電気けいれん発作になったラットとシナプス後密度タンパク質のてんかん発作による変化を調べることで

電気けいれん療法は、重度の薬剤抵抗性うつ病、双極性うつ病、パーキンソン病、統合失調症^1,2を含む、大鬱病性障害患者を治療するために使用されています。この療法は、帽状電極^1,2,3経由で麻酔をかけられた患者の頭に配信電気刺激による発作が生成されます。ECS の反復的な管理は、薬剤抵抗性うつ病^1,2,3に臨床的に有益されています。しかし、ヒトの抗うつ効果の長期的効果の正確なメカニズムは、とらえどころのない推移しています。ECS は、電気けいれん療法の動物モデルで、その治療メカニズムを調査する使用は広く。齧歯類で、なったで成体神経新生を促進する ECS 急性と慢性の ECS 治療と再編成ニューラル ネットワーク^4、5、認知の柔軟性に寄与する可能性があります。さらに、ECS による脳活動のグローバルな昇格、転写の豊富さを変更脳由来神経向性因子⁶、および代謝型グルタミン酸受容体 1⁷ N メチル D アスパラギンなど複数のタンパク質など(NMDA) 型グルタミン酸受容体サブユニット⁷。これらの変更は、シナプス結合の数、構造、および海馬^7,8,9の強度の長期的な修正を媒介に関与しています。

ECS のモデルで電気刺激がてんかん注入電極、角膜電極または耳電極を介して全般強直間代けいれん発作^10,11を換起する齧歯動物に配信されます。脳定位固定装置注入電極の脳外科手術では、実験者の損傷を最小限に抑える手術技能を改善するために膨大な時間を必要とします。少ない侵襲角膜電極や麻酔を必要とする角膜上皮剥離や乾燥原因になります。耳クリップ電極の使用は、手術や麻酔なしの齧歯動物で使用できる最小限の損傷の原因となるために、これらの制限をバイパスします。確かに、耳クリップ電極を介して現在に目を覚まし配信ラットは確実にステージ 4 5 強直間代発作を誘発してなった¹⁰代でシナプス蛋白質の変化がわかった。

齧歯動物の脳の特定領域におけるシナプス蛋白質の ECS による豊かさを調べると、その検出と定量に最も適している実験方法を選択することが重要です。脳の細胞レベル下の分別は、水溶性ゾル性細胞質蛋白質の粗分離膜蛋白質;オルガネラ範囲蛋白質;そして PSD^12,13,14など、特別な細胞レベル下の構造の蛋白質。PSD は、ニューロンのシナプス蛋白質は、シナプス後膜^12,13,15に近い高濃度で整然と密な細胞内ドメインです。PSD の分離は豊かさとシナプス グルタミン酸受容体、足場蛋白質および PSD¹²のシグナル伝達タンパク質の機能のダイナミックな変化から、PSD で濃縮シナプス蛋白質の研究に有用^,15,16,17は、シナプス可塑性といくつかの神経疾患^17,18, synaptopathy に関連付けられます。PSD を浄化するために使用される従来の細胞レベル下の分別のショ糖勾配^14,差動遠心分離によって脳の粗膜画分から洗剤不溶性分画の分離に関与¹⁹. この従来の方法での大きな課題は大量の齧歯動物の脳^1914,が必要です。10-20 の齧歯動物の治療あたり PSD 画分を分離するための準備は広範なコストと時間の投資が必要です、多くの治療法がある場合、実質的に不可能です。

このような課題を克服するために、我々 は直接 PSD 画分のショ糖勾配遠心法^20,21, なしを分離し、単一のラットのなったから psd ファイルを分離するために適用できるようにそれを修正するより簡単な方法を適応しています。脳。私たち小規模 PSD 画法結果約 2 なった、免疫沈降とウェスタンブロットなどを含むいくつかの生化学的な試金で使用するために十分なから PSD タンパク質の 30-50 μ g。西部にしみが付くことシナプス後密度タンパク質 95 (PSD-95) の濃縮とシナプス マーカー シナプトフィジンおよび可溶性細胞質タンパク質 α-チューブリンの除外を明らかにして psd ファイルを分離する方法の成功例を示します。私たち ECS の誘導と小規模の PSD の分別方法は他の齧歯動物の頭脳領域に容易に適応、ECS の PSD タンパク質の発現に及ぼす影響を評価するための比較的シンプルで信頼性の高い方法を提供します。