대뇌 허혈에 대한 산성 후행 조절의 신경 보호를 연구하기위한 실험 모델
Summary
산성 후 조절은 뇌 허혈을 예방합니다. 여기서는 APC를 실행하는 두 가지 모델을 제시합니다. 이들은 시험 관내에서 산소 – 글루코스 부족 후에 산성 버퍼 corticostriatal 슬라이스를 전달함으로써 생체 내에서 중간 대뇌 동맥 폐색 후 20 % CO 2 흡입에 의해 각각 달성된다.
Abstract
뇌졸중은 전 세계적으로 사망률과 장애의 주요 원인 중 하나이며 제한된 치료 방법을 사용합니다. 신경 보호를위한 내생 적 전략으로서, 후 조절 (postconditioning treatment)은 뇌 허혈에 대한 유망한 치료법으로 입증되었다. 그러나 복잡한 절차와 잠재적 인 안전 문제로 인해 임상 적용이 제한됩니다. 이러한 단점을 극복하기 위해 우리는 실험적인 국소 뇌 허혈에 대한 치료법으로 산성 후 조절 (acidic postconditioning, APC)을 개발했습니다. APC는 허혈 재관류 동안 CO 2를 흡입하여 온화한 산증의 치료를 의미합니다. 여기서 우리는 각각 in vitro 및 in vivo에서 APC를 수행 할 수있는 두 가지 모델을 제시합니다. 생쥐의 산소 – 포도당 결핍 (OGD) 처리 및 생쥐의 대뇌 피질 선종 및 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO)을 사용하여 뇌허혈을 모방 하였다. APC는 단지 20 % CO 2로 버블 산성 버퍼 뇌 조각을 전송함으로써 달성 될 수있다 O20 % CO 2 마우스를 흡입하여 R. APC는 조직 생존력 및 뇌경색 양에 의해 반영되는 바와 같이, 뇌허혈에 대한 유의적인 보호 효과를 나타내었다.
Introduction
뇌졸중은 전 세계적으로 사망률과 장애를 유발하는 주요 원인 중 하나입니다. 지난 수십 년 동안 뇌졸중에 대한 효과적인 치료법을 찾기 위해 많은 노력을 기울 였지만 그 성과는 아주 불만족 스럽습니다. 사후 조절 (postconditioning)는 허혈성 에피소드에 따른 독성 스트레스에 의해 조작되는 과정입니다. 허혈, 저산소증, 저 포도당 및 원격 허혈 후 조절을 포함한 사후 조건 조절은 내인성 적응 메커니즘을 유발하고 뇌허혈에 대한 유망한 치료법으로 입증되었습니다 1 , 2 , 3 , 4 . 그러나, 허혈 후 조절은 추가적인 상해를 유발할 수 있습니다. 사지의 원격 허혈성 후 조절은 동측 또는 양측 뒷다리 5 , 6 , 7 에 5 ~ 20 분간의 폐색과 재관류를 반복해야합니다. Th따라서 이러한 사후 조건 조종 조작은 임상 적으로 위험하거나 비실용적입니다. 이러한 단점을 극복하기 위해, 우리는 생쥐 8 국소 뇌허혈에 대한 치료로 APC를 개발했다. 단순히 CO 2 20 %를 흡입에 의해 유도, APC는 훨씬 더 실현 가능한 안전한 방법으로 허혈성 뇌 손상을 줄일 수 있습니다. 최근에 우리는 APC가 뇌졸중 치료 9 APC의 중요성을 강조, 재관류 창을 확장 함을 확인 하였다.
여기에 우리는 뇌 허혈에 대한 APC의 신경 보호를 연구하기위한 두 가지 실험 모델을 제시한다. 첫 번째는 생쥐 corticostriatal 조각에서 산소 – 포도당 박탈 (OGD) 모델입니다. 인공적인 환경으로 신속한 준비 및 뇌 슬라이스 전송 보통 인공 뇌척수액 (ASCF) 가능 체외 10 <뇌 기능을 연구 할 수있는 세포 생존 및 신경 회로를 유지할 수있다11 . ASCF의 OGD는 대뇌 국소 빈혈을 모방하고 허혈성 손상을 유발한다 ( 12 , 13 , 14) . OGD 후 뇌 조각은 재관류를 제공하기 위해 정규 ASCF (R-ASCF)에서 갱신 된 후 20 % CO 2로 버블 산성 ASCF APC를 사용하여 처리 하였다. corticostriatal 조각은 일차 배양 세포와 비교하여 손상되지 않은 조직학 특성을 유지합니다.
생체 내에서 뇌 기능을 연구하기 위해 마우스 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델을 사용합니다. 중간 대뇌 동맥은 총 경동맥을 통해 난연성 모노 필라멘트를 삽입하여 막습니다. 가장 널리 사용되는 뇌졸중 모델 중 하나 인 MCAO 모델은 임상 관련성을 보여 주며 monofilament의 적용으로 재관류를보다 쉽게 수행 할 수 있습니다. 전자 reperfusio의 발병 후 20 %의 CO2를 함유하는 정상 산소의 혼합 가스를 흡입하여n, APC는 뇌경색의 감소로 나타나는 뇌허혈에 유의 한 보호 효과를 나타냈다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 우리는 뇌 허혈에 대한 APC의 신경 보호를 연구하기위한 두 가지 실험 모델을 제시한다. 뇌 조각에서, APC는 MCAO 모델에서, APC는 재관류 후 마우스에 20 % CO 2 흡입에 의해 달성되는 동안 마우스, 재관류 개시 후 20 % CO 2로 버블 산성 완충액 슬라이스 corticostriatal 배양함으로써 달성된다. 두 모델 모두 대뇌 허혈에 대한 APC의 신경 보호를 반영한다. 보호는 허혈성 후 컨디셔닝에 ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 중국 자연 과학 재단 (81573406, 81373393, 81273506, 81221003, 81473186 및 81402907), 절강 성 자연 과학 재단 (LR15H310001) 및 S & T 혁신 팀 (2011R50014)의 Zhejiang Leading Team을위한 프로그램에 의해 지원되었습니다.
Materials
| Sodium chloride | Sigma | S5886 | |
| Potassium chloride | Sigma | P5405 | |
| Potassium phosphate monobasic | Sigma | P9791 | |
| Magnesium sulfate | Sigma | M2643 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma | S5761 | |
| Calcium chloride dihydrate | Sigma | C5080 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G7021 | |
| Vibratome | Leica | VT1000 S | |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium hydrochloride | Sigma | T8877 | |
| Absolute Ethanol | Aladdin Industrial Corporation | E111993 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D8418 | |
| Laser Doppler Flowmetry | Moor Instruments Ltd | Model Moor VMS-LDF2 | |
| Diethyl ether anhydrous | Sinopharm Chemical Reagent Corporation | 80059618 | |
| Trichloroacetaldehycle hydrate | Sinopharm Chemical Reagent Corporation | 30037517 | |
| 10% Formalin | Aladdin Industrial Corporation | F111936 | |
| 24-well plates | Jet Biofil | TCP-010-024 |
Referenzen
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