众所周知,血流产生的血动力在内皮和血管功能1、2中起着主要作用。众所周知,几种类型的子通道对剪切应力3、4、5的变化有剧烈反应,导致理论认为,子通道可以是初级剪切应力传感器。最近,我们和其他人表明,对剪切应力的血管敏感通道在若干剪切应力敏感血管功能中起着关键作用,包括对剪切应力^6、7、8的血管活性反应,发育性血管生成⁹。然而,离音通道的剪切应力灵敏度机制几乎完全未知。这种知识差距可能是由于在明确定义的剪切应力下进行电生理记录的技术困难。因此,在本文中,我们提供了一个逐步的详细协议,在我们的实验室中例行执行,以实现这个目标6,7,10,11。

该方法的总体目标是允许在生理范围内明确定义的剪切应力下对电导道机活化进行实时调查。这是通过修改标准平行板流室来实现的,使电生理移液器能够降入腔室,并在实时接触流量时进入底部板上生长的细胞,从而提供了独特的方法来实现这一点进球6,7,11 。相比之下,在以前的出版物中描述的标准平行板流室可用于对暴露于剪切^力12或其他非侵入性方法^的细胞进行实时成像分析,但不适用于电 生理。同样,锥体和板装置,另一种强大的方法,使细胞暴露在剪切应力15,16也不适合电生理记录。因此,这些流动装置不允许研究光通道的剪切应力敏感性。在流下进行电生理记录的困难是缺乏关于这些关键影响的机制的信息的主要原因。

就实现同一目标的替代方法而言,没有一种方法准确或控制。一些早期的研究试图通过将细胞暴露在来自另一个移液器的液体流中来记录流中的离子电池通道活动,这些液体从17、18号进入细胞附近。这是高度非生理的,因为在这些条件下产生的机械力与血管中剪切应激的生理特征几乎没有共同之处。类似的关注也适用于通过灌注开放腔来模拟生理剪切应力的尝试。正如我们早期^研究10中详细讨论的,一个开放的液体-空气界面会产生多重干扰和再循环,这是非生理的。为了解决所有这些问题,我们设计了一个经过改进的平行板(MPP)流动室,在早先的研究中,我们也被称为”微创流量装置”,在6、7、10、11中,我们制造了从丙烯酸和广泛使用在我们的实验室。然而,尽管设计的原始描述已经发表近20年,并且是唯一允许在定义明确的剪切应力下进行电生理记录的流装置,但这种方法并没有其他实验室采用,只有极少数研究试图记录流下的电流。因此,我们相信,提供使用MPP流动室的详细描述,将非常有助于研究那些对美能敏感性水道和血管生物学感兴趣的人。