클로스 트리 디움 디피는 원내 항생제 관련 설사 감염 ^1의 주요 원인 중 하나입니다. 이 그람 양성 혐기성 세균은 분변 – 경구 경로를 통해 그 포자 양식을 통해 전송된다. 지난 10 년, 새로운 '전염병' '또는' 'hypervirulent' '균주 (/ 027 예를 들어, BI / NAP1)는 북미와 ^유럽이 새로운 감염과 사망률의 급격한 증가가 발생했습니다. C. 디피 -associated 질환 (CDAD)는 높은 사망률 ³ 생명을 위협하는 대장 염증이다. 증상은 설사 ^4에서 위 막성 대장염 ^(5)와 종종 치명적 독성 거대 결장 ^(6)에 이르기까지 다양합니다.

유독 균주 다제 내성 및 재발 ⁷ 높다으로 CDAD 치료가 어렵다. 현재 치료법은 항생제 메트로니다졸, fidaxomicin 또는 반코마이신 또는 repetiti에 포함에서vely 재발하는 경우 분변 미생물 이식. 새로운 치료 전략이 시급히 ⁸ 필요하다. 일부 진보가 C. 디피 독소 B ^{(9)을 대상으로,} 치료 단클론 항체 Bezlotoxumab로 기록, 최근 성공적으로 임상 3 상을 통과하고 FDA 및 EMA에 승인을 신청했다. 또한, 새로운 항생제 임상 시험 ^(10)의 다른 단계에서 순간에서 시험되고있다.

새로운 치료 표적을 식별해야 효과적인 치료를 개발합니다. (; CD2830 / Zmp1, PPEP-1 EC 3.4.24.89)가 최근 C. 디피 단백질 분해 효소 프롤린 – 프롤린 엔도 펩 티다 제-1 발견 노크 아웃 변형에 PPEP-1의 부족 등 유망한 대상이되고, C의 독성을 감소 . 생체 내 ¹¹ 디피. PPEP-1은 C 말단에 두 C. 디피의 adhesins를 절단 분비 메탈로 ^{12, 13 (13),} 따라서 부착 bacter를 해제인간의 장내 상피 세포에서 아이오와. 따라서, C. 디피의 정착과 운동성 표현형 사이의 균형을 유지에 관여한다. PPEP-1에 대해 선택적 저해제를 개발하고 그 기판의 입체 구조의 자세한 지식이 필요 불가결 인식하는 방식을 이해하는 것이. 우리는 기질 펩티드 ¹⁴ PPEP-1 단독 컴플렉스의 제 결정 구조를 해결했다. PPEP-1은 제 1 공지 프로테아제 두 개의 프롤린 잔기 ⁽¹⁵⁾ 사이를 선택적으로 절단하여 펩티드 결합. 이것은 이중 꼬임 방식으로 기판에 결합하고, 프로테아제 활성 부위 ^(14)를 덮는 S 루프에있는 잔기 연장 된 지방족 – 방향족 네트워크를 통해 안정화. 이 기판 결합 모드는 PPEP-1에 고유하며 현재까지 인간의 단백질 분해 효소에서 찾을 수 없습니다. 이것은 유망한 약물 표적하게, 매우 가능성 억제제의 오프 대상 효과.

화면 선택 PPEP-1 INH 개발하려면ibitors은 향후 순수한 단 분산 PPEP-1 단백질의 다량이 필요하다. 또한, 결정되어야 할 것이다 PPEP-1 제 억제제, 공동 결정 구조의 결합 모드를 결정한다. 우리의 손에 PPEP-1은 지속적으로 (intergrown)의 결정을 생성합니다. 따라서 우리는 PPEP-1의 단일 회절 품질의 결정을 생성하는 최적화 과정을 개발 하였다. 이 프로토콜에서 우리는 구체적으로 PPEP-1 ^(14)의 생산, 정제, 결정화 및 구조 솔루션을 설명합니다. 우리는 분비 신호 서열, 정제 태그의 제거와 친 화성 크로마토 그래피 및 크기 배제 크로마토 그래피 부족한 PPEP-1 변이체의 대장균 세포 내 발현을 사용하여, 아연의 단일 파장 이상 분산을 통해 최적화 화면 구조 결정에 ¹⁶ microseeding 이어 (아연 SAD) ^17. 이 프로토콜은 (다른 단백질의 제조 및 구조 결정에 적용 할 수있다 예를 들어, </ EM> 메탈로) 및 (intergrown)의 결정을 생산하는 단백질 관한 것이다. 요청시 구조물의 플라스미드 DNA는 (는 pET28a-는 NHIS-rPPEP-1)의 회절 데이터는 교육 목적으로 제공 될 수있다.