उच् च कव ट्रा द्वारा निगरानी की गई चूहों में ठहराव से प्रेरित गहरी नस घनास्त्रता
Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल एक ठहराव मॉडल का उपयोग कर शिरापरक घनास्त्रता प्राप्त करने के लिए चरणों का वर्णन करता है । इसके अलावा, हम समय के साथ थक्का गठन और संकल्प को मापने के लिए एक गैर इनवेसिव विधि का उपयोग कर रहे हैं ।
Abstract
शिरापरक घनास्त्रता एक आम आबादी का 1-2% प्रभावित हालत है, ५०० में 1 की वार्षिक घटना के साथ । शिरापरक घनास्त्रता फुफ्फुसीय आवेश या परिणाम के बाद थ्रोम्बोटिक सिंड्रोम के माध्यम से मौत के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, जीर्ण पैर दर्द की विशेषता, सूजन, और अल्सर, या जीर्ण फेफड़े के महत्वपूर्ण जीर्ण श्वसन में जिसके परिणामस्वरूप उच्च रक्तचाप में समझौता. यह रोधगलन और कोरोनरी स्ट्रोक के बाद सबसे आम हृदय रोग है और सभी चिकित्सा विषयों के लिए एक नैदानिक चुनौती है, क्योंकि यह इस तरह के कैंसर के रूप में अन्य विकारों के पाठ्यक्रम जटिल कर सकते हैं, प्रणालीगत रोग, शल्य चिकित्सा, और प्रमुख आघात.
प्रयोगात्मक मॉडल इन तंत्र का अध्ययन करने के लिए आवश्यक हैं । ठहराव मॉडल सुसंगत थक्का आकार और थक्का की एक quantifiable राशि लाती है । तथापि, यह व्यवस्थित अवर वेना कावा के पक्ष शाखाओं ligate करने के लिए थक्का आकार और किसी भी गलत डेटा व्याख्या में परिवर्तनशीलता से बचने के लिए आवश्यक है । हमने ट्रा का उपयोग करके थक्का आकार मापने के लिए एक गैर इनवेसिव तकनीक विकसित की है । इस तकनीक का प्रयोग, हम एक ही जानवर में समय के साथ थक्का विकास और संकल्प का आकलन कर सकते हैं । इस दृष्टिकोण के प्रतिस्थापन, कमी, और अनुसंधान में पशुओं के शोधन के सिद्धांत के साथ संगत शिरापरक घनास्त्रता के ठहराव के लिए आवश्यक चूहों की संख्या को सीमित करता है । हमने यह दर्शाया है कि थक्का का वजन और ऊतकवैज्ञानिक विश्लेषण थक्का आकार का स् ट्रा से प्राप् त माप के साथ सहसंबंधी करता है । इसलिए, वर्तमान अध्ययन कैसे अवर वेना कावा ठहराव मॉडल का उपयोग कर चूहों में गहरी नस घनास्त्रता प्रेरित करने के लिए और उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड का उपयोग कर इसे मॉनिटर करने के लिए कैसे का वर्णन करता है ।
Introduction
शिरापरक thromboembolism (VTE), जो गहरी शिरापरक घनास्त्रता (DVT) और फुफ्फुसीय आवेश शामिल है, रोधगलन और स्ट्रोक के बाद हृदय मृत्यु का तीसरा प्रमुख कारण है । यह एक आम की आबादी के 1-2% को प्रभावित करने की स्थिति है, 1 की वार्षिक घटना के साथ५००1 में । VTE के लिए नेतृत्व कर सकते हैं: 1) फुफ्फुसीय आवेश के माध्यम से मृत्यु; 2) के बाद थ्रोम्बोटिक सिंड्रोम, जीर्ण पैर दर्द, सूजन, और अल्सर की विशेषता; या 3) क्रोनिक फेफड़े के उच्च रक्तचाप महत्वपूर्ण जीर्ण श्वसन समझौता में जिसके परिणामस्वरूप । VTE एक बहु कारक रोग है और रक्त के प्रवाह के ठहराव से परिणाम हो सकता है, पोत दीवारों को नुकसान, और/या hypercoagulable जमावट और fibrinolytic प्रणालियों के बीच संतुलन के विघटन के कारण राज्यों, के रूप में यह एक सौ साल पहले से अधिक वर्णित किया गया है Virchow द्वारा और Virchow के त्रय के रूप में जाना जाता है ।
क्योंकि ज्यादातर मामलों में यह मानव DVT नमूने प्राप्त करने के लिए असंभव है, शोधकर्ताओं ने DVT के प्रायोगिक पशु मॉडल विकसित किया है. चूहा2, माउस3, खरगोश4, सुअर5, डॉग6, और गैर मानव रहनुमा7 सहित कई जानवरों का इस्तेमाल किया गया है । चूहों आनुवंशिक रूप से संशोधित किया जा सकता है और सबसे अक्सर इस्तेमाल किया जानवर DVT अध्ययन करने के लिए कर रहे हैं । हालांकि, सभी जानवरों के रूप में, चूहों में सहज DVT मनाया जाता है । इस प्रकार, नस दीवार के भौतिक या रासायनिक परिवर्तन चूहों में घनास्त्रता बनाने के लिए उपयोग किया जाता है । हम पहले घाट क्लोराइड मॉडल का इस्तेमाल किया है अवर वेना कावा (IVC) चूहों के8,9,10में घनास्त्रता प्रेरित । इस मॉडल की मज़बूती से मिनटों के भीतर पूर्णावरोधक थ्रोम्बी उत्पादन का लाभ है और तीव्र DVT के दौरान एंटी-कौयगुलांट और एंटी-प्लेटलेट दवाओं की भूमिका की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हालांकि, यह एक टर्मिनल प्रक्रिया है । इस प्रकार, तीव्र और जीर्ण DVT का अध्ययन करने के लिए, ठहराव मॉडल अधिक उपयुक्त है । इस मॉडल में, थक्का गठन IVC, DVT विकास के लिए Virchow के त्रय में कारकों में से एक में रक्त के प्रवाह की पूरी रुकावट से प्रेरित है । इस मॉडल के लिए DVT गठन और संकल्प है, जो एक फायदा है FeCl3 मॉडल11की तुलना में अध्ययन किया जा सकता है ।
हम एक गैर इनवेसिव विधि थक्का गठन और संकल्प का पालन करने के लिए समय पर एक माइक्रो इमेजिंग उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड प्रणाली12का उपयोग कर विकसित किया है । हम पहले से दिखा दिया है कि अल्ट्रासाउंड द्वारा शिरापरक घनास्त्रता की माप थ्रोम्बी रोग के साथ इष्ट को संबद्ध करता है । हम दो बाद के अध्ययनों में पुष्टि की है कि अल्ट्रासाउंड के साथ थक्का वजन और थक्का क्षेत्र quantified histochemistry9,10से सहसंबंधी के साथ प्राप्त की माप । इससे भी महत्वपूर्ण बात, हमें पता चला है कि उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड चूहों में गहरी शिरापरक घनास्त्रता के गठन की निगरानी करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है12. यह भी एक गैर इनवेसिव रास्ते में थक्का संकल्प यों तो इस्तेमाल किया जा सकता है ।
यहाँ, हम ठहराव-प्रेरित घनास्त्रता माउस मॉडल का उपयोग कर थक्का गठन की अनुमति प्रोटोकॉल का वर्णन करेंगे और कैसे थक्का गठन उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड का उपयोग कर समय के साथ गैर इनवेसिव निगरानी की जा सकती है.
Protocol
Representative Results
Discussion
वहां ठहराव मॉडल का उपयोग कर सफल शिरापरक थक्का गठन के लिए कई महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं । शिरा घनास्त्रता के प्रेरण अवर वेना कावा और महाधमनी आसपास वसा के संचय के कारण पुराने चूहों में अधिक चुनौतीपूर्ण है. आ…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम दिल और स्ट्रोक फाउंडेशन कनाडा और मॉरिस और बेला Fainman परिवार फाउंडेशन द्वारा से एक अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था । लेखक VEVO770 अल्ट्रासाउंड इमेजिंग प्रणाली के साथ उसे तकनीकी मदद के लिए Veronique Michaud शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।
Materials
| 6-0 perma-hand silk suture | Ethicon | 706G | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Suture tying forceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| blunt forceps (straight and curved) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| 1ml syringes | BD Biosciences | ||
| 26G needles | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 High Resolution Imaging System | Visualsonics | No longer sold | |
| SR Buprenorphine | ZooPharm | Given to LDI by Vet | |
| Surgery Microscope | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2×2 sterile Gauze | CDMV | #104148 | |
| Cotton Tip Applicators | from JGH | ||
| Transpore hypoallergenic surgical tape | CDMV | #7411 | |
| Ultrasound gel (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubator | From JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment | Dispomed | ||
| Hair remover | Nair | ||
| Water heated hard pad | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Gaymar heater water pump TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Infra-red heating lamp | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Mouse rectal temperature prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Sterile water | From JGH |
Referenzen
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