Трансдермальные измерение скорости клубочковой фильтрации в мышей

Эта рукопись и сопровождающие видео обучение обеспечивают практические руководящие принципы для использования трансдермального ГБР мониторов у мышей. Наиболее важные шаги в процедуре являются правильное вложение устройства на спине животного и надежно упаковочная лента вокруг живота. Лучшие позиции либо слегка влево или вправо от средней линии, над грудной клетки. Патч и устройства должны быть прочно прикреплены к коже, но они не должны быть настолько плотно, что они ограничивают дыхание, движение, или влияют на циркуляцию крови в коже под устройство, поскольку это приведет к неисправности/неточным измерениям. Кроме того поскольку мониторинг происходит сознательное мышей после того, как они оправились от наркоза, исправьте размещения устройства со стороны тела с низкие помехи от движения результаты измерения трансдермальных с маленькой артефакты движения. По этой причине, важно, чтобы прибор не находился слишком близко к верхних конечностей, так что мышей можно свободно перемещать их плечи.

Важно депилировать мышей одного-двух дней до ГБР измерения, как депиляция влияет на измерение зазора FITC-sinistrin, с предварительные данные, свидетельствующие о что депиляция непосредственно перед измерением трансдермальных ГБР увеличивает очевидной half-life FITC-sinistrin. Механизм для этого неизвестна. Таким образом для получения надежных результатов измерений, над несколькими моментами времени и между эксперименты, желательно депилировать мышей заранее, чтобы позволить коже оправиться от этого процесса, прежде чем продолжить с ГБР измерения. Крем для депиляции не должны применяться к той же области кожи в течение 72 ч, предварительного приложения, чтобы избежать химического повреждения кожи. Во многих случаях мех ре роста занимает несколько дней или неделю, и так можно легко избежать повторного применения депиляции кремом в течение 72 ч.

Потому что до 50% сыворотки креатинина экскретируется трубчатой секции в мышей¹³, и потому, что есть повышение реабсорбции мочевины из почечных канальцев, когда мышей обезвоженной¹⁴, креатинина сыворотки и булочка бедных маркеры функции почек. Однако из-за их удобства, эти анализы по-прежнему использоваться в качестве основной мерой почечной функции в доклинических исследованиях Аки и CKD мышей. Однако в соответствии с крупным вкладом трубчатых секреции экскреция креатинина у мышей с нормальной или рядом с нормальной функцией почек¹³, креатинина сыворотки показали мало корреляция с FITC-sinistrin Распродажа ставкам высокий просвет (низкая Период полураспада FITC-sinistrin), указав, что креатинина является нечувствительным мерой функции почек у мышей с мягким почек травмы. Напротив в то время как булочка хорошо коррелирует с FITC-sinistrin Распродажа в мышах с мягкой почечной недостаточностью, существует бедных корреляция между Бун и FITC-sinistrin Распродажа в мышах с более тяжелой травмы почек (высокая half-life FITC-sinistrin). Вероятно, это вызвано эффектов мочевины реабсорбции, связанные с обезвоживанием в больных животных с тяжелой почечной травмы.

Основным преимуществом трансдермальных ГБР измерения, по сравнению с другими болюс Распродажа или постоянной инфузии методы для измерения ГБР, является, что она не требует тщательно просчитано крови или мочи коллекций. Это может быть особенно сложным в мышей, как они имеют томов низкий общий анализ крови и мочи вывода по сравнению с крысами. Кроме того мышей необходимо обрабатывать только для крепления устройства и инъекции, но не для нескольких венепункции, как это требуется для классических болюс Распродажа эксперименты¹⁵. Кроме того Продолжительность анестезии составляет короткий, и таким образом это можно выполнять повторные измерения в отдельных мышей с течением времени. Частота, на которой измерения могут быть выполнены главным образом зависит от состояния здоровья мышей, исследователь способностей для внутривенных инъекций и местные институциональные правила о неоднократных анестезии сессий. В здоровых, ранен мышей Трансдермальные ГБР измерения может выполняться ежедневно, с минимальными или не неблагоприятные последствия для мыши. Однако раненых мышей, страдает от Аки или CKD вряд ли терпеть неоднократные анестезии сессий, а также здоровых мышей, и таким образом должна уменьшиться частота измерений.

Основным ограничением трансдермальных ГБР измерения, по сравнению с болюсным Распродажа методы измерения ГБР мышей является, что Кинетика выведения измеряются только изменения в интенсивности относительной флуоресценции со временем, а не как абсолютное трассирующими концентрации. Из-за этого это возможно только для измерения константа скорости единого экспоненциального распада экскрецию кинетические, который является очень близко смету ГБР, нормализации объема внеклеточной жидкости¹⁶. Выразить ГБР в мл/мин, внеклеточного объема животного должен рассчитываться с использованием коэффициентов, который был создан в предыдущих исследованиях, в которых одновременного измерения концентрации в плазме FITC-sinistrin были выполнены¹. Однако, этот фактор преобразования может не правильно оценить внеклеточной жидкости тома одинаково хорошо у всех мышей, поскольку объем жидкости может быть затронут целый ряд внешних факторов, включая возраст, секс, гидрации, (которые могут быть затронуты хирургические вмешательства, а также травмы почек) и вес¹⁷. Однако в отличие от Болус, дозирование метод оценки ГБР в мышей, транскутанное ГБР измерение подлежит изменчивость меньше зависит от оператора как не подвержен дозирования ошибки или ошибки в сроках крови коллекции.

Еще одним ограничением чрескожной методика измерения ГБР является, что базовый сигнал смены может произойти в ходе измерения благодаря отбеливанию кожи флуорофоров и анестезии, необходимые для устройства привязанность и трассирующими инъекций. Это ограничение было направлено Фридеман и коллеги путем реализации алгоритма коррекции³. Реализация этого алгоритма, привело к повышению точности метода трансдермальных сопоставимы с постоянной инфузии техника ГБР оценки.

Часто задаваемые вопрос, влияет ли пигментации кожи в различных мыши штаммов трансдермальных FITC-sinistrin распродажа. Пигментация кожи уменьшает интенсивность сигнала FITC-sinistrin, так как темные пигменты поглощает синий возбуждения и зеленый выбросов сигналы из FITC-sinistrin измерений. Однако, скорость экскреции FITC-sinistrin независимо от общей интенсивности сигнала. Кроме того в то время как измеряемый сигнал ниже, фонового сигнала также ниже в пигментированные мышей. Потому что фонового сигнала представляет собой смесь аутофлюоресценция кожи флуорофоров и отражение света возбуждения, мы нашли, что отношение фон максимальный сигнал сопоставимых, или даже более, в пигментированных животных. Кроме того движение артефакты, которые вызваны воздействием окружающей кожи для отраженного света, сокращаются пигментированные мышей, поскольку отраженный свет поглощается пигментированной кожи.

В заключение техника, которую мы представили позволяет точное измерение ГБР в сознании, свободно перемещающихся мышей всех типов кожи. Как метод независимо от забора крови, он может использоваться неоднократно на то же самое животное для продольной наблюдений в CKD моделей, а также для измерения быстрых изменений ГБР, которые происходят после индукции Аки.