Murine Lymphocyte Kennzeichnung von⁶⁴ Cu-Antikörper-Rezeptor-Targeting für<em> In Vivo</em> Zellhandel von PET / CT

Nicht-invasive Zellverfolgung ist ein vielseitiges Werkzeug , Zellfunktion, Migration und Homing in vivo zu überwachen. Recent Zellverfolgung Studien haben sich auf mesenchymale ^{1, 2} oder Knochenmark stammende Stammzellen ³ im Rahmen der regenerativen Medizin, autologem peripherer weißer Blutzellen in einer Entzündung oder T – Lymphozyten in adoptiven Zelltherapien gegen Krebs ^{3, 4} konzentriert. Die Aufklärung der Wirkorte und die zugrunde liegenden biologischen Prinzipien der zellbasierten Therapien ist von großer Bedeutung. CD8 ⁺ zytotoxische T – Lymphozyten, genetisch chimäres Antigen – Rezeptor (CAR) oder T – Zellen tumorinfiltrierende Lymphocyten engineered (TILs) wurden in großem Umfang als der Goldstandard. Allerdings Tumor-assoziiertes Antigen-spezifische TH1 – Zellen haben sich als eine wirksame alternative Behandlungsoption ^4, sein ^</ sup> ^{5, 6, 7.}

Als wichtige Akteure bei der Entzündung, organspezifischen Autoimmunerkrankungen (zB rheumatoide Arthritis oder Asthma bronchiales), und Zellen von großen Interesse in der Krebsimmuntherapie, ist es wichtig , die zeitliche Verteilung und Referenzierung Muster von TH1 – Zellen zu charakterisieren. Nicht – invasive in – vivo – Bildgebung durch PET stellt eine quantitative, hochempfindliche Methode ⁸ Zellmigrationsmuster, in vivo Referenzierung und die Seiten der T – Zell – Antworten und die Aktion während der Entzündung, Allergien, Infektionen oder Tumorabstoßungs ^{9, 10, 11} zu untersuchen.

Klinisch ¹¹¹ In-Oxin ist für Leukozyten – Szintigraphie für die Unterscheidung von Entzündung und Infektion ^12, während 2-deoxy-2- ⁽¹⁸ verwendet ,F) fluoro-D-glucose ⁽¹⁸ F-FDG) wird für die Zell Tracking – Studien von PET ^{3, 13} verwendet. Ein wesentlicher Nachteil dieses PET – Tracer, jedoch ist die kurze Halbwertszeit des Radionuklide ¹⁸ F bei 109,7 min und der niedrigen intrazelluläre Stabilität , die Bildübertragung zu späteren Zeitpunkt nach der Adoptivzelle behindert. Für längerfristige in – vivo – Studien Zellverfolgung von PET, obwohl instabil in den Zellen, ⁶⁴ Cu-PTSM häufig unspezifisch eingesetzt zu etikettieren Zellen ^{14, 15} mit minimierten nachteiligen Wirkungen auf T – Zell – Lebensfähigkeit und Funktion ^16.

Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur weiteren nachteiligen Auswirkungen auf die Lebensfähigkeit der Zellen zu reduzieren und die Funktion eines T-Zell-Rezeptor (TCR) -spezifischen radiomarkierten mAb verwendet. Zunächst wird die Herstellung der Radioisotop ⁶⁴ Cu, die Konjugation des mAb KJ1-26 mit the Chelator DOTA und die nachfolgenden ⁶⁴ Cu-Radiomarkierungs gezeigt. In einem zweiten Schritt wird die Isolierung und Expansion von COVA TH1-Zellen von DO11.10 Spendermäusen und die radioaktive Markierung mit ⁶⁴ Cu belasteten DOTA-konjugierten mAb KJ1-26 ⁽⁶⁴ Cu-DOTA-KJ1-26) werden im Detail beschrieben. Die Beurteilung der Aufnahmewerte und Ausströmen von Radioaktivität mit einem Dosiskalibrator und y-Zählung jeweils sowie die Bewertung der Wirkungen von ⁶⁴ Cu-Radiomarkierungs auf die Lebensfähigkeit der Zellen durch Trypanblau-Ausschluss und Funktionalität mit IFN- & gamma; ELISA vorgestellt . Für nicht-invasive in vivo – Zellverfolgung, das Hervorrufen von einem Maus – Modell von COVA-induzierter akuten Atemweg DTHR und Bildaufnahme von PET / CT nach dem adoptiven Zelltransfer beschrieben.

Darüber hinaus kann diese Kennzeichnung Ansatz zu verschiedenen Krankheitsmodellen, Maus-T-Zellen mit unterschiedlichen TCRs oder allgemeinen Zellen von Interesse mit membrangebundenen Rezeptoren oder Ausdruck mar übertragen werdenkers kontinuierlichen Membran Basiswert ¹⁷ pendelt.