Isolering og Berigelse af Lever progenitordelmængder identificeret ved en Novel Surface Marker Kombination

Lever regenerering er for det meste forbundet med selv-fornyelse kapacitet på hepatocytter. Alligevel kroniske leverskader forekomme med progenitorcelle aktivering og ekspansion, hvilket har været forbundet med deres evne til at differentiere til hepatocytter og cholangiocytes ^{1, 2, 3, 4.} Dette er især relevant, fordi under kroniske skader, hepatocytproliferation ikke er effektiv. Trods flere genetiske tracing studier rettet stamceller, deres rolle i leveren regenerering stadig kontroversielt ^{5, 6, 7, 8.} Desuden har aktiveringen af progenitorceller blevet forbundet med øget fibrotisk reaktion i leveren, som rejser spørgsmål om deres nøjagtige rolle under personskader ⁹, ^10.

Den heterogene karakter af stamcelle rummet har længe været foreslået af genekspressionsstudier der isolerede stamceller udtrykker en enkelt overflade markør ved hjælp mikrodissektion eller celle sortering-baserede metoder ^{1, 11.} Faktisk nylig, en ny overflade markør kombination hjælp gp38 (podoplanin) utvetydigt forbundet tidligere enkelt markører for stamceller til forskellige delmængder ^12. Vigtigere er det, disse undergrupper ikke kun afveg i deres overflademarkør ekspression men udviste også funktionelle ændringer under skader ^12.

Flere dyremodeller har været anvendt til at undersøge progenitorcelle aktivering og leverregenerering. Det forekommer, at de forskellige skade typer fremmer aktiveringen af forskellige undergrupper af progenitorceller ^12. Dette kunne forklare den phenotypic afvigelser i kanalsystem reaktion er observeret hos mennesker ^4. Således er de komplekse fænotypiske og funktionelle analyser af progenitorceller er afgørende at forstå deres rolle i skader og den sande betydning af kanalsystem reaktion i leversygdomme.

Udover overflade markør kombinationer, de afgørende forskelle i celle isolation protokoller yderligere komplicere konklusioner baseret på tidligere undersøgelser ^2. En betydelig mængde af undersøgelser rettet rollen af stamceller, der i høj grad adskiller sig i deres isolation protokol (f.eks, lever dissociation (enzym kombination og varighed af processen), tæthed medium og centrifugering hastighed) ^2. En optimeret isolation teknik, der giver bedre levedygtighed for sjældne cellepopulationer og reflekterende af delmængde sammensætning, er blevet udviklet og offentliggjort for nylig ^12. Formålet med denne artikel er at give et mere itailed protokol af denne liver celleisolering procedure og undersættet analyse for at muliggøre korrekt gengivelse af teknikken. Derudover protokollen indeholder en sammenligning med den tidligere isolation metode til at påvise de forskelle, sammenlignet med den nye protokol.