シンプルかつ強力な可視化と薬理学的ターゲットの評価法として放射線写真法

放射線は、放射性崩壊の画像を提供する方法です。テクニックは、日常的に関心体外に基づく放射性標識化合物とそのターゲットの特定の薬理学的相互作用の蛋白質の組織分布を調査する使用されます。これは、ターゲットのリガンドの選択性について直接的な情報を提供します。体外放射線写真法は、決定するだけでなく、解離定数 (K_d) などの結合部位 (B_最大)、密度イメージングに関する基礎的薬理学的バインディング パラメーターの定量のためにまた使用されるかもしれません競合するリガンド^1,2の阻害定数 (K_i) です。オートラジオグラフィーによる伝統的な磨砕液放射性リガンド結合と比較して、空間の解剖学を視覚化することができるという、地域性の表現パターン³の簡潔な詳細を与えることの利点があります。したがって、放射線写真法のメソッドは検証された抗体の有無を中心に、各種の関連する代替です。ミクロトーム クライオスタット切片、および適切なイメージングを準備するために、必要な薬理学的特異性と適切なリガンドの可用性を与えられる標準的なラジオ アイソトープ実験室の放射線写真法を簡単に実装します。それぞれティッシュ セクションの放射能の分布を分析することができるデバイス。特に、リガンドの重要な選択基準は、非ターゲット サイトへのバインドの限られた量です。これは他の蛋白質、膜やプラスチックやフィルターなどの材料にすることができ、総称して非固有のバインドと呼びます。通常非特異的結合非飽和ですが特定のオフのターゲット蛋白質を含む場合は飽和することができます。True 特定のバインドを検証する最良の方法は、組織の遺伝子、例えばターゲットを欠けていると比較する設計 (ノックアウト) 組織⁴です。

ここでは、方法論は、γ-ヒドロキシ酪酸 (GHB) 哺乳類の脳の高親和性結合部位のオートラジオ グラフの特性で示されています。GHB は両方臨床的に有用な薬剤アルコール依存症⁵ナルコレプシーの治療だけでなく、哺乳類の脳とレクリエーションの天然成分で、関連性は GHB とその結合部位の薬理学的相互作用を理解すること薬⁶。高親和性 GHB 結合部位は、ラット脳ホモジネート⁷[³H] GHB のバインディングを使用して記述されていた最初。年間、[³H] を用いたオートラジオグラフィーによる研究をさらに GHB とアナログ [³H] NCS 382 結合ラット^8,9,10, マウスの⁹の領域を脳の部位の高密度を示しました、¹¹、猿と人間の脳の¹²の豚。ただし、分子のアイデンティティおよびこれらの結合部位の機能的関連性正確なは、とらえどころのない残っています。

異なる親和性に恵まれている異なる同位体を組み込んだ複数イメージングに関する基礎的、さらに結合部位を特徴付けると生理的ガンマヒドロキシ酪酸の役割に関する研究を容易にする意図で開発されている ([³H] GHB、[³H] NCS-382、[³H] HOCPCA および [¹²⁵私] BnOPh GHB)^13,14,15,16(文献¹⁷) (図 1)。選択的な高親和性イメージングに関する基礎的およびイメージング技術^9,11蛍光体を用いた高品質画像の生産のためのサイトが認められているバインディングの非常に高い組織密度の組み合わせ。オートラジオグラフィーによる実験とイラストの設定詳細を実証するための実践的なポイントの概要、と一緒にディスカッション セクション i) 放射性核種の選択、ii) アッセイ条件の選択および iii) 蛍光体の使用を強調します。対 x 線フィルム イメージング プレート。本稿の全体的な目標は、組織分布と標的タンパク質の薬理学的解析について知らせるためオートラジオグラフィー技術に関する技術、方法論的、科学的な詳細を提供することです。