ここでは、研究品質 ceptometers (水平バーに沿って直線的に配列された多くのセンサ間に光強度を統合する光センサ) を構築し、較正する方法について詳細な説明を提示します。
Ceptometry は、長いバー上で並列に接続された複数の光センサを使用して、植物のキャノピーを介して光合成活性放射線の透過率を測定するために使用される技術です。Ceptometry は、多くの場合、樹冠構造と光遮断、特に葉面積指数 (LAI) と有効な植物面積指数 (PAIeff) の特性を推測するために使用されます。商業的に入手可能な ceptometers の高コストのために、撮影することができる測定の数は、多くの場合、空間および時間において制限される。これにより、光インターセプトにおける遺伝的変動を研究するための ceptometry の有用性が制限され、時間帯に応じて測定値をスキューできるバイアスの徹底的な分析や補正ができなくなります。私たちは、$75 米ドルで生産可能なロギング ceptometers (PARbars と呼ばれる) を継続的に開発し、市販の代替品に匹敵する高品質のデータを生成します。ここでは、PARbars を構築し、較正する方法についての詳細な指示を提供し、フィールドにそれらを展開する方法と収集された透過データから PAI を推定する方法。小麦の天蓋からの代表的な結果を提供し、PARbars を使用する際に行うべきであるさらなる考慮事項について話し合う。
Ceptometers (光センサーの線形配列) は、植物の天蓋によってインターセプトされた光合成活性放射線 (PAR) の割合を測定するために使用される。Ceptometers は、測定の比較的単純な性質とデータ解釈の簡素化により、農業作物研究に広く使用されています。Ceptometry の基本的な原理は、植物の天蓋 (τ) の基部への光の透過率が、上記の光吸収材料の投影面積に依存していることである。したがって、キャノピーの上と下の PAR の測定は、葉面積指数 (LAI) や有効な植物面積指数 (PAIeff) などの樹冠特性を推定するために使用することができます (リーフに加えて、茎、穀稈、生殖構造を含みます)1 ,2,3.Τ effから推論された PAI の推定の信頼性は、入射 PAR (fb) のビーム分率、葉日射 (a) および有効樹冠吸光係数 (K);Kは、順番に、太陽天頂角 (θ) と葉角度分布 (χ)1、4、5、6の両方に依存します。これらの効果を修正する一般的な方法です。しかし、方法論とコストの制限により、過去に考慮されていない他のバイアスがあります。
我々は最近、小麦や大麦7のような行作物の瞬間的な ceptometry 測定において時間依存性のバイアスを有意に同定した。このバイアスは、行植栽の向きと太陽の天頂角の相互作用によって発生します。このバイアスを克服するために、連続してロギング ceptometers を現場に取り付けて、キャノピーの光インターセプトの日内周期を監視し、次にτと PAIeffの日次平均値を計算することができます。しかし、連続測定は、市販されている ceptometers のコストが非常に高く、多くの場合、1つの機器に対して数千米ドルが必要であり、多くのフィールドプロットの測定要件があるため、実行不可能です。後者は、ゲノム全体の協会研究 (GWAS) やゲノム選択 (GS 2014 &) のようなゲノム解析に何百もの遺伝子型が必要とされるオミクスの時代において特に顕著である。我々は、大量に生産され、多くの遺伝子型間の連続的な測定に使用することができる費用対効果の高い ceptometers が必要であることを認識した。
ソリューションとして、私たちは1単位あたり $75 ドルのコストで、簡単に構築できる高精度な ceptometers (PARbars) を設計し、約1時間の労働力を構築する必要がありました。PARbars は、波長帯 (波長390– 700 nm) のみに敏感な50フォトダイオードを使用して構築されており、この範囲外では感度が非常に小さいため、高価なフィルタを使用未然ます。フォトダイオードは、1m の長さにわたって並列に接続されており、データロガーを使用して記録できる統合差動電圧信号を生成します。回路は防水のためにエポキシで包まれ、センサーは大きい温度較差 (-40 に + 80 ° c) 上で作動し、PARbars が長期の間分野で展開されることを可能にする。フォトダイオードと低温係数抵抗を除いて、PARbar の構築に必要なすべての部品は、ハードウェア・ストアから購入できます。必要な部品とツールの完全なリストは、材料のテーブルで提供されています。ここでは、PAIeffの推定および小麦天蓋からの代表結果の提示のために PARbars を構築し、使用する方法についての詳細な指示を提示します。
Ceptometers を構築するためにここに概説されたプロトコルの成功した実装 (PARbars) は、2つのステップで最も敏感に依存します: 1.5 (その場でのフォトダイオードの接着) と 1.6 (銅線へのフォトダイオードのはんだ付け)。ステップ1.5 は、固有の極性に関してフォトダイオードを誤って位置合わせすることによってエラーを起こしやすい。我々が使用したフォトダイオード、および重要な特定の項目として推奨される極性は、ダイオード上の2つの電気コネクタタブによって明確に異なるサイズを持つことによって識別します。したがって、cyanoacrylate 接着剤を適用して、フォトダイオードをはんだ付けする前に、すべてのダイオードが1つの方向に面した大きなコネクタタブ、もう一方の方向に面している小さなタブに配置されていることを再度確認することを強くお勧めします。ステップ1.6 は、はんだ付け技術の悪さおよび冷間はんだ接合の形成により故障しやすい。これは、はんだ付けの直前にフラックスペンを使用して薄いはんだフラックスを塗布し、ワイヤとフォトダイオードタブの両方をはんだ先端部 (約350-400 ° C) で加熱してから、はんだ付け自体に適用することで回避できます。ジャンクション。PARbar における電気接続に関する問題は、通常、他の PARbars とは明確に異なる較正斜面の形で現れる。このような問題は、(ステップ1.6 で説明したように) 構築中に各電気接続をテストすることによって早期に捕捉することができ、すべての接続がはんだ付けされた後でも、エポキシに包まれる前に (ステップ 1.9)。3番目の潜在的なエラーの原因は、その抵抗が温度に対して鈍感である、低い温度係数の精度抵抗を使用しないことから生じます。通常の抵抗を使用するとエラーが抵抗となり、ダイオードによって吸収される光の単位当たりの電圧出力が周囲温度によって変化します。最後の主要なエラーの原因は PARbars に固有ではありませんが、すべての ceptometry 測定に適用されます。すなわち、光捕捉からの有効な植物面積指数又は葉面積指数の推定は、樹冠構造の特徴 (特に平均葉日射と葉の角度の分布;Eqns 1 および 2) における a およびc は、植物の発育中および遺伝子型間で変化し得る。
ここで説明するプロトコルを変更または適合させることができる2つの主な領域があります。まず、ここで紹介する PARbars は、小麦や大麦などの行作物に使用するために特別に設計されていますが、他のアプリケーションでも簡単にデザインを変更できます。たとえば、抵抗の大きいシャント抵抗を使用して、より低い PAR 範囲でゲイン (単位パーあたりの mV 出力) を向上させることができます。汎用性を高めるために、低温係数の高精度ポテンショメータ (可変抵抗) を使用して、必要に応じて PARbar の感度範囲を変更したり、多くの PARbars が同一のキャリブレーションスロープを持つように小さな調整を行ったりすることができます。第2に、フォトダイオードは、量子センサとして個別に使用することもでき、市販の量子センサを使用して可能な場合よりもはるかに低いコストで、個々の天蓋内の空間的な変化と時間的変動を捉えることができる。これは、変動する光条件12の下で動的光合成に対する関心が高まっていることを考えると特に価値がある。第3に、本研究で提示されたデータに従来の (そして高価な) データロガーを使用したものの、データロガーが既製の易いを使用して構築され、ceptometry とデータロガーシステムを組み合わせて作成することが可能である。限られた予算。Arduino やラズベリーパイなどのいわゆるメーカーのプラットフォームの人気は、この分野で大きな期待を提供しています。我々は、さらなる開発のためのスターターとしてオープンソースの Arduino ベースの洞窟パールプロジェクト13を提案します。ケーブパールデータロガーは、洞窟生態系の環境モニタリングのために設計されたため、堅牢性と低消費電力が設計上の重要な考慮事項でした。同様の考慮事項は、プラントみつかり作業への実装に関連しています。ケーブパールデータロガーコンポーネントは、安価 (1 単位あたり $50 米ドル未満) で、小型であり、PARbars に直接組み込むことができる可能性があります。
ここに記載された PARbars の適用は、3つの主な制限に直面します。第1に、測定された光捕捉からの植物領域インデックスまたは葉面積インデックスの推論は、特に行作物7において時間依存性の強いバイアスによって妨げられる。これは、1日に繰り返しまたは連続的な測定を行うことによって克服することができます。第2に、安価なフォトダイオードは、フォトンフラックス (光合成研究における最大の関心の変数) に正確に比例するスペクトル出力を持っていません。これにより、キャノピーを通じて光の質が大幅に変化した場合にバイアスが発生することがありますが、これまでに得られた誤差の推定値は、数パーセント7のオーダーであることを示しています。第3に、PARbars はキャノピーの上に入ってくる PAR の直接ビームと拡散コンポーネントを区別できません。拡散放射線は直接日光14よりもキャノピーの奥深くまで浸透するので、透過率は増加し、PAIeffは総放射照度の拡散画分が増加するにつれて過小評価されます。すべての放射線が拡散する場合、PAIeffは、式 115に示される関係ではなく、1/τの対数に直接比例する。クルーズet al.(2015)16は、現在利用可能な直接および拡散 PAR を測定することができる市販の楽器は高価であり、定期的なメンテナンスを必要とするので、彼らはこの問題に対処するためのシンプルで安価な装置を設計したことに注意しましたそれらのシステムはモーターを備えられた、動く shadowband によって定期的に影である量子センサーから成り、総、直接および拡散 PAR の連続的な測定を可能にする。クルーズet al. で使用されているセンサー。16システムは、さらにコストを削減するために PARbars で使用される同じフォトダイオードに置き換えることができ、簡単に既存の PARbar セットアップに組み込むことができます。これらの測定値はデータ処理パイプラインに統合され、PAIeffの推定値の信頼性がさらに向上します。
既存の商業 ceptometers に比べて PARbars の主な利点は、それらを大量に生産することが可能になり、低コストである。最近では、樹冠形質の推定のための新しい高スループットプラントみつかり技術への関心が高まっています (レビュー用ヤンet al., 201717)。これらの方法は、膨大な量のデータを生成するということで有望ですが、通常は非常に間接的で、従来の手法に対する検証が必要です。PARbars は、これらの新しい技術のための費用対効果の高い、地上ベースの検証ツールとして機能することができます。
PARbars の生産コストが低いため、現場での連続測定のための実行可能なオプションにもなります。これは、いくつかの理由で役に立ちます。たとえば、連続測定は、瞬間的な測定のための時間固有の補正関数を開発するために、行方向のバイアスを特徴付けるために使用できます (詳細については、ソルター et al. 20187)。連続 ceptometry はまた、オーバーヘッド、キャノピーの動きなどの雲が通過することによって引き起こされる、時間をかけてキャノピーライトキャプチャ (sunflecks と shadeflecks) の短い変動をキャプチャすることができます。光合成は、環境条件の小さな変化に対して非常に敏感であることが知られており、光合成の「ダイナミックな」変化は現在、作物収量を駆動する上で重要であると考えられている (レビューのために Murchie et al., 201812)。適切に短いロギング間隔でフィールドにインストールされた PARbars は、これらの短い変動を捕捉し、植物の天蓋の動的な性質のより良い理解を提供するために使用することができます。
The authors have nothing to disclose.
著者は、この研究に使用されるフィールドプロットのアクセスおよび管理のための CSIRO、農業、および食品におけるリチャード・リチャーズ博士と中正ホセイン博士に感謝したいと思います。本研究は、穀物研究開発公社 (US00082) による助成金を通じて、国際小麦収量パートナーシップによって支援されました。TNB はオーストラリアの研究評議会 (DP150103863 と LP130100183) と全米科学財団 (賞 #1557906) によってサポートされました。この作品は、USDA 国立食糧農業研究所によってサポートされ、ハッチプロジェクト1016439と1001480。
1.5 Ω low temperature coefficient precision resistor | TE Connectivity Ltd., Schaffhausen, Switzerland. | UPW25 series | Could be made using multiple larger resistors in parallel but they need to have low temperature coefficient (i.e. ± 3 ppm/°C). URL for commercial source: https://bit.ly/2DFuPpm |
Acrylic diffuser | Plastix Australia Pty. Ltd., Arncliffe, NSW, Australia. | 445 – Opal White | 1200 mm length x 30 mm width x 4.5 mm thick. URL for commercial source: https://bit.ly/2Bq0fyc |
Aluminum U-bar | Capral Ltd., Bundamba, QLD, Australia. | EK9160 | 1220 mm length x 35 mm width x 25 mm depth. URL for commercial source: https://bit.ly/2PPfJou |
Bare solid core copper wire | Non-specific part | ||
Bolts | Non-specific part | ||
Clamps | Non-specific part | ||
Clear epoxy potting resin | Solid Solutions, East Bentleigh, VIC, Australia. | 651 – Universal Epoxy Potting Resin | Clear epoxy resin for electrical applications. URL for commercial source: https://bit.ly/2qY0pHa |
Cyanoacrylate glue | Non-specific part | ||
Datalogger | Campbell Scientific, Logan, Utah, USA. | CR5000 | Other dataloggers that record differential voltages could be used. URL for commercial source: https://bit.ly/2U7Io5H |
Drill or drill press | Non-specific part | ||
Glue lined heat shrink | Non-specific part | ||
Heat gun | Non-specific part | ||
LED torch | Non-specific part | ||
Masking tape | Non-specific part | ||
Photodiodes (50) | Everlight Americas Inc., Carrollton, Texas, USA. | EAALSDSY6444A | It is important that this specific component is used due to spectral response. URL for commercial source: https://bit.ly/2FzVnuH |
Polyurethane foam filler | Non-specific part | ||
Quantum sensor | LI-COR, Lincoln, Nebraska, USA. | LI-190R | For calibration of PARbars only. URL for commercial source: https://bit.ly/2HEfKbh |
Screwdrivers | Non-specific part | ||
Silicone sealant | Non-specific part | ||
Solder | Non-specific part | ||
Solder flux pen | Non-specific part | ||
Soldering iron | Non-specific part | ||
Spirit/bubble level | Non-specific part | ||
Tap and die set | Non-specific part | ||
Two-core cable | Non-specific part | ||
Voltmeter | Non-specific part | ||
Waterproof connectors | Core Electronics, Adamstown, NSW, Australia. | ADA743 | 2 core waterproof connector. DC power connectors work well. URL for commercial source: https://bit.ly/2Brcrik |