똑바로 Intravital 현미경 Murine Submandibular 침 샘의 준비

타 액은 음식에 기름칠을, 구두 관의 점 막 표면 보호 항균 물질^1,2뿐 아니라 소화 효소를 제공 하 고 전 분 비에 의해 은닉 된다. 구두 submucosa에 산재 된 작은 침 샘은 귀 밑, 설, 그리고 submandibular로 확인 하는 주요 동맥의 3 개의 양자 세트 그들의 위치^1,2에 있습니다. 플라스 크 모양의 낭 (acini)으로 구성 된 피라미드 모양의 상피 세포, myoepithelial 세포 및 지하실 막에 의해 포위 된다 demilunes 분 비 타 액¹의 장 액 및 점액 구성 요소 또는. 그들은 마침내 단일 배설 덕트¹에 가입 때까지 전기 덕트에 결합 삽입 된 덕트로 acini 빼낸의 좁은 luminal 공간. 서울시의 주요 배설 덕트와 튼의 덕트 (WD) 이라고 하 고 설 caruncle^3,4로 열립니다. SMG 상피 구획은 따라서 끝점과 매니폴드 터미널, 포도^1,,56의 번들을 닮은 높은 arborized 구조를 나타냅니다. SMG interstitium 혈액과 림프 혈관 결합 조직^{7 8} 부 교감 신경 신경 및 세포 외 매트릭스⁵에 포함 된 구성 됩니다. 일반 인간과 설치류 침 샘은 또한 T 세포, 대 식 세포, 및 수지상 세포⁹, 뿐만 아니라 플라즈마 세포 분 비 면역 글로불린 (IgA)는 타 액^9,10에 포함 되어 있습니다. 건강과 질병에서의 다각적인 기능, SMG은 치과⁴, 면역학¹¹, 종양학¹², 생리학⁸, 세포 생물학 등 생물학 연구의 많은 분야에 대 한 관심의 대상이 ³.

동적 세포질 프로세스와 상호 작용의 이미징 생물학 연구^13,14에서 강력한 도구입니다. 깊은 조직 이미징 및 혁신 inmicroscopes 비선형 광학 (NLO)에 따라 산란 또는 샘플에서 여러 개의 광자의 흡수에 의존 하는 개발 복잡 한 조직^{13 에서에서 세포 프로세스를 직접 검사를 수 있다 15}. 여러 개의 광자의 흡수 낮은 에너지 광자, 초점면에 어떤 경계 fluorophore 여기에 의해 총 여기 에너지의 납품의를 포함 하 고 따라서 초점에서 잡음 감소 photodamage와 깊은 조직 침투 수 있습니다. 여기^13,15. 이 원리 2 광자 현미경 (2 분)에 의해 고용 하 고 최대 1 m m^15,16의 깊이에 형광 표본의 이미징에 대 한 수 있습니다. 사용자 친화적이 고 믿을 수 있는 셋업 되 상용 2 오후 동안 intravital 이미징에 대 한 주요 도전 신중 하 게 노출 하 고 특히 시간 경과 시리즈의 이미지에 대 한 마 취 쥐의 대상 기관 안정입니다. 디지털 드리프트 보정 후 데이터 수집을 위한 여러 가지 방법을 게시^17,18 그리고 우리는 최근에 “VivoFollow”, 실시간으로 사용 하 여 느린 조직 드리프트를 중화 하는 자동된 보정 시스템 개발을 컴퓨터 단계¹⁹. 그러나, 그것은 여전히 고품질 이미징 조직 운동, 호흡 또는 하트 비트¹⁹기인 특히 빠른 움직임을 최소화 하기 위해 중요 합니다. 준비 및 안정화 절차 척수²⁰, 간²¹, 피부²²,²³, 폐 및 림프 노드²⁴를 포함 하 여 여러 장기에 대 한 출판 되었습니다. 또한, 쥐 침 샘 이미징 모델 개발된^3,25 되었고 더 높은 해상도 intravital 이미징 murine SMG는 거꾸로 한 현미경 설치^26, 에 맞게의 세련 된 ^{27 , 28}.

여기, 선물이 murine SMG의 intravital 이미징에 대 한 실용적이 고 적응력 프로토콜 intravital 이미징 면역학 분야에서 일반적으로 사용 되는 직 립 비선형 현미경을 사용 하 여. 이 위해, 우리는 오 금 림프절 준비에 사용 되는 널리 고용된 immobilization 무대 수정.