ويصف هذا البروتوكول استخدام مسحات مستنقع وحماه تحليل نظم الزرد، الذي يؤدي إلى الكشف عن زيادة مقارنة باستخدام الوحيد من الحراس للكشف عن مسببات الأمراض مثل هيدروفيلا Aeromonasو بكتريا spp. القط بسيودوكابيلاريا. ويقترح أيضا إنشاء نظام لرصد القط P. البيض في الحجر الصحي.
وضع نظم رصد الصحة والمستخدمة في مرافق البحوث الزرد نظراً للعوامل الممرضة من دانيو rerio مثل هيدروفيلا Aeromonasو بكتريا spp. و القط بسيودوكابيلاريا لديها القدرة على تضر بالرفق بالحيوان والبحوث. الأسماك هي عادة تحليل بعد الوفاة للكشف عن الميكروبات. استخدام الحراس وسيلة مقترحة لتحسين حساسية الترصد وخفض عدد الحيوانات عينة. ويرد وصف الإعداد من خزان الترشيح قبل الحارس خارج نظام مغلق. تم تطوير التقنية لمنع تلوث المياه وتمثل السكان الأسماك من اختيار دقيق للعمر ونوع الجنس، وسلالات. من أجل استخدام الحد الأدنى لعدد الحيوانات، ترد أيضا تقنيات فحص البيئة. يستخدم بوليميريز “سلسلة من ردود الفعل” (PCR) على سطح مستنقع مسحات لتحسن بشكل كبير في الكشف عن بعض الأنواع المتفطرات انتشارا والمسببة للأمراض مثل بكتريا فورتويتومو بكتريا هايموفيلوم بكتريا كلوني. طريقة بيئية أخرى تتكون من معالجة الحمأة في أسفل دبابة عقد أو مستنقع للبحث عن البيض القط P. . هذا هو أسلوب رخيصة وسريعة يمكن تطبيقها في الحجر الصحي حيث هو جهاز تربية مغمورة في خزان القابضة للحيوانات المستوردة. وأخيراً، PCR يتم تطبيقه على العينة الحمأة وهو الكشف عن هيدروفيلا (أ) في القاع والسطح في مستنقع. عموما، هذه التقنيات الفرز البيئي المطبقة على هذه العوامل الممرضة محددة أدت إلى زيادة حساسية مقارنة باختبار الترشيح قبل الحراس.
من أجل حماية البحوث والرفق بالحيوان1،2، يرصد وجود مسببات الأمراض داخل مرافق الحيوانات. وفي حالة الزرد، الصحة رصد3،4،5،،من67،،من89،10،11 غالباً ما تعتمد على الحيوانات التي تم تحليلها بعد الوفاة بالتشريح المرضى، وثقافة علم الجراثيم، أو الأساليب الجزيئية. اختبار فقط مستعمرة الحيوانات ليس الأسلوب المستحسن نظراً للعدد من الأسماك والمصروفات ذات الصلة التي ستكون مطلوبة للكشف عن مسببات أمراض انتشار المنخفض. ولذلك، الأسلوب المفضل للكشف عن مجموعة صغيرة من الحيوانات لحمولة أكبر من الملوثات. وتسمى هذه الأسماك الحراس قبل الترشيح. ويستمر هذا التعرض لأشهر وأنه ينطوي على زيادة في عبء العمل لمقدمي الرعاية الحيوانية و/أو بعض الحلول الهندسية بنيت لهذا الغرض. تحد آخر وهو فحص خطوط المستوردة في الحجر الصحي فيها الحيوانات الخصبة بأن تبقى على قيد الحياة، وهذا غير متوافق مع فحوصات روتينية على جثث.
يصف لنا هنا بعض الطرق للكشف عن بعض العوامل الممرضة الزرد (ألف-هيدروفيلا، متفطره spp.، و عين القط) بفحص البيئة المائية للنظام. ويهدف إلى الحد من عدد الأسماك المستخدمة لرصد الصحة وتحسين دوران، والتكلفة، وحساسية للكشف عن. هذه الأساليب بديل لاستخدام الحيوانات، ويمكن تطبيق بعض التقنيات لفحص الواردات في الحجر الصحي. على سبيل المثال، موتشو9 كان قادراً على تحديد أكثر الأنواع المتفطرات المسببة للمرض عن طريق إجراء PCR على مسحات مستنقع بدلاً من الزرد (بما في ذلك الحراس)، وتم الحصول على هذه مع عينات أقل. في ذلك نفس الدراسة، تم الكشف عن البيض القط P. مع أكثر حساسية بفحص خزان الحمأة استخدام التعويم والفحص المجهري بدلاً من اختبار الأسماك بكر والأنسجة.
ويلخص الجدول 1 السمات المختلفة للحارس البرامج3،4،5،،من67،،من89،10 المستخدمة من قبل عدد من مرافق الزرد. تلقي الحراس بعد ترشيح المياه بنفس الطريقة كأي سمكة مستعمرة بينما الحراس الترشيح قبل تلقي المياه مرة واحدة قد تعمم عن طريق أحواض الأسماك مستعمرة أولاً. على سبيل المثال، يمكن تعيين الحراس قبل الترشيح في نظام مغلق باستمرار تلقي مستنقع الماء. وهذا قد لا تكون خياراً عند هناك العديد من الأنظمة المستقلة في غرفة واحدة. وفي هذه الحالة، يمكن استخدام خزان واحد من الحراس قبل الترشيح شاشة الغرفة بأكملها. الحراس في خزان ثابت، والخروج من نظام مغلق، وتغير الماء بانتظام، باستخدام فقط قبل تنقية المياه أيمياه مستنقع من جميع النظم في الغرفة. هذا الأسلوب الموصوفة أدناه كأساس للمقارنة مع كفاءة الفرز البيئي. تم تصميم الهيكل المقترح للتحكم في المسائل المتعلقة بنوعية المياه مثل انخفاض درجة الحموضة أو تلوث نيتروجين.
مفهوم الفرز البيئي الجرثومي يعتمد على فرضية أن البكتيريا قابلة للاكتشاف في بيوفيلم مثل التي وجدت على الحائط مستنقع على سطح الماء أو الحمأة في الجزء السفلي من دبابة. مستنقع يبدو نقطة أخذ عينات مثالية في نظام مغلق لتربية الأحياء المائية نظراً لأنها تقوم بجمع النفايات (الماء والبراز والأعلاف وغيرها من المواد العضوية) من جميع الدبابات قبل الترشيح. سطح مستنقع في كثير من الأحيان يمكن الوصول إليها بسهولة وينظف بسرعة، ويمكن أداؤها أسيبتيكالي لتجنب التلوث عبر العينة (من القفازات على سبيل المثال). ويستخدم المفهوم تحديد spp. بكتريا المسببة للأمراض السائدة في الزرد نظم9،12. ويرد أدناه وصف التقنية ونحن أيضا الإبلاغ عن الكشف عن هيدروفيلا (أ) في مستنقع الزرد مسحات السطحية والحماة.
الفرز البيئي لبيض الطفيلي يستند إلى الكشف عن موراي et al. 13 وتقنية التعويم يستخدم بشكل روتيني لعلم الطفيليات والفحص المجهري لبيض الطفيلي في البراز14. موتشو9 اقترح بديل لعملية أخذ العينات، وأظهرت أن هذه التقنية يمكن أن تستخدم للكشف عن أنواع أخرى من الأسماك [بيوتوب]. المصابة ريريو دال- تمرير القط P. البيض مع فضلاتها وتظل بيض الطفيلي في الجزء السفلي من الخزان، في الرواسب. ويمكن جمعها هناك سبب كثافتها أكبر من الماء. كثافة البيض يستخدم لمعالجة العينات البيئية أيضا. تعويم أولى مع الطرد المركزي يفصل الماء والحطام الخفيفة من أثقل من هذه المسألة. الطرد المركزي ثاني يعتمد على حل السكر المشبعة (بكثافة أكبر من كثافة البيض القط ب. ) للسماح لبيض الطفيلي في الظهور على سطح الأنبوب.
ويمكن الجمع بين فحص للبكتيريا في بيوفيلم و القط P. من الجزء السفلي من الخزان عن طريق إجراء PCR لجميع هذه الجراثيم في الرواسب عينة الحمأة التي تم الحصول عليها بعد الطرد المركزي الأول. وهذا يحسن وقت أخذ العينات. يرد أدناه وصف الأسلوب. ونقترح أيضا لاستخدام هذه التقنيات في سياق الحجر صحي. إلى شاشة الزرد الكبار المستوردة التي تحتاج أن تبقى على قيد الحياة، وإدراج جهاز تكاثر إلى خزان الحجر الصحي. بعد أسبوع واحد، هي جمع البراز وغيرها من مواد النفايات في جهاز التكاثر وفرزهم بالفحص المجهري أو PCR. ويرد أدناه وصف التقنية وتم الكشف عن بعض البيض القط ب. بالفحص المجهري في هذا السياق.
القيود المفروضة على التقنيات، خطوات حاسمة، واستكشاف الأخطاء وإصلاحها:
عدم توحيد السن والجنس، والسلالة، وطول مدة التعرض للحراس. وهذا يظهر في الجدول 1. وهناك القليل جداً فحص الأسماك دون 6 أشهر من العمر، أو الأسماك الذين تتراوح أعمارهم بين. قد يكون هناك بعض مسببات الأمراض التي تؤثر على صغار الأسماك كما أن هناك بعض العوامل الممرضة التي أكثر انتشارا في كبار السن السكان10،18،،من1920. وبالمثل، لا يعتبر الفوارق بين الجنسين في اختيار بعض المجموعات الحارس على الرغم من بعض تقرير أن هناك تحيز جنساني لبعض مسببات الأمراض21. يحاول هذا الأسلوب المقترح لمعالجة هذه القضايا، على الرغم من أن من الممكن اختيار السلالة وفقا ممرض محددة لرصد. على سبيل المثال، يمكن أن تساعد تو مع الكشف عن بكتريا spp.12،22، ولكن هناك خطر أن الحراس ثم تعمل كعلامات سريرية الخزان أو عرض. نهج مركز الموارد الدولي الزرد10 فيما يتعلق بطول مدة التعرض، يزيد من فرص للكشف عن مسببات الأمراض التي يمكن أن تضيع بفترة غير كافية من تلوث. ويعني الحاجة إلى التعرض لفترة طويلة أن الحراس ليست متاحة بسهولة. إضافة العينات البيئية يتيح بعض المرونة وتعدد أحداث الفرز. على سبيل المثال، أخذ العينات يمكن أن تتم كل شهرين مع فاصل 4 أشهر بين كل أسلوب الفرز. وهذا قد يقلل من انقضاء فترة من الوقت قبل أن يتم الكشف عن مسببات الأمراض المستحدثة.
الاعتماد على تقنيات الفرز البيئي في الكشف عن مسببات الأمراض في البيئة. مسببات الأمراض يلقي بالسمك والمخفف لذلك في نظام المياه. وكان لم تستكشف إمكانية التقاط مسببات الأمراض ب تنقية المياه23 . الأساليب التي يمكننا وصف فعالة فقط إذا توفرت العوامل الممرضة ما يكفي من الوقت للتكاثر في الأسماك وبيوفيلم للوصول إلى الحد الأدنى للسماح بالكشف عن التلوث. يتم تصغير هذا القيد من التقنيات بمجموعة حاسمة من مواقع أخذ العينات: يتم أخذ عينات الحمأة في الخزان بدلاً من الحمأة مستنقع، وأخذ عينات المياه وبيوفيلم في السطح في مستنقع وليس في دبابة أو الترشيح بعد. ومع ذلك، جميع العينات المأخوذة من نفس النظام من المحتمل أن تعطي النتائج نفسها. يمكن تأكيد النتائج الإيجابية عين القط باستخدام مقايسة أخرى (التشريح المرضى أو بكر أو تحليل الرواسب). يمكن تأكيد نتائج إيجابية PCR المتفطرات بالثقافة أو بواسطة آخر التشخيص المختبري. بيد عند تأسيس مركز صحة، كذلك هي أوصت العينات للتأكد من النتائج السلبية من أي أسلوب الفرز البيئي.
أهمية هذه التقنية فيما يتعلق بالأساليب القائمة البديلة:
متفطره spp. شائعة في البيئة ووجودهم في مستنقع لا يتنبأ على الإمراضية12. موتشو9 أظهرت أن رصد معدلات الوفيات هو المفتاح لدراسة تطورات القضايا الصحية. ولا يزال استخدام العينات الحيوانية ضرورية لأي تحقيق الطب البيطري. رصد الصحة يعني الكشف عن جميع مسببات الأمراض انتشارا في منشأة وهذا لا يمكن تحقيقه باستخدام تقنيات الفرز البيئي الوحيد. ومع ذلك، عدم وجود حساسية أدوات التشخيص يمكن تأخير أو منع وصف دقيق للحالة الصحية. بينما استخدام الحراس يقلل من عدد الأسماك المطلوبة للكشف عن ميكروب انتشارا بين السكان، يضيف عدم حساسية الوزن باستخدام مجموعة من الأساليب، بما في ذلك الفحص البيئي5،23. الواقع حالة “محددة الممرض الحرة” تعرف عادة كعدم وجود الأنواع في المرفق مثل أنه يجب اختبار العينات البيئية والحيوانية السلبية24،25.
وتبين النتائج مسحه مستنقع التعرف على متفطره spp. التي تعتمد على الأسماك العينات قد يؤدي إلى حالة صحية سلبية كاذبة. الأنواع المتفطرات اختبار 6 الموضحة المسببة للأمراض أو المحتملة المسببة للأمراض في الزرد15 والبعض لن يتم القضاء بتطهير سطح البيض مع الكلور26 أداؤها شكل روتيني في الحجر الصحي. ولذلك، قد يكون سلبية زائفة بعض العواقب للمتعاونين الذين استيراد خطوط. على سبيل المثال، M. fortuitum ضاعت ببكر في عينات الأسماك لكن أكثر من نصف مسحه مستنقع PCR الكشف عن ذلك. وبالنظر إلى أن هذه البكتيريا أكثر مقاومة للكلور من الآخرين وقدرتهم على النمو في نظم المياه27، بل خطر لمرفق المستوردة غير الملوثة. للسماح باستيراد خطوط، المديرين بحاجة إلى ثقة ومقارنة التقارير الصحية مرفق المصدرة مع لهم. “برنامج تقييم الأداء إيكلس”28 هو المفتاح لهذه العملية في القوارض. شبكة رسمى تقارير الكشف عن جوردون م. و . م. موكوجينيكوم في الفرنسية ريريو دال-11. لا تقترح هذه البكتيريا في لوحات المختبرات التجارية التي نستخدمها. فإنه سيكون من المفيد لتمديد البرنامج إيكلس ومواءمة فحوصات التشخيص، فضلا عن قائمة الأنواع المسببة للأمراض29.
هيدروفيلا (أ) هو أيضا مسببات الأمراض التي يحتمل أن تكون أدخلت عند استيراد الحيوانات، على الرغم من قابليته للكلور30 يجعل القضاء على الأرجح أثناء تطهير سطح البيض الروتينية. مستنقع ومسحه وحماه النتائج تظهر أنه يمكن استخدام الفرز البيئي للكشف عن مسببات هذا المرض. تم اكتشاف بكتيريا أخرى مثل بكتريا spp. في الحمأة ببكر23. هذا النوع من العينة أهمية خاصة نظراً لأنها تتيح الكشف عن العوامل الممرضة تسلط. على سبيل المثال، تطبيق جديد آخر هو تحليل الحمأة لفحص الأسماك المستوردة في الحجر الصحي عين القط. الطفيلي تهديد للحيوان الصحية13 ونيوبلسا نماذج16. وعلاوة على ذلك، لا تكون تركيزات الكلور المستخدمة في تطهير سطح البيض الزرد الروتينية كفاءة31. ولذلك، يبدو أن القدرة على فحص الحيوانات المستوردة مع دوران مدته أسبوع واحد، ودون أي القتل الرحيم الأسماك جذابة جداً. هذا الأسلوب يمكن أن تؤثر قواعد الحجر الصحي والأمن البيولوجي بالسماح لفرز واردات. ثم تم تصميم عملية صنع القرار وفقا لمسببات الأمراض السائدة في المنشأة المصدرة، والكشف عن مسببات الأمراض في العينات من الأسماك المستوردة، وخطر المساس بالوضع الصحي ل مرفق المستوردة10.
التطبيقات المستقبلية أو اتجاهات بعد إتقان هذه التقنيات:
حتى إذا كان العلاج الفحص الروتيني هو الخيار الذي تم اختياره، يمكن تقييم فعالية هذا الدواء32،،من3334،35،36 مع تحليل الحمأة جهاز التكاثر. أعم من ذلك، يمكن استخدام الفرز البيئي لاختبار المركبات ضد البكتيريا والطفيليات القضاء، بما في ذلك في الأسماك [بيوتوب]. تطبيق آخر مكانة للفحص البيئي لرصد السكان الممرض في العيش آر37،38. على الرغم من أن تطبيق هذه التقنيات الرئيسية كإضافة قيمة إلى مربع أدوات التشخيص لصحة الرصد في مرافق الزرد. وبفضل الوقت والتكلفة أكثر دقة، تعريف كفاءة الحالة الصحية ومسحات مستنقع وتحليل الحمأة مكملة للمراقبة الانذارية وممارسة روتينية في الحجر الصحي. في الواقع، مستقبل هذه التقنيات لتكون جزءا روتينيا من أي تقرير الصحة المختبرات المائية.
The authors have nothing to disclose.
المؤلف يود أن يشكر فريق BRF [اقوتيكس] معهد فرانسيس كريك لمساعدتها التقنية ومدخلات حاسمة. وأيد هذا العمل المعهد فرانسيس كريك الذي يتلقى تمويله الأساسي من المملكة المتحدة “لأبحاث السرطان” (FC001999)، ومجلس البحوث الطبية في المملكة المتحدة (FC001999)، ومؤسسة ويلكوم ترست (FC001999).
Aqua-Sed 250 mL | Vetark | 2-phenoxyethanol | |
Tubed Sterile Dryswab Tip | mwe | MW100 | Sump surface |
BD Plastipak Disposable Syringe 50mL Eccentric | Becton Dickinson |
300866 | They are actually graduated to 60 ml |
Centrifuge tube 15 mL Corning | Corning | 430766 | |
Centaur 2 benchtop centrifuge with 4 x 200 mL Swing–Out Rotor (unsealed) | Sanyo | MSB020.CX1.5 | |
Cover Glass 22 mm x22 mm | Menzel-Glaser | MNJ-350-020H | |
Plain Swab Sterile Plastic Applicator Rayon Tipped White Cap | Sterilin Ltd Thermo Fisher Scientific | F155CA | Swab sediment from sludge |
50 mL Self-Standing Centrifuge Tube CentriStar Cap | Corning | 430921 | |
In-Tank Spawning Tray Set | MBK Installations Ltd |