、完全な循環を返す。 カテーテルを保持している合字を取り外します。 カテーテルを撤回します。 入口穴を単一のステッチ(エチロン11-0、丸み針)で縫合する。 まず、下の合字を緩め、次に非常にゆっくりと上の合字を緩めます。漏れがある場合は、もう一度合字を締め、数秒待ってからもう一度やり直してください。虚血損傷を避けるために、虚血時間の合計を最大5〜10分に保ちます。 領域を押して固体をテストし、脈動を探し、腎臓が再循環が確立されていることを再確認するために「正常な着色」に戻ることを確認します。 糸を切り、大間の下の合字を取り除きます。 圧縮を取り除き、腸を所定の位置に押し戻します。腹腔に生理食糸を加え、腹膜(Vicryl 6-0)を縫合してから、皮膚を金属クリップで閉じる前に、いくつかの流体を返します。 動物を目覚めさせる前に、皮下のレヒドレックスの0.7-1 mLを与えられる。注:全体の手順は、十分な訓練を受けた緊急のために約30〜45分かかります。 3. 術後ケア ケージの一部の下に加熱パッド(約38°C)を配置し、手術後2〜3日間、動物が暖かい環境で目を覚ますことができます。 麻酔を提供し続ける (ブプレノルフィン, 例えば, テムゲシック 0.05-0.1 mg/kg s.c.) 2-3 回/日手術後 3 日間. 動物が脱水症状を示す場合は、時に10 mL/kgのレハイドレックス.cを与える。