血小板輸血で微粒子のスクリーニング法のルーチン

平均準備時間DL システムを使用してプロセスをスクリーニング血小板は、図 1のとおりです。血小板は、血液供給業者からの領収書の時間で DL システムがテストされます。表 1に詳細な訓練されたユーザーの平均準備時間は 2 分 23 秒でクリーンアップと事後テスト作業時間は 14 秒と 46 秒、それぞれ。合計では、平均的なユーザーは 3 分と 23 テストごとのハンズオン タイムの s。 アクティビティ アクティブな時間 徒歩距離のテスト時間 合計 DL のシステムを準備します。 14 s サンプリング ツールを組み立てる 28 s セグメントを取得します。 52 s 毛細血管を入力し、テストを開始 49 s 5 分 クリーンアップ 14 s タグと在庫の血小板バッグ 46 s サンプルごとに必要な合計時間 3 分 23 秒 5 分 8 分 23 秒 表 1: アクティブなテスト時間内訳。テスト自体は、5 分の平均時間と歩行距離テストです。平均的なユーザーは、テストの DL システムを準備、取得してこのプロトコルを次のサンプルをテストし血小板バッグのタグ 3 分 23 秒をかかります。 精度DL のシステムの精度は 0 7 3 つの微粒子レベルで評価された %、12-25%、28-75%。%Mp の臨床的に関連する範囲は 3 75% です。2 つの演算子は、並列で 2 つの DL システム 16 営業日の低、中、および高のコントロールのサンプルをテストしました。サンプルは、各試験日の重複がランダムな順序でテストされました。 表 2は、血小板に対する % 微粒子 (%mp) の DLS 測定のデバイス内で精度をまとめたものです。 微粒子コンテンツ 低 媒体 高 意味 %mp (%) 4.4 19.5 53.8 標準偏差 (%) 1.8 2.6 5.8 CV (%) 40.4 13.2 10.6 表 2: % 微粒子 (%mp) のデバイス内の精度です。小さな血小板 % に貢献するかもしれない非常に低い微粒子コンテンツで MP は低微粒子コンテンツ サンプルの変動を増加しました。 50 550 nm 間の平均微粒子半径の DLS 測定のデバイス内で精度を表 3に示します。 微粒子コンテンツ 低 媒体 高 半径 (nm) を意味します。 331 161 188 標準偏差 (mm) 133 41 25 CV (%) 40.1 25.2 13.5 テーブル 3: 微粒子の半径の内でデバイスの精度です。非常に低い微粒子でコンテンツの小さな血小板 % 微粒子 (%mp) に貢献するかもしれない低微粒子コンテンツ サンプルのばらつきの増加の結果します。 表 4は、DLS % 微粒子 (%mp) 測定の再現性を示します。 微粒子コンテンツ 低 媒体 高 意味 %mp (%) 4.4 29.2 53.6 再現性 (%) 1.5 2.3 5 CV (%) 35 11.8 9.4 表 4: % 微粒子 (%mp) の動的光散乱 (DL) 測定の再現性。 直線性DLS 結果は線形図 2ショー、すなわちサンプルの割り当てられた値に関して直線に合います。7 異なる微粒子コンテンツを用意しました。高 (MP7) と低 (MP1) 微粒子のコンテンツと一致する血小板濃度サンプル準備、中間サンプル (MPx) を作成する別の比率で混合します。サンプル フローサイトメトリー19および DL を前述のようにテストされ、各濃度 %mp 結果をプロットした入力と出力として。決定係数は 0.985 をことが判明しました。低、高微粒子コンテンツの DL のヒストグラムの例を図 3Aに。DL の結果は、フローサイトメトリー (図 3B) によって確認されました。 図 2: フローサイトメトリーと DL 結果の比較します。%Mp の線形関係は、オープンの記号 ○ でマークされた 2 つのサンプルから元の DL データは図 3に示すフローサイトメトリー (入力) と DLS (出力) によって決まります。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 3: 微粒子コンテンツ活性化および非活性化血小板を区別します。(A) MP は、活性化した血小板 (破線) でコンテンツの DL 結果非活性化血小板 (実線) で 4% と比較して 57% であった。37 ° C の測定温度で試験を行った 1.06 の血漿粘度設定 x10-3 Pa·s、および 200 600 kHz の間の合計強度の設定。(B) (A) に示すように同じサンプルのフローサイトメトリー結果 (19を前述のように取得) の流れ前方散乱のヒストグラムで P1 と P2 を表す MP と血小板のゲート;活性化した血小板のイベント (左) の 76% は非活性化血小板 (右) のための 6% と比べて MP ゲートに落ちた。回帰直線では、一貫して高い結果につながるフローサイトメトリーによる %mp にバック グラウンド ノイズの定数の相対的寄与を示唆しています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 特異性/干渉標準化機構 (ISO) の国際組織は、検出または他の量、サンプルで現在がある中、ここだけを測定する測定プロシージャの能力として解析的特異性を定義します。微粒子スクリーニングの解析的特異性は、赤い血球 (RBC) によって影響される可能性があります。DLS では、MP は血小板のコンテンツを基準にして、コンテンツを測定します。RBC は、MP の相対的寄与を減らす血小板の散乱の寄与で RBC の散乱の寄与が含まれるためにを妨げる可能性があります。血液製剤の許容 RBC コンテンツの規制が存在します。8.0 で血小板の結果の 1 つのユニットで RBC を満載の血小板濃縮 2 mL で RBC 恕の AABB によって推奨されるしきい値の保守的な変換 x1010セル/L (前提: 赤血球量が 8.5 x10-14L、パックされた赤血球のヘマトクリット値が 68%、血小板ユニットの体積は 200 mL)。さまざまな製品で報告された残留赤血球濃度がこのしきい値の46を下回るです。 3 つの異なるドナーは、3 つの独立実験の対象として、2 つの別の日に血小板と赤血球 (RBC) を寄贈しました。血小板製剤 (サンプル参照) で初期の RBC コンテンツは 0.05 – 0.15 x109セル/L 診断で決定されました。5 その他のサンプルは、スパイクで既知量の赤血球血小板の濃縮物; の因数にによって作成されました。これらのサンプルのターゲット赤血球レベルが 1.0、5.0、10、40、80 x109セル/l. 赤血球の干渉のしきい値は約 1.0 x1010セル/L (図 4)、赤色の血液細胞の存在が視覚的に明白である (図 5) にレベルと相関します。このレベルでは、上記は、ことで視覚的に赤のサンプルを含む赤血球ヘモグロビンの報告された微粒子のコンテンツが低すぎることがなくことを意味する %mp が過小評価されました。 図 4: %Mp (DL) と赤血球濃度 (セル/L) の線形関係。0.1 の赤血球濃度の増加 x1091.0 x109、5.0 x1091.0 x1010、4.0 x1010、および 8.0 x1010セル/L (左から右へ) (○ 実験 1、● 実験 2、□ 実験 3 の独立した実験から3、線形回帰直線が表示されます各実験のため)。1.0 を超える x1010 RBC/L %mp の過小評価に 。RBC 含むサンプルの外観は、図 5に示すです。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 5: サンプルを含む赤血球の外観。血小板の赤みサンプル含む赤血球濃度 0.1 x1091.0 x109、5.0 x1091.0 x1010、4.0 x1010、および 8.0 x1010セル/L 左から右へ。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 精度精度は、1 回の測定結果とサンプルに割り当てられた正しい量値の差として定義されます。この測定誤差には、測定バイアスによる推定体系的なコンポーネントと標準偏差から推定されるランダムなコンポーネントが含まれています。したがって、計測結果の精度、真度及び精度の組み合わせです。 標準的なビーズは、DL テストの精度を決定する使用されました。精度は、3 75 %mp のアッセイの臨床的に関連する範囲内で 2 つの濃度で評価しました。参照ビーズ混合参照ビーズは、既知のサイズと濃度を持っているので、既知濃度の試料を準備する使用されました。その結果、目的の粒径と濃度のサンプルを取得する参照ビーズをミックスできます。 微粒子を表す 125 nm radius 標準ポリスチレン ビーズを用い、1.5 μ m の半径のビーズが血小板を表すために使用されました。約 20%、50% の MP のコンテンツのビーズ混合微粒子分析の精度を評価しました。参照ビーズ表 5に示すように、分析証明書に関する文書化された粒子半径測定粒子の半径の精度を比較しました。 125 nm ビーズ 1.5 μ m ビーズ 分析証明書 分析証明書 20% MP 50% MP 20% MP 50% MP 半径を意味します。 122.0 事業は 1,138億 124.4 1.5 1.6 1.60 標準偏差 4.5 2.83 3.6 0.035 0.06 0.07 CV 3.60% 2.48% 2.89% 2.20% 3.74% 4.05% 精度 6.70% 2.00% 6.50 パーセント 6.30% 表 5: 動的光散乱 (DL) 測定の精度です。Dl サイズ比較結果 125 nm の半径 1.5 μ m の半径とビーズの分析証明書に対して混合物。