Комбинированные размер и плотность фракционирование (CSDF) является методом физически разделить почвы на фракции, различные текстуры (размера частиц) и минералогии (плотность). Цель заключается в том, чтобы изолировать дробей с разными определено к органического вещества почвы (СОМ), с тем чтобы лучше понять взаимодействие органо минеральных и динамика сом.
Комбинированные размер и плотность фракционирование (CSDF) является метод, используемый для физически разделить фракции, различающихся по размеру частиц и Минералогия почв. CSDF опирается на последовательные плотности разделения и седиментации шаги для изоляции (1 свободный легкой фракции (uncomplexed органических веществ), (2 перекрытых легкой фракции (uncomplexed органического вещества ловушке в агрегатах почвы) и (3) переменное количество тяжелых дроби (минералы почвы и их связанные органических веществ) отличаются по составу. Условии, что правильно выбранных параметров CSDF (рассеивания энергии, плотность обрезков, время седиментации), метод дает тяжелых фракций относительно однородных минерального состава. Предполагается, что каждый из этих фракций имеют разные комплексообразующие способности к органического вещества, делает это полезный метод, чтобы изолировать и изучать характер взаимодействия органо минеральные. Объединив плотность и частиц размер разделение приносит улучшения резолюция, по сравнению с простых методов фракционирование размер или плотности, позволяя разделение тяжелых компонентов по минералогии и размер (относящиеся к площади поверхности) критерии. Как и в случае для всех методов физической фракционирования, он может рассматриваться как менее подрывной или агрессивны, чем методы экстракции химически на основе. Однако CSDF является трудоемким методом, и Кроме того, можно ограничить количество материала, полученные в некоторых фракций для последующего анализа. После CSDF фракции могут быть проанализированы для минералогического состава, концентрации почвы органического углерода и химии органического вещества. Этот метод обеспечивает количественную информацию о распределении органического углерода в рамках пробы почвы и приносит свет в сорбционной емкости различных, естественных минеральных фаз, обеспечивая тем самым механистическая информация о преференциальных характер взаимодействия органо минеральных почв (т.е.., который минералов, какой тип органического вещества).
Почва представляет собой сложную систему, которая содержит элементы геологических и биологического происхождения. Изучение их взаимосвязи является краеугольным камнем нашего понимания экосистем функции1. В частности органо минеральных взаимодействия считается играть ключевую роль в почве органического вещества (SOM) динамика2. Распутыванию сом динамика в настоящее время зона очень активные исследования по нескольким причинам. Почвы с высоким сом запасов будет стремиться показать хорошие внутренние плодородия и могут также представлять собой экологически ценные углерода секвестрации возможность3,4.
Органические вещества в почве является весьма неоднородной, с некоторыми компонентами, перебирая в пространстве в течение нескольких часов, в то время как другие могут сохраняться в течение тысячи лет5. Детерминанты этой неоднородности остается противоречивым, но ассоциации с минеральной матрице считается особенно важным6,7, особенно для недр горизонты8. В результате минеральные фаз, известный тесно связать с органическими компонентами получают повышение интереса9,10,11.
Почвы содержат широкий спектр полезных ископаемых с и количественно и качественно различной сорбционной потенциал отношении сому. Минералы с большими областями поверхности и/или Высокореактивная поверхности было показано, что высокая сорбционная емкость для органических соединений4,12. В почвах, вторичных минералов, таких как высокая активность Филлосиликаты (например, smectites), oxyhydroxides железа и плохо кристаллический алюмосиликаты все было показано, значительно заниматься сорбционной сохранения некоторых органических соединений13 , 14 , 15 , 16 , 17. разделение на фракции, различающихся по минералогии почвы таким образом могут помочь изолировать пулов органического вещества с относительной однородности функциональных.
Цель данного документа – представить методологию для изолировать органо минеральных комплексов по составу, который затем облегчает изучение их свойств. Этот метод сочетает в себе размер и плотность фракционирование физически отделить основную почвы в последовательность фракций различного состава. Комбинированные размер и плотность фракционирование (CSDF) объединяет два подходы эффективной физической фракционирование (разделение частиц размер и плотность разделение). Сочетание этих двух подходов приносит улучшения резолюции для нашего понимания органо минеральных ассоциаций в почве.
Существует множество различных подходов (химические, физические и / или биохимических), которые могут использоваться для указания фракций в массовых почвы образца18,19. Фракционирование простой плотности является физическое разделение, которое широко используется учеными почвы для изучения динамики сом (см. например Грюнвальд et al., 2017 и ссылки на них)20. В своей классической форме простой плотность фракционирование отделяет материалы легче, чем заданный отсечки (как правило от 1.6 до 1,85 g·cm-3) – легкой фракции (LF) из тяжелых материалов – тяжелые фракции (hF). LF иногда далее разбить на свободной легкие фракции (ФАЛ) и перекрытых легких фракций (ФОО)21.
В многих почвах крупнейший бассейн SOM находится в ВЧ22. СОМ в ВЧ обычно считается более стабильной, чем в LF23, но было показано, чтобы сохранить высокий композиционные и, вероятно, функциональных неоднородность18. Это указывает на необходимость дальнейшего отдельные ВЧ в более однородных подгрупп, с мнением изолируя пулы сом с отдельных биогеохимических свойствами (например время пребывания или функциональность). Последовательные плотность фракционирования, как описано в Sollins et al. (2009)24, действительно оказался успешным методом; Однако разделение делается исключительно на основе плотности рискует видом на различия, обусловленные вариации в размер зерна и, таким образом, удельная поверхность. К примеру каолинит имеет примерно такой же плотности как кварц, но могут быть разделены на основе его размер режим (Таблица 1). CSDF включает рассмотрение размера зерна и улучшает резолюции фракционирования.
Фракционирование сом, основанные на физических, химических или биохимических свойств имеет долгую историю. Физические методы, такие как CSDF основаны на физических атрибутов почвы компонентов, таких как размер (частиц или агрегаты) или плотности. Химические методы включают селективного извлечения определенных соединений или классов соединений, а также химическое окисление. Биохимические методы полагаются на микробные окисления различных экспериментальных условиях. Химические и биохимические методы основаны на различных принципах и имеют разные цели, по сравнению с физическими методами, но тем не менее кратко рассматриваются ниже.
Щелочное экстрагирование (с гидроксидом натрия например) выстраивает в ряд среди ранних методов, используемых для химически изолировать компонент органических почв6. Более современные, химические методы для СОМ фракционирование примеры я) Щелочное экстрагирование с Na пирофосфата, направленных на изоляцию сом, обязан минералов; II) кислотного гидролиза (HCl), направленных на количественной старый, постоянные сом; и iii) селективного окисления сом с химическими агентами, направленных на нападение бесплатно или лабильной сом2. Хотя эти методы могут быть полезны, чтобы разобраться в бассейн функционально различных органических веществ, они страдают от нескольких ограничений. Во-первых извлечения может быть несовершенным или неполными. К примеру классической щелочной метод извлекает только 50-70% почвы органического углерода (SOC)6. Во-вторых фракционирование продукты не могут быть репрезентативными сом, найденных на месте и может быть трудно классифицировать5. В-третьих эти химические методы предлагают только ограниченное понимание взаимодействия органо минеральные, поскольку многие из них не сохраняют оригинальные связь между органические вещества и минералы.
Биохимические добычи, включая инкубаций экспериментов используются главным образом для изучения лабильных и реактивной сом (см. Strosser32 для обзора биохимических методов). Инкубационный экспериментов можно рассматривать как меру биохимическая потребность в кислороде и интуитивно хорошо подходит для определения биодоступной органических субстратов. Однако потребность в длительный инкубационный раз в условиях, которые отличаются от поля (температура, влажность, физические нарушения, отсутствие новых материалов) делает экстраполяции динамики сом в situ деликатный.
По сравнению с химические и биохимические методы, которые считаются трансформативных или разрушительной, фракционирование в физических методов можно рассматривать как более консервант22 (с важным исключением растворимых органических соединений, которые теряются во время процедуры). В их лучшее, физической почвы дроби можно рассматривать как «моментального снимка» твердой фазы почвы компонентов как на местах и может, таким образом более непосредственно касаются сом динамика в situ33. Кроме того неразрушающего характер метода означает, что фракции могут впоследствии квалифицироваться с использованием различных анализов или дальнейшего фракционированный согласно химические и биохимические методы.
Физические фракционирование почв идея не последние. Научная литература о физическое разделение методов восходит к середине 20 века. Применения плотности фракционирование сообщалось еще в 1965 году34,35. В тот же период и в последующие десятилетия публикации о динамике сом и его взаимодействие с минералами уже становится широко распространенной среди почвы ученых36,,3738,39 .
Разделение по плотности, совокупный размер размер или частиц являются наиболее распространенными физическое разделение методы, используемые в настоящее время. Одна из главных задач физического разделения является изоляции однородного функционального сом бассейнов, как определено очередь за скорость, размер или другие индикатор функции. Сочетание методов разделения или критерии, как CSDF, может помочь функциональным урегулирование фракций почвы; действительно эти методы, как представляется, больше и больше используется в комбинации18,40,,4142,43. Путем комбинирования последовательных плотности разделения, может приносить фракций с различных органических веществ и минералогического состава, с разделением размер, который приходится различий объясняется удельной площади поверхности, CSDF обещает дает представление о разнообразии и функции органо минеральных ассоциаций в почве.
CSDF стремится физически фракционировать массовых проб почвы на фракции относительной минералогических и текстурные однородности. Плотность и частиц размер отключений, а также рассеивания энергии, используемой здесь были выбраны на основе типа нашей почвы, но эти параметры могут быть адаптированы в зависимости от образцов быть фракционированный и цель исследования. В этом примере мы решили использовать дисперсии один шаг, два плотности и один размер обрезков, результате разделения сыпучих почв на 6 фракций (Таблица 2). Рисунок 1 дает концептуальный обзор метода. Материалы, будучи фракционированный здесь являются тропические почвы, но этот метод может применяться для любого типа почвы, а также отложениями. CSDF обычно используется в качестве подготовительного шага до дальнейшего анализа, несмотря на то, что распространение материалов среди фракции может быть очень информативным, само по себе. При применении к почвам, CSDF дает разные (1) минеральный состав (минералогии и текстуры) и концентрации (2) сом и состава фракций.
Успех CSDF экспериментов зависит от выбора соответствующих параметров для метода, так что фракций относительно однородные композиции могут быть изолированы. Ниже обсуждаются основные соображения при выборе параметров фракционирования.
ФАЛ представляет органического вещества, для которого взаимодействие с минералами является минимальным. Извлечение этой фракции является деликатным, поскольку перемешивания почвы с густой раствор может уже распад некоторых макропоказателей. Есть, однако, признаки органического вещества, присутствующие в макропоказателей может быть больше похож на фал stricto sensu , чем к ФОО, выпущенное высокоэнергетических sonication18. Некоторые авторы даже предложили низкой энергии sonication шаг, чтобы изолировать пул свободных и слабо взаимодействующих минерал органического вещества, называют «внутри совокупных органических частиц», iPOM54.
Для выпуска перекрытых органического вещества различные методы существуют сорвать агрегатов почвы. Наиболее распространенными являются sonication, агитации с стеклярусом и использование химических диспергентов33,,6263. Sonication был выбран здесь, потому что выход энергии может точно управляться и считается более или менее равномерно распределить в образце. На исключающее необходимость использование химических диспергентов, sonication может рассматриваться как относительно консервант к органо минеральных комплексов22,33. Дисперсия шаг, однако, остается одним из наиболее сложных операций. С одной стороны слабая дисперсия будет оставить нетронутыми агрегатов и может привести к завышенной оценке ВЧ SOC; с другой стороны весьма энергичные дисперсии шаг может привести к перераспределению SOC различных фракций частичное разрушение органо минеральных комплексов. Слабые органические песок ассоциации могут быть особенно уязвимы в этот процесс. Так как окклюзии агрегатов и поверхности сорбционных процессов происходящих вдоль континуума2, идеального решения не существует. Таким образом уровень энергии sonication необходимо скорректировать задумчиво согласно свойств почвы. Кайзер и Берхе64 опубликовал весьма полезный обзор, который предлагает стратегию для сведения к минимуму артефактов, вызванных УЗИ при диспергировании почвы.
Сообщил sonication энергии в диапазоне от 60 до 5000 J·mL-1. Несколько исследовательских групп сообщили, что 100 J·mL-1 может быть достаточно уничтожить макропоказателей и эффективно разгонять песчаных почвах, в то время как 500 J·mL-1 будет уничтожить большие microaggregates и обеспечить разумную диверсификацию реактивной почвы63,65,,6667,68. В схемах физических фракционирования полной дисперсии ила и глины размера агрегатов не может быть необходимым, поскольку механизм защиты может стать неотличимым от сорбционной стабилизации в этих диапазонах размера. Разумную цель дисперсии до размера или плотности фракционирование может быть сорвать макро-(> 250 мкм) и большой микро-(> 53 мкм) агрегатов. Энергии 100 J·mL-1 (песчаных почвах)-200 J·mL-1 (суглинистые почвы) может быть соответствующие варианты. Энергия 200 J·mL-1 уже может извлечь часть микробных метаболитов (предположительно связанных минеральной)69, таким образом на использование энергий высших sonication должно быть предупреждение. Однако минералогически реактивной почвы с укрепил агрегатов может потребоваться до 500 J·mL-1 , чтобы разойтись. Важно скорректировать рассеивания энергии, с тем чтобы соответствовать каждый тип почвы, а также изучить цели. Наконец важно помнить, что даже после якобы полной ультразвуковой дисперсии, глина размера microaggregates скорее всего сохранится70.
Трудности с согласования методов физической фракционирование проживает в неоднородности, найденный в почвах, в частности в их минерального состава. Выбор плотной решения должны приниматься на основе известных или выведен Минералогия почв, с конечной целью изолировать фракций, которые максимально возможной однородности.
В этой статье густой раствор используется был SPT – рН 371,72. Низкий рН минимизирует потери растворимых органических соединений. Однако плотность фракционирования может выполняться с различными плотной решения. Исторически органические жидкости были используемые (tetrabromoethane, тетрахлороматана), но постепенно были покинуты на прибыль неорганических солей (натрия йодид, SPT) из-за токсичности галогенированные углеводороды и присущие загрязнение почвы Органика. В настоящее время, SPT является предпочтительным решением, потому что его плотности может быть скорректирована между 1.0 до 3.1 g·cm-3, он может быть переработан и имеет низкую токсичность (если организм)22,50. Основные производители предлагают диапазон SPT сортов, отличающихся уровнем загрязнения углерода и азота. Для фракционирования плотности грунтов чистейшей класса рекомендуется, особенно если фракции должны быть проанализированы для изотопного состава.
Раствор плотностью 1,6 g·cm-3 классически был использован для отделения легких органических от связанных с минеральной фракций – см, например, Golchin et al.21. Хотя некоторые авторы полагают, что плотность 1 g·cm-3 (вода) может быть достаточно, чтобы извлечь большую часть легкой фракции73,74, другие имеют предложенных выше плотность обрезков например 1.62 или 1,65 g·cm-3 на основе идея о том, что некоторые органические компоненты может показать плотность до 1,60 g·cm-3 33,,7576. Плотность выше, чем 1.85 g·cm-3 были даже занятых50. При выборе плотности отделить свет от тяжелых фракций, следует отметить, что существует не идеальное решение. Действительно снизить риск плотности, приписывая некоторые «свет» organics тяжелых фракций, при более высокой плотности риска, включая некоторые минералы в легких фракций. Этот последний эффект может быть обнаружен при наблюдении содержание углерода легких фракций, с % SOC ниже 40-45%, указывающий определенную степень минеральных загрязнений.
Для тяжелых фракций, предварительный анализ таких XRD может обеспечить проницательность в минералогии основная образца60 и помочь определить плотность обрезков способен различать между основными компонентами минеральные почвы, имея в виду, что высокие органические нагрузок будет ниже плотности минерала по сравнению с его теоретическое значение. Аналогично для разделения размер частиц, текстурного анализа77,78 может помочь установить соответствующие ограничения. Размер частиц разделение является особенно привлекательным дополнением к простой плотность фракционирования, всякий раз, когда последовательные плотность фракционирование трудно. Это так например для грунтов, содержащих большое количество oxyhydroxides и низкой активности глин, которые приводят в пример дисперсии и предотвратить ясно цветоделения в тяжелых жидкостей. Размер частиц разделения шаг указывается также отделить минералы плотностей аналогичных но разных размеров (например, quartz и Иллита).
Ионы кальция бесплатные будет реагировать с SPT образовать нерастворимый Ca metatungstate. Таким образом процедура не подходит для щелочных почвах, содержащих большое количество плохо кристаллический, pedogenic карбонатов. Небольшое количество карбонатов низкой реактивности не мешают фракционирования, пока образцы не оставили контакт с SPT слишком долго. CA metatungstate осадков приведет к завышенной оценке фракция масс. Если LFs запускаются на элементарный анализатор концентрации C, проблема будет обнаружен, но фракционирование будет скомпрометирован.
Помимо этих технических трудностей фундаментальное ограничение CSDF (или любой схемы физической фракционирование) проистекает из того факта, что реактивной минералов в почвах редко встречаются как дискретные отделяет, но вместо этого, как покрытия и цементов. Возникновение высокой сорбционной но очень тонких покрытий на иное инертных минералов (таких, как кварц) может привести к предвзятое мнение органо минеральных ассоциаций. Осторожность требуется, таким образом при интерпретации результатов, особенно для почв, чьи реактивности доминируют плохо кристаллический и фазы оксида. Дальнейшие характеристика фракций могут помочь облегчить такую неопределенность. Тем не менее детальной физической фракционирование методы, такие как CSDF имеют непревзойденную возможность разобраться в состав естественным органо минеральных комплексов. Такое понимание ожидается выход нового понимания биогеохимии крупнейший бассейн органического вещества в почвах, минеральной связанные одной.
The authors have nothing to disclose.
Развитие этого метода было поддержано любящая(ий) инвестиционный фонд (функции FРАСПОБР) Факультет геологии в университете Лозанны. Мы признаем Уганды Национальный совет по науке и технике и Управление дикой природы Уганды для предоставления нам разрешение на сбор образцов для исследований. Далее авторы хотели бы поблагодарить профессора Тьерри Adatte CHN и XRD анализа. Мы признательны для проф Erika Марин-Spiotta для обеспечения начальной подготовки в классической плотность фракционирования. Мы также благодарим Лаборатория менеджер Laetitia Monbaron за помощь в обеспечении снабжения и оборудования.
Fractionation | |||
Sodium polytungstate | Sometu | SPT 0 (low C and N) is recommended. Lower grade polytungstate may contaminate samples. | |
Hydrometers (1-1.5, 1.5-2, 2-2.5, 2.5-3 g.cm-3) | Allafrance | Calibrated at 20 °C, e.g. 3050FG250/20-qp | |
Vortex mixer | Fisher | Fixed speed standard vortex mixer, e.g. 02-215-410 | |
Sonifier | VWR | Qsonica LLC – Q500 system with standard probe 4220 | |
Sonifier stand | VWR | Large clamp stand | |
Sonifier enclosure | VWR | Soundproof cabinet (optional) | |
Swinging-bucket centrifuge | Beckman | Able to achieve speeds of 4000 g or more, fitted with rotor accommodating 50 mL Falcon tubes | |
High-speed centrifuge with fixed angle rotor | Beckman | Able to achieve speeds of 7500 g or more, fitted with rotor accommodating 250 mL bottles | |
50 mL centrifuge Falcon tubes | Corning | e.g. 352070 | |
250 mL centrifuge bottles | Beckman | Polycarbonate bottles (e.g. 352070) are recommended because they are clearer than other plastics. | |
Vaccum filtration units | Semadeni | Polusulfone reusable units, e.g. 3029 | |
Polypropylene hose | Semadeni | To connect the filtration unit to vaccuum source | |
Ultrafiltration disks, 0.45 µm pore size | Millipore | e.g. HAWP04700 | |
Dessicator cabinet | Fisher scientific | 3 shelves, e.g. 305317-0120 | |
Drierite absorbent indicating | Millipore | Blue drierite, e.g. 10276750 | |
Scintillation vials | Fisher scientific | HDPE – separated cap 20mL, e.g. 12341599 | |
150 mL aluminium boats (smooth sides) | Fisher scientific | Any model. | |
Laboratory oven | Fisher scientific | Any model. | |
Recycling SPT column | |||
Cation exchange resin | Sigma-Aldrich | Dowex® Marathon™ C sodium form, strongly acidic, 20-50 mesh | |
Activated charcoal | Sigma-Aldrich | Darco S-51, 4-12 mesh | |
Glass wool | Fisher scientific | Pyrex | |
Filter paper, 2.5 µm pore size | Sigma-Aldrich | Whatman grade 42, e.g. WHA1442150 | |
Hydrogen peroxide | Sigma-Aldrich | Reagent grade. | |
Ethanol | Sigma-Aldrich | Reagent grade. | |
Polycarbonate 1000mL graduated cylinder | Semadeni | Any model. | |
Stand and clamp | Sigma-Aldrich | Size L – 2-prong | |
Polypropylene hose | Semadeni | Any model. | |
Polypropylene hose clamp | Semadeni | Any model. | |
Polypropylene funnels | Semadeni | Any model. | |
Polypropylene bottle (1L, 2L) | Semadeni | Any model. | |
Heating plate | Fisher scientific | Any model. |