Isolering och anrikning av leverstamfader delmängder identifierade av en roman Surface Marker Kombination

Leverregenerering är oftast förknippad med självförnyelse kapacitet av hepatocyter. Icke desto mindre, kroniska leverskador inträffar med progenitor-cellaktivering och expansion, vilket har satts i samband med deras förmåga att differentiera till hepatocyter och cholangiocytes ^{1, 2, 3, 4.} Detta är särskilt relevant, eftersom under kroniska skador, är inte effektiv hepatocytproliferation. Trots flera genetiska spårning studier inriktade på progenitorceller, är fortfarande kontroversiell ^{5, 6, 7, 8} deras roll i leverregenerering. Dessutom har aktiveringen av progenitorceller kopplats till ökad fibrotisk reaktion i levern, vilket väcker frågor om deras exakta roll under skador ⁹, ^10.

Den heterogena karaktären av stamcellstransplantation facket har länge föreslagits av genuttryck studier som isolerade stamceller som uttrycker en enda yta markör med hjälp av microdissection eller cellsortering-baserade metoder ^{1, 11.} I själva verket nyligen en ny yta markör kombination med användning av gp38 (podoplanin) entydigt länkade tidigare enstaka markörer för stamceller till olika delmängder ^12. Viktigt är dessa delmängder inte bara skilde i sin yta markör uttryck, men också uppvisade funktionella förändringar under skador ^12.

Flera djurmodeller har använts för att undersöka progenitor-cellaktivering och leverregenerering. Det verkar som om de olika typerna skade främjar aktiveringen av olika delmängder av progenitorceller ^12. Detta kan förklara den phenotypic divergens av duktulära reaktion observerats hos människa ^4. Således, de komplexa fenotypiska och funktionella analyser av stamceller är avgörande för att förstå deras roll i skador och den sanna betydelsen av duktulära reaktion i leversjukdomar.

Förutom ytmarkör kombinationer, de avgörande skillnaderna i cellisoleringsprotokoll ytterligare komplicera de slutsatser baserade på tidigare studier ^2. En betydande del av studier adresserade roll progenitorceller som kraftigt skiljer sig åt i sin isolering protokoll (t.ex. lever dissociation (enzym kombination och varaktighet av processen), densitet medium och centrifugeringsvarvtal) ^2. En optimerad isoleringsteknik, vilket ger bättre lönsamhet för sällsynta cellpopulationer och reflekterande av delmängd sammansättning, har utvecklats och publicerats nyligen ^12. Syftet med denna artikel är att ge en mer Detailed protokollet av detta levercellisoleringsförfarande och delmängdsanalys för att möjliggöra för en korrekt reproduktion av den teknik. Dessutom innehåller protokollet en jämförelse med föregående isolering metod för att påvisa skillnader jämfört med det nya protokollet.