小鼠的转宫胎儿气管闭塞模型
Summary
各种先天性隔膜气喘和胎儿气管闭塞的动物模型在伦理问题、成本、手术难度、大小、存活率和遗传工具的可用性方面都存在利弊。该模型为研究气管闭塞和增加的发光压力对肺发育的影响提供了新的工具。
Abstract
胎儿气管闭塞 （TO） 是一种既定的治疗方式，可促进胎儿肺生长和严重先天性隔膜气喘 （CDH） 中的生存。在 TO 之后，分泌上皮液的保留会增加发光压力并诱导肺部生长。已定义各种动物模型，以了解 CDH 和 TO 的病理生理学。它们都有自己的优点和缺点，如技术的难度、动物的大小、成本、高死亡率和遗传工具的可用性。在这里，一个新的跨子宫模型的穆林胎儿托被描述。怀孕的小鼠被麻醉，子宫通过中线腹腔切除术暴露。选定胎儿的气管与气管后面放置的单个转宫缝合、一条胡萝卜动脉和一条血管相成。大坝被关闭，并被允许恢复。胎儿是在分治前收集的。托胎儿的肺与体重比高于控制胎儿的体重比。该模型为研究人员提供了一个新的工具，以研究 TO 和增加的发光压力对肺部发育的影响。
Introduction
先天性隔膜气喘（CDH）发生在1：2500怀孕，导致肺发育减退和新生儿肺高血压1，2，3，4，5，6。胎儿气管闭塞 （TO） 是严重 CDH 患者在妊娠周 26-30 中接受胎儿切除术的既定产前治疗，其中气球放置在卡琳娜正上方，然后在第 32个妊娠周切除。这种临时性托导胎儿肺生长，提高存活率。先天性高气道阻塞综合症是一种与肺增生相关的致命疾病，它激励外科医生对气管进行人工遮挡，以促进分泌上皮液的保留。这种闭塞增加了发光压力，并诱导肺生长7。然而，应扭转闭塞，使上皮细胞成熟。
已开发出各种CDH和托-卵巢、兔子、老鼠和老鼠的动物模型，以了解CDH和托的病理生理学。它们都有自己的优点和缺点，如技术的难度、动物的大小、成本、高死亡率和遗传工具的可用性。虽然用于卵巢模型的手术技术与人类使用的非常相似，可以逆转，但该模型的主要缺点是动物的费用、妊娠期长以及可能的手术次数有限。兔子模型的妊娠期较短，比绵羊模型便宜。然而，兔子模型是不可逆转的8，9。Murine 模型的成本最低，每次怀孕的胎儿数量最多，基因组特征最好，并且具有广泛的细胞和分子分析工具。然而，一个关键的缺点是 TO 缺乏可逆性，无法充分理解 TO 的影响。在此，提出了一种方法，结合了前面提到的模型的所有优势，并创建一个简单，潜在的可逆的，微创啮齿动物托模型。
Protocol
Representative Results
Discussion
这种方法描述了小鼠胎儿气管闭塞的外科手术及其对肺部发育的影响。协议中有一些关键步骤，应仔细执行才能成功执行 TO。手术平台的温暖和盐水引入腹腔对妊娠的进展至关重要。此外，必须对幼崽的头部施加轻微的压力，以确保颈部暴露。
6.0 聚丙烯缝合线是唯一可用于此技术的缝合线。大于 6.0 的缝合针较厚，破坏颈部气管周围的结构，导致胎儿丧失。较薄的缝合线的?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项研究没有从公共、商业或非营利部门的资助机构获得任何具体赠款。所有作者都为数据的研究、获取、分析和解释的概念和设计、起草文章以及修改该文章，以便提交重要的知识内容和最终批准版本做出了重大贡献。作者感谢坎·萨本库奥卢在制作手术技术艺术品方面所做的善心努力。
Materials
| Buprenorphine | Par Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | For regional anesthesia |
| Isoflurane | Halocarbon Life Sciences | NDC 66794-017-25 | For general anesthesia |
| Magnification glasses | USA Medical-Surgical | SLR-250LBLK | At least 2.5x |
| Nikon 90i microscope | Nikon | 3417 | Motorized Fluorescence |
| Nucleospin Tissue Kit | Macherey-Nagel, Düren, Germany | 740952.5 | DNA isolation |
| Pierce BCA Protein Assay Kit | Thermo Fisher, IL, USA | 23225 | Protein quantification |
| Polyglactin suture | Ethicon | VCP451H | 4-0, 24 mm, cutting |
| Polylysine slides | VWR | 48382-117 | Microscope adhesion slides |
| Polypropylene suture | Ethicon | Y432H | 6-0, 13 mm 1/2c Taperpoint |
| RIPA buffer | Sigma-Aldrich, Missouri, USA | R0278-50ml | Protein isolation |
| Silk suture | Ethicon | VCP682G | 4-0, 24 mm, cutting |
| Trizol | Invitrogen | 15596026 | RNA isolation |
Referenzen
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