Un modello del ratto dell'ipoperfusione lieve intrauterina con stenosi Microcoil
Summary
Lieve ipoperfusione intrauterino è stato prodotto da stenosi dell’arteria con i microcoils metallici avvolti intorno le arterie uterine ed ovariche in ratti al giorno embrionale 17. Questa procedura ha prodotto prenatale ipoperfusione e restrizione della crescita intrauterina.
Abstract
Ipoperfusione/ischemia intrauterina è una delle principali cause di restrizione della crescita intrauterina/fetale, parto prematuro e basso peso alla nascita. Maggior parte degli studi di questo fenomeno sono stata effettuata in entrambi modelli con ischemia intrauterina severa o con grado di pendenza dell’ipoperfusione intrauterina. Nessuno studio è stato condotto in un modello su uniforme lieve ipoperfusione intrauterina (MIUH). Due modelli sono stati utilizzati per gli studi di MIUH: un modello basato sulla legatura del suturare di entrambi i lati del porticato arterioso formata con le arterie uterine ed ovariche, e un modello transitorio basato sul ritaglio l’arterie ovariche bilaterali e l’aorta con l’evidenza. Quei due modelli del roditore di MIUH hanno alcune limitazioni, ad esempio, non tutti i feti sono sottoposti a MIUH, a seconda della loro posizione nel corno uterino. Nel nostro modello MIUH, tutti i feti sono sottoposti ad un livello paragonabile di ipoperfusione intrauterina. MIUH è stato realizzato da stenosi delicata di tutte le quattro arterie d’alimentazione dell’utero, cioè, arterie uterine ed ovariche bilaterali.
Stenosi arteriosa è stata indotta da metallo microcoils avvolto intorno le arterie d’alimentazione. Produzione di stenosi arteriosa con i microcoils ci ha permessi di controllare, ottimizzare e riprodurre la diminuzione del flusso sanguigno con pochissima variabilità e un tasso di mortalità basso, consentendo in tal modo una valutazione accurata. Quando si usavano i microcoils con un diametro interno di 0,24 mm, il flusso di sangue nella placenta e feto era leggermente diminuita (circa 30% dal livello pre-stenosi nella placenta). La prole del nostro modello MIUH dimostra chiaramente di lunga durata alterazioni nei risultati del test neurologici, neuroanatomical e comportamentali.
Introduction
Gli infanti con restrizione della crescita intrauterina (IUGR) (noto anche come ritardo di crescita intrauterino) (peso nascita < 10th percentile per l’età gestazionale), nascita pretermine (Nato a < 37 settimane di gestazione), e/o bassa nascita conto peso (< 2500 g) per quasi il 10% di tutti i neonati 2,3. Molti di questi infanti presentano problemi neurologici quali paralisi cerebrale e disturbi dello sviluppo (ad es., attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD) e disturbi dell’apprendimento) 3,4,5. Tali condizioni sono somiglianze e differenze nella loro eziologia ed i risultati. L’eziologia di IUGR è multifattoriale e insufficienza placentare associato ipoperfusione intrauterina è considerato la causa più comune in feti non anomala 7. L’eziologia del pretermine è multifattoriale pure e chorioamnionitis è la più frequente causa di 8.
L’influenza di lieve ipoperfusione intrauterina (MIUH) su sviluppo del cervello è poco chiaro. Attualmente disponibili modelli animali di ipoperfusione/ischemia intrauterina comportano principalmente hypoperfusion severo o grado di pendenza dell’ipoperfusione con o senza riperfusione 9,10,11. In ambito clinico, tuttavia, casi di MIUH sono considerati di essere molto più frequenti rispetto a quelli che coinvolgono tali condizioni gravi. I modelli attualmente disponibili di MIUH sono un modello del roditore che coinvolgono la legatura del suturare dell’uterina o dell’arteria ovarica e un modello del roditore che coinvolge le arterie ovariche bilaterali e l’aorta avendo la pervietà 12,13, di ritaglio 14,15,16,17. Uno degli svantaggi di questi modelli è la notevole variabilità inter-feto, che vanno da feti con profonda ipoperfusione a feti con aspersione quasi intatto, a seconda della posizione del feto all’interno quadriloggiato arteriosa dell’uterina e arterie ovariche. Un altro svantaggio di questi modelli è la loro incapacità di distinguere la posizione di ogni feto dopo la nascita; quindi, i ricercatori non possono distinguere la gravità dell’ipoperfusione intrauterina sperimentato da un pup individuali dopo la sua nascita.
Abbiamo sviluppato un modello del ratto di MIUH che coinvolge più di stenosi dell’arteria 1. Avvolgimento micro-bobine di metallo con un diametro interno di 0,24 mm attorno le arterie ovariche e uterine causa stenosi, ma non ostruzione dei vasi sanguigni (Figura 1). Applicando questi microcoils presso le parti prossimali di tutti delle arterie che assicurano l’utero, vale a dire, le arterie uterine ed ovariche bilaterali, il giorno embrionale 17 (equivalente a embrionali settimane 20-25 in esseri umani 18) induce una diminuzione significativa ma mite flusso di sangue alla placenta e feti. Le diminuzioni nel flusso sanguigno dopo bobine vengono applicate a tutte le quattro arterie che alimentano l’utero sono in gran parte le stesse attraverso ogni placenta ed il feto. Il tasso di mortalità del feto è meno del 20%. I cuccioli sono nati via travaglio spontaneo 1-2 giorni precedenti (embrionale giorno 21-22) rispetto al normale. Quasi tutti i cuccioli sono nati espositrici nascita significativamente bassi pesi 1. Volumi di materia grigia e bianca sono diminuiti senza danni evidente tessuto 1. I cuccioli si presentano con ritardo nella acquisizione della neonato riflessi, debolezza muscolare e alterata attività spontanea 1. Questo modello imita i segni clinici ed i sintomi dei bambini nati prematuramente o con IUGR; espositivo prematuri nati bambini ridotto grigio e volume di materia bianca con o senza materia bianca lesioni 6, presenti le pietre miliari dello sviluppo neurologico in ritardo e può presentare problemi comportamentali come ADHD 3,5; i bambini con IUGR presentano alterazioni neuroanatomiche minime e hanno un rischio aumentato di sviluppo neurologico alterato ad esempio ritardo motorio e cognitivo 4,7. Nascita pretermine e IUGR sono condizioni diverse, ma le due condizioni condividono il meccanismo di base, cioè gli insulti ai cervelli immaturi prima età gestazionale pieno-termine.
Protocol
Representative Results
Discussion
Microcoil stenosi delle arterie sia ovariche che uterine in entrambi i corni uterini produce ipoperfusione intrauterina coerente e riproducibile in tutte le placente e feti. Il livello dell’ipoperfusione può essere modificato utilizzando i microcoils con diversi diametri interni. Cuccioli del ratto, nati da una diga su cui è stata eseguita la stenosi dell’arteria con i microcoils 0,24 mm di diametro interno dimostrano IUGR e parto prematuro (Vedi riferimento 1 per i dettagli). I cuccioli presentano alterazioni neuroana…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato dal programma di scambio FY 2013 ricerca tra JSP e CNRS, JSP KAKENHI Grant numero 26860858 e la Narishige Neuroscience Research Foundation. Ringraziamo la d. ssa Mariko Harada-Shiba e Kyoko Shioya per utili discussioni. Ringraziamo Mari Furuta, Mutsumi Sakamoto, Ritsuko Maki e Dr. Emi Tanaka per l’eccellente assistenza tecnica.
Materials
| Stereomicroscope | |||
| Isoflurane anesthesia machine | |||
| Anesthesia induction box | |||
| Heating pad | |||
| Diaper 30×40 cm | |||
| Depilatory foam or shaver | |||
| Iodine disinfectant solution | |||
| Gauze 10×20 cm | |||
| Surgical drape 45×45 cm with a round opening 5 cm in diameter | |||
| Spray bottle with ethanol for disinfection | |||
| Cotton swab | |||
| Forceps with large blunt tips | |||
| Forceps with angled fine tips | |||
| Scissors | |||
| Surgical scalpel, blade size is 27mm long (no.10, Axel, AS ONE Corporation, Osaka, Japan) | |||
| Surgical suture needle | |||
| Metal microcoils; inner diameter 0.24 mm, made from gold-coated steel (SAMINI Co. Ltd., Shizuoka, Japan) | |||
| Silk suture 4-0 | |||
| Sterile saline (0.9% sodium chloride) | |||
| Heating water bath | |||
| Plastic syringes (50ml) and needles (18G) |
Referenzen
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