Indução de Intestinal enxerto versus doença-- host e sua avaliação endoscópica-Mini em ratos ao vivo

Malignidades hematopoiéticas directamente decorrentes do compartimento de células-tronco hematopoiéticas e descontrolada, progredindo rapidamente e distúrbios graves de imune-mediada são frequentemente indicações para executar allo-HCT^1,2. No entanto, apesar de contabilidade para a ocorrência da resposta enxerto-versus-tumor prognóstica benéfica, linfócitos do doador são frequentemente induzindo e promovendo um ataque imune-mediada indesejado de componentes de tecido saudável dentro do destinatário allo-HCT , um processo que é chamado de doença do enxerto – versus – hospedeiro³. Manifestações no intestino, o so-called GvHD intestinal, representam a mais temida complicação da DECH aguda, formas graves de que são rotineiramente associadas com uma elevada taxa de mortalidade^1,2,4.

Modelos globais, murino de allo-HCT têm emergido como inestimáveis ferramentas para identificar e estudar mecanismos imune-mediada subjacentes a patogênese da GvHD⁵. No entanto, avaliação cinética de, por exemplo, efeitos benéficos do romance intervenções terapêuticas ao longo do tempo em ratos vivos rotineiramente baseia a determinação da GvHD clínico pontuações⁶. Enquanto essas pontuações são adequadas para refletir, por exemplo, a carga doença global (ou seja, a DECH sistêmica), clínica marca falta a sensibilidade para espelhar confiantemente manifestações específicas do órgão (por exemplo,, no intestino). Portanto, as conclusões, por exemplo no que diz respeito a efeitos de intestino-protetor de uma determinada intervenção terapêutica, que se baseiam estes sistemas de pontuação, geralmente deixam a desejar.

Apesar dos grandes avanços através da invenção de novela todo o corpo de imagem modalidades em combinação com o uso de qualquer rato genética bioluminescentes ou fluorescente modelos^7,8, metodologias para diretamente e especificamente avaliar o intestinal manifestação da DECH em ratos vivos estão faltando. Portanto, a lógica por trás do protocolo da avaliação endoscópica do fenótipo intestinal GvHD descrito na próxima seção é para ultrapassar este obstáculo. Além disso, a motivação também é reduzir o número de ratos experimentais desde que, até agora, uma avaliação detalhada das características morfológicas, celulares e moleculares (por exemplo,, por histopatologia ou biologia molecular) de GvHD intestinal manifestação em última análise, é exigido o sacrifício do mouse experimental.

Nossa instituição tem relatado anteriormente na metodologia de uma miniendoscópica avaliação das manifestações do cólon, no curso de modelos de colite syngeneic⁹. No protocolo apresentado aqui, nós temos refinado e adaptado a polictomia matriz de Pontuação para colite alloresponse-conduzido em camundongos ao vivo com GvHD intestinal após transplante de alloreactive linfócitos HCT e doador em uma classe de MHC eu totalmente incompatíveis configuração . Identificamos quatro parâmetros adequados para refletir intestinais lesões do cólon DECH-relacionados. Além disso, nós estabelecemos um sistema que permite uma classificação aperfeiçoá-lo de qualquer determinante único, resultando em uma nova partitura que prontamente informa o leitor sobre a gravidade da GvHD intestinal presente em um determinado do mouse em um ponto determinado do tempo. Análises histopatológicas confirmaram que um escore endoscópico acima de um determinado limiar confiantemente está prevendo a inflamação do tecido de grau moderado a alto. Portanto, avaliação endoscópica-mini parece representar um substituto do trabalho para a Histopatologia do padrão-ouro que rotineiramente exige o sacrifício dos ratos experimentais. Importante, este protocolo pode ser aplicado em praticamente qualquer ponto de tempo determinado e pode ser usado várias vezes durante o curso da doença^10,11. Além disso, em contraste com o uso de abordagens de bioluminescência-dependente, não do trabalho intenso e demoradas como intercrossing geneticamente modificados ratos são necessárias medidas e, portanto, a metodologia pode ser aplicada em praticamente qualquer linha de rato de interesse.

Tomados em conjunto, do ponto de vista clínico prejudicial de allo-HCT os pacientes com DECH intestinal grave, rápidos progressos científicos e mais insight sobre os mecanismos moleculares subjacentes a patogênese imunológica são urgentemente necessários. Da mesma forma, considerações importantes, éticas exigem que o ganho de conhecimento deve ser alcançado com o uso do número mínimo de ratos experimentais. Portanto, ambos reconhecidos créditos sobre a comunidade de pesquisa explorando GvHD intestinal podem ser avançados implementando seriais avaliações miniendoscópica do cólon na cadeia de trabalho experimental para monitorar e grau GvHD intestinal no rato experimental ao vivo modelos, como descrito e validados no protocolo aqui apresentado.