Evaluación sistemática de bienestar en ratones para procedimientos con anestesia General
Summary
Hemos desarrollado un protocolo para evaluar el bienestar en ratones durante procedimientos de anestesia general. Una serie de parámetros de comportamiento que indica los niveles de bienestar, así como se analizaron los metabolitos de glucocorticoides. El protocolo puede servir como una ayuda general para estimar el grado de severidad de una manera científica, centrada en el animal.
Abstract
En consonancia con el 3R principio (reemplazo, reducción y refinamiento) desarrollado por Russel y Burch, la investigación científica debe utilizar alternativas a la experimentación animal siempre que sea posible. Cuando no existe alternativa a la experimentación animal, el número total de animales de laboratorio utilizados debe ser el mínimo necesario para obtener datos valiosos. Por otra parte, deberían aplicarse medidas de refinamiento apropiado para minimizar el dolor, el sufrimiento y la angustia que acompaña el procedimiento experimental. Las categorías utilizadas para clasificar el grado de dolor, el sufrimiento y la angustia son recuperación, leve, moderada o grave (Directiva 2010/63). Para determinar qué categorías se aplican en casos individuales, es fundamental utilizar herramientas científicamente sólidas.
El protocolo de evaluación de bien ser presentado aquí está diseñado para procedimientos durante los cuales se utiliza anestesia general. El protocolo se centra en comportamientos de actividad del Mouse Grimace escala y lujo Casa jaula como madriguera o nido edificio comportamiento como indicadores de bienestar. También utiliza el paradigma exploratorio libre de comportamiento relacionadas con la ansiedad rasgo. Metabolitos de corticosterona fecal como indicadores de estrés agudo se miden durante el periodo post anestésico de 24 h.
El protocolo proporciona información científicamente sólida sobre el bienestar de los ratones después de anestesia general. Debido a su simplicidad, el protocolo puede fácilmente adaptado e integrado en un estudio planificado. Aunque no proporciona una escala para clasificar el peligro en categorías de acuerdo a la Directiva 2010/63, pueden ayudar a los investigadores estimar el grado de severidad de un procedimiento utilizando datos científicamente sólidos. Proporciona una manera de mejorar la evaluación del bienestar de una manera científica, centrada en el animal.
Introduction
UE Directiva 2010/631 establece que el principio 3R (reemplazo, reducción, refinamiento) desarrollado por Russel y Burch2 debe ser aplicada siempre que los experimentos con animales es necesario. El objetivo final de la Directiva es eliminar gradualmente toda la experimentación con animales, pero la Directiva reconoce que, por el momento, algunos experimentos con animales son todavía necesarios para investigar que proteja la salud humana y animal. Así, si un experimento animal no puede ser reemplazado por cualquier otro método, sólo el número mínimo de animales de laboratorio es utilizado para obtener resultados fiables. Además, debe reducirse la cantidad de dolor, el sufrimiento y la angustia que acompaña a procedimientos experimentales utilizando medidas de refinamiento apropiado. UE Directiva 2010/63 establece que la severidad de un procedimiento debe ser clasificada por anticipado como recuperación, leve, moderada o grave1. Como clasificación de gravedad se decide caso por caso, es importante tener herramientas científicamente sólidas para estimar la severidad de un procedimiento dado.
Hojas de puntuación propuesto por Morton y Griffith3 son una herramienta esencial en la detección de cualquier desviación del estado normal, incluyendo efectos negativos sobre el bienestar4. Hojas de resultados se utilizan para determinar retrospectivamente el dolor, sufrimiento, y angustia causados por un experimento en cambios visibles en el estado físico del animal individual (por ejemplo, peso corporal, piel, marcha). Aunque VIII anexo de la Directiva 2010/63 proporciona ejemplos de cada categoría de severidad, los investigadores todavía falta herramientas para estimar el grado de severidad de un procedimiento determinado científicamente con base de datos.
La ausencia de indicadores que demuestran bienestar negativo no es la única manera de determinar el estado del animal; la presencia de indicadores apuntando al bienestar positivo es también importante5,6,7,8. Por ejemplo, animales Mostrar comportamientos de lujo como madrigueras y nidifican edificio comportamiento sólo cuando se cumplen todas sus necesidades esenciales. Si se reduce el bienestar, conductas de lujo son los primeros en rechazar5,7. Protocolos a utilizar en la evaluación de bienestar deben incluir indicadores apuntando a los físicos, fisiológicos/bioquímicos y estados psicológicos de los animales para evaluar su bienestar en una forma detallada y completa9.
En el contexto de refinamiento, un protocolo fue desarrollado para cumplir estos requisitos y para evaluar los efectos de un procedimiento con anestesia general en el bienestar de ratones10. Al mismo tiempo, el objetivo era minimizar cualquier tensión adicional para permitir la fácil integración del protocolo en un experimento dado. El protocolo considera madriguera comportamiento, comportamiento de jaula casera como actividad, la ingestión de alimentos y nidificación y comportamiento relacionados con la ansiedad rasgo. Además, incluye la escala de mueca de ratón (MGS) y el análisis no invasivo de metabolitos de corticosterona en las heces. El protocolo está diseñado para facilitar la evaluación del bienestar de una manera científica y centrada en el animal y proporcionar información sobre bienestar compatible con la clasificación del grado de severidad. Además de hojas de calificación, puede proporcionar información útil para la clasificación de la severidad de un procedimiento. El protocolo es fácil de realizar y no requiere equipo extensa, puede integrarse en un experimento continuo sin influir en los resultados de un estudio. Cabe señalar que la investigación Animal: informes de en Vivo experimentos (llegar) pauta11 debe ser observado en todos los estudios de experimentación animal, con el objetivo de mejorar el diseño, análisis y presentación de informes.
Protocol
Representative Results
Discussion
El protocolo fue desarrollado originalmente para evaluar el bienestar de ratones C57BL/6JRj que recibió un solo anestesia o anestesia isoflurano repetidas. Los resultados confirman las pruebas de comportamientos de lujo, así como otras medidas (por ejemplo, el paradigma exploratorio libre, MGS, escarban la ingestión de alimentos) fueron métodos sensibles para evaluar el bienestar. Anestesia isoflurano repetidos causados a corto plazo efectos de comportamiento relacionadas con la ansiedad de rasgo, el MGS y e…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gracias a Sabine Jacobs para ayudar con la recogida de muestras, Edith Klobetz-Rassam para análisis de FCM, PD Dr. med. veterinario. habil. Roswitha Merle para ayudar a análisis estadístico y Wiebke Gentner para corregir el manuscrito. El estudio es parte de la plataforma de investigación de Berlin-Brandenburg BB3R (www.bb3r.de) y fue financiado por el Ministerio Federal alemán de educación e investigación (número: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).
Materials
| Isofluran | CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH | 1214 | |
| InfraMot – Sensore Units | TSE Systems | 302015-SENS | |
| InfraMot – Control Units | TSE Systems | 302015-C/16 | |
| InfraMot – Software | TSE Systems | 302015-S | |
| Nestlet N | Ancare – Plexx | NES3600 | |
| Camera EOS 350D | Canon |
Referenzen
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