未熟ネコの最小体積ガラス化

凍結保存は、再生支援技術(ART)の重要なステップとなっています。人間では、医療や個人的な理由で生殖能力の保持や親の延期を可能にします。動物では、特に家畜やペットの計画交配の距離と時間を克服したり、特に野生の絶滅危惧種の保全プログラムで貴重な被験者の遺伝物質を保存する必要があります。配育する個体がまだ選ばれていない場合、または特にヒト医学における胚凍結に関連する倫理的問題を回避するために、配られる人が選ばれなかった場合の最良の選択^である。精子は比較的簡単に保存し、解凍後に満足のいく結果を与えるが、卵母細胞は、その構造的特徴のために、保存するのがより複雑である可能性がある。実際、低い表面/体積比は、卵形プラズマを囲む透明帯の存在と同様に、細胞²を横切る凍結保護剤および水の移動を制限する。さらに、フェリドを含む家畜では、脂質が豊富な細胞質が特徴であり、凍結保存に対してより敏感であると考^{えられている。}

ほとんどのフェリドは脅かされ、家畜猫は定期的な卵巣切除術から生殖腺が利用可能なおかげで生殖器保存のためのプロトコルを開発するためのモデルとして使用されます。野生動物では、生殖腺は、選択的手術後、または(より頻繁に) 死後に得ることができ、未熟な(胚芽小胞)配偶を取り出すことができます。成熟した(メタフェーズII)卵母細胞を得ることを目的としたホルモン刺激は、倫理的な問題と治療⁴に対する種および個々の特異的応答のためにヒトARTほど一般的ではない。

したがって、凍結保存戦略の開発は、通常、まれな個体の予期せぬまたは突然の死の後に取り出すことができる未熟なアテです。生物学的な観点から、未熟または成熟したアテの凍結保存にはいくつかの違いがあり、それぞれがその利点を有する。第一に、DNAは、胚芽小胞が核膜に囲まれた染色体を含む未熟な卵母細胞でより保護され、メタフェーズII卵母細胞のmeioticスピンドルは凍結傷害に対してより脆弱である可能性がある^5。第二に、冷間誘発細胞骨格の損傷は、紡錘の回転、極体押出、前核移動およびサイトカネシスに影響を及ぼし、卵母細胞発生期に応じて異なる影響を及ぼし、微粉症の進行または受精後の事象に影響を及ぼす可能性がある。最後に、おそらく最も重要なのは、成熟した卵母細胞が受精する準備ができているのに対し、未熟なジマテは核および細胞質成熟⁶を通過するために周囲の積雲細胞の支持に依存しており、これが積雲母細胞複合体(COC)全体が凍結保存されている理由である。しかし、乳液細胞の喪失や、カテと周囲の体細胞との間の機能的なつながりの喪失は、おそらく未熟なCOCcの凍結保存の最も有害な影響である。

凍結保存技術の中でも、ガラス化は、フィールド条件でより容易に適用できるものです。低速(または制御速度)の凍結と比較して、ガラス化はより速く、プログラム可能な冷凍庫のような特定の装置を必要としない。ガラス化の三つの基本原則(すなわち、高粘度、高い凍結保護濃度、少量および超急速温度減少に結び付く)を満たすために、いくつかの媒体および支持剤は、特に未熟および成熟卵子の両方のために猫で開発され、使用されてきた。単純なストロー⁷から始まり、デバイスは「最小音量」目標に到達するために開発されました。クライオループ^8、オープンプルストロー(OPS)9、プラスチック側溝(変性ストロー⁾¹⁰及びクライオチューブ¹¹が用いられ、より効率的な装置(すなわち、クライオトップ)が採用^{されるまで、生存}率及び明治を改善する。⁹クライオトップ(補足図1)は、ガラス化用の選択開放システムとなっている市販のサポートです。ヒト卵母細胞および胚のガラス化のために開発され、それは、貯蔵¹²の間にプラスチック管キャップによって保護された硬いプラスチックホルダーに取り付けられた小さなフィルムストリップからなる。ガラス化容積の極度の減少(わずか0.1μL)により、このガラス化サポートは、家庭用ネコを含む数種にますます適用され、様々なメディア13、14、15、16、17と共に使用されています。^{13,14,15,16,17}

この原稿の目的は、実験室製のメディアと商業支援を用いて最小の体積ガラス化のために使用し、未熟なネコCOCの凍結保存のためのフィールド条件で容易に適用することができるヒト卵母細胞のために最初に開発されたものからのマイナーな変更を伴う、コレクションガラス化温暖化プロトコルを記述することです。