Grânulo baseado Multiplex ensaio para análise de perfis de citocinas lágrima

As lágrimas são produzidas pela glândula lacrimal e glândulas acessórias e revestir a superfície externa do olho. Filme lacrimal é composto por uma camada lipídica externa e uma camada interna aquosa que inclui proteínas solúveis, mucins e membrana limite mucins. Lágrimas impedem invasão microbiana, fornecem nutrientes e fornecem a lubrificação da superfície ocular. Lágrimas agir como interface entre o ar e o tecido para o transporte de oxigênio para a córnea. ¹ filme lacrimal é composto por proteínas, carboidratos, lipídios e eletrólitos. A associação entre proteínas da lágrima com doenças sistêmicas e oculares como glaucoma, doença de olho seco, conjuntivite vernal, diabetes mellitus, câncer e Orbitopatia associada a tiroide foi identificada em vários estudos. ^{2 , 3 , 4} amostras de lágrima podem ser recolhidas por conta de tubos ou lágrima fluxo tiras (tiras de Schirmer). Além disso, o teste de Schirmer é um procedimento padrão realizado na córnea e clínicas de cirurgia refrativa, cujos resultados podem ser usados para ensaios de análise de citocinas. Coleta de amostra não-invasivos, acessibilidade do bio-espécime e a associação de lágrima composição com várias condições fisiológicas e patológicas certifique-se de rasgar a película uma fonte potencial de biomarcadores para diversas doenças oculares e sistêmicas. ^{4 , 5 , 6}

Lágrima de citocinas desempenha um papel importante no estudo da saúde de superfície ocular e condições inflamatórias de várias doenças oculares. ⁷ concentrações anormais de várias citocinas em lágrima amostras foram relatadas para ser associado com a doença de olho seco, ceratoconjuntivite vernal (VKC), ceratoconjuntivite atópica (AKC), conjuntivite alérgica sazonal e uveíte. ^{8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13} proteínas de lágrima podem ser analisadas por métodos tradicionais, como a espectrometria de massa, mancha ocidental e ensaios imunoenzimático (ELISA). ^{14 , 15} no entanto, as limitações destes métodos são pobre sensibilidade e um maior volume de amostra necessário para a análise de várias citocinas de lágrima em cada paciente. ^{16 , 17} ensaios multiplex do grânulo baseado foram desenvolvidos para analisar vários analitos em amostras de mistura complexa e aplicados com sucesso em amostras de lágrima para analisar várias citocinas em doenças diferentes. ^{6 , 18} A combinação de sanduíche ELISA e técnicas de citometria de fluxo permitem que estes ensaios tornar-se mais sensível que o ELISA para a quantificação de analitos múltiplos em uma única amostra. ¹⁹ . este método pode ser aplicado em uma variedade de amostras clínicas e sobrenadantes de cultura de células e ajuda no estudo das respostas imunes em várias condições fisiopatológicas. ^{20 , 21 , 22 , 23 , 24}

Existem vários estudos comparando multiplex do grânulo com base em ensaios com ELISA e relataram uma correlação entre os métodos. Grânulo de Loo et al . em comparação com base ensaio multiplex com ELISA convencional para a detecção de adiponectina, resistina, leptina e grelina em amostras de soro ou plasma humanas e relatou uma forte correlação (r > 0.9) entre os ensaios. ²⁵ . Dupont et al relataram uma forte correlação entre ensaios multiplex do grânulo baseado e ELISA para a detecção de IL-1 β, IL-4, IL-5, IL-6, em Fitohemaglutinina e lipopolissacarídeo de TNF-α, IL-10 e IFN-ϒ estimularam sangue total coletados de mulheres grávidas. ²⁶ . Pickering et al relataram outro forte correlação entre ensaio multiplex do grânulo baseado e ELISA para a detecção de anticorpos de soro de polissacarídeo de Haemophilus influenzae tipo b (r = 0,96), toxoides de Clostridium tetani (r = 0,96) e Corynebacterium diphtheriae (r = 0,91). ²⁷ . Biagini et al relataram uma alta correlação positiva (r = 0.852) entre ensaio multiplex do grânulo baseado e ELISA para a deteção do Bacillus anthracis anti-PA IgG em amostras de soro. ²⁸ . Wang et al relataram uma correlação entre ensaio multiplex do grânulo baseado e ELISA para a detecção de doença de Alzheimer biomarcadores amiloide-β 42 (r = 0,77), tau total (r = 0,94) e tau fosforilada em aminoácido 181 (r = 0,82) em amostras de líquido cefalorraquidiano. ²⁹ estes estudos demonstraram que a aplicabilidade do grânulo baseado multiplex ensaios numa variedade de amostras clínicas, menores requisitos do volume da amostra e uma correlação com ELISA padrão, que fazem ensaios multiplex do grânulo com base em um promissor alternativa aos métodos tradicionais de ELISA para a detecção de vários analitos em diferentes tipos de amostras em fenótipos diferentes doenças. Aqui descrevemos um protocolo padronizado para ensaio multiplex de grânulo com base para perfil de citocinas para 41 analitos em lágrima amostras coletadas de indivíduos saudáveis, usando tiras de Schirmer.