대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여
Summary
우리는 orthotopic 대동맥 이식 모델 마우스에 슬리브 기술을 사용 하 여 현재. 혈관 질환의 연구에 사용할 수 있는 매우 빠른 문 합 방법 이다.
Abstract
Orthotopic 대동맥 이식 슬리브 기술을 사용 하 여 단지 10-20%의 고장율과 대동맥에 부상을 줄일 수 있습니다. 시간 anastomose 슬리브 메서드를 사용 하 여 마우스에 대동맥을 짧고 쉽게 iso/여 보세요 이식의 연구를 허용 하는 20 분을 평균 했다. 다음 문서는 우리의 실험실에서 사용 하는 대동맥 이식 절차를 설명 합니다. 생쥐는 1.5% 볼륨 isoflurane와 얼굴 마스크를 통해 100% 산소의 혼합물으로 취 했다. 이 시점에서, 신장 동맥 및 그것의 분기 사이 대동맥의 세그먼트는 베 나 정 맥, 자유롭게 준비 및 clampedat에서 분리 된 단일 실크 봉합과 인접 하 고 원심 세그먼트. 대동맥의 제거, 이전 염 헤 파 린을 포함 하는 열 등 한 베 나 정 맥에 주입 됩니다. 대동맥은 클램프 사이 렸 그리고 염 분 덤플링을 솔루션 루멘 이용 되었다. Monofilament 봉합 소매 기술 orthotopic 위치에서 복 부 대동맥을 이식 하기 위해 사용 되었다.
Introduction
이전 연구에서 지적, 큰 관심 murine 대동맥 이식 모델 자체 이식으로 인 한 특정 혈관 응답 및 arteriogenic 환경 연결 특정 조직 요인 사이 차별을 허용 하는 지급 되었습니다. 1 , 2 , 3. 여기에 중요 한 역할을 담당 하는 주요 요인은 녹아웃, 유전자 변형 마우스의 가용성 이다. 식별 하 고 퇴행 성 혈관 질환, 동맥 경화, 동맥 류 형성4, 등의 개발과 관련 된 새로운 pathophysiological 경로 결정의 가능성을 제공 하는 이러한 모델 들의 참여 5.
그것은 내장 국 소 빈 혈 또는 reperfusion를 접목 하는 동안 부상을 위한 이식 혈관에 나타날 수 있습니다 지적 가치가 있다. 따라서, 특정 문제 이식 무결성 또는 수술 기간 동안 예기치 않은 염증 반응의 발생 제외할 수 없습니다 가능성이 제외 퇴행 성 혈관 질환3 에에서 병 태 생리 변화 ,45,,67. 소매 문 합 미만 1 밀리미터의 직경을 가진 혈관의 동맥 문 합에 대 한 대체 끝에 방법 이며 대동맥에 연속적으로 적응 시켰다는 쥐에 있는 신장과 심장 이식에 성공적으로 적용 된는 Dambrin 그 외 여러분 에 의해 쥐에 이식 8 , 9 , 10 , 11.
대동맥 손상 슬리브 이식 기법을 사용 하는 매우 낮은 기술 고장율, 평균 20 분 지속 그것 때문으로 최소화 됩니다. 우리의 이전 결과 소매 기술1을 사용 하 여 이식 후 isograft에는 vivo에서 의 우수한 기능 및 구조적 특성을 증명 하고있다. Dambrin 그 외 여러분 설명 후 짧은 학습 곡선 성공률은 78% 이상10. 혈전 증 등의 합병증은 드물다, 예 Engelbrecht 외. 쥐8신장 이식에서 소매 기술을 사용 하 여 혈전 증을 관찰 하지 않았다.
소매 anastomoses와 murine 대동맥 이식 모델 이식 선박에서 iso/이식 반응 연구를 신속 하 고 쉬운 도구입니다. 이 비디오에서는 우리의 실험실에서 실시 하는 대동맥 이식 절차를 보여 줍니다. 이 이식 모델 혈관 퇴행 성 질환의 기본 병 적인 메커니즘을 정의 하는 데 유용할 수 있습니다 그리고 분자 약리학 내정간섭12의 추가 평가에 기여할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 연구에 앞서 다양 한 다른 이식 모델 마우스에 철저 하 게 분석된3,6,7,10,,1314했다. 그것은 우리의 조건과 일치 하 고 기존의 엔드-투-엔드 봉합 방법에 비해 슬리브 문 합의 높은 신뢰성 대동맥 이식 하 여 소매 기술 수정 Dambrin 그 외 여러분 의 모델 선정 되었습니다. 1 , 10.
이 기술은 여러 가지에서 유리한 크로스-클램프 시간이 상당히 감소 수술 동안 대동맥에 손상을 최소화 이다. 혈전 증의 발생률이 낮은 그릇 구경 기증자와 받는 사람 사이에서 잠재적인 불일치를 피하고 외에 관찰 되었다. 위의 관찰 확인이 기술은 쥐에서 대동맥 이식 혈관 질병 조사에 매우 적합 합니다.
후속 연구에서 초음파 이식 후 8 주를 수행 했다, 중요 한 변경 감지 했다. 이 확인 대동맥 수술 동안에 손상을 최소한의1될 것 이라고 가정을 했다.
이 문서에서 제공 하는 이식 절차 모두 이식 무결성 및 그것의 기능에 아무런 장애를 보장 합니다. 따라서,이 실험적인 이식 모델 유전자 조작된 생쥐에서 퇴행 성 혈관 질환의 미래 분자 및 약리 수사를 위해 귀중 한 도구로 사용할 수 있습니다 결론 수 있습니다.
우리는 비디오 가이드가 간단한 arterio 동맥 모델의 사용을 설명 하는 교재로 작동할 수 그것은 혈관 병 리에 많은 중요 한 문제에 더 유익한 토론에 기여할 것입니다 믿습니다. 이 매우 빠른 문 합 방법 유전자 조작된 생쥐에서 혈관 질환 연구에 사용할 수 있습니다. 그것은 또한 이식 함께 동맥 모델에 수정으로 사용할 수 있습니다.
절차 동안 한계점이 있다. 봉합 자체의 배치 하는 것은 가장 중요 한 단계입니다. 외과 의사 기증자와 받는 사람의 적절 한 맞춤으로 대동맥의 어떤 비틀림을 방지 하는. 클램프 검사는 문 합 후 신중 하 게 제거 됩니다. 항상 먼저 함께 방출 이전에 인접 고압 측 벽을 잡고 낮은 압력의 결과로 원심 클램프를 공개 합니다. 방출의 순서를 따라 제대로의 결과 출혈 될 것 이다.
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 로마 Wieczorek에 그들의 우수한 편집, 피터 Kurdybacha 그리고 레온 데커 울 리 Heuter에 그들의 우수한 기술 지원 감사 하 고 싶습니다.
Materials
| Halsey Needle Holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Dumont #5-45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #5 Forceps – | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Lexer-Baby Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| Castroviejo Micro Needle Holder | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| Vannas Scissors | Aesculap, Germany | Typ OC498R | |
| Castroviejo Suture Forceps | Geuder, Germany | 19015 | |
| 6-0 silk black (Silk) | Deknatel, Research Triangle Park NC, USA | 18020-60- FST | |
| 11-0 monofilament (Ethilon) | Ethicon, Norderstedt, Germany | EH7438G | |
| 3-0 polyglycolic acid suture (Serafit) | Serag-Wiessner, Naila, Germany | 60203214 | |
| Isofluorane | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon | ||
| Bepanthene eye and nose cream | Bayer, Germany | ||
| Microscop | Zeiss | Opmi MDO/S5 | |
| Vaporiser | Eickemeyer | TEC3 | |
| Ultrasound | Vevo, Canada | 770,2100 |
Referenzen
- Rowinska, Z., et al. Non- invasive in vivo analysis of a murine aortic graft using high resolution ultrasound microimaging. Eur J Radiol. 81 (2), 244-249 (2012).
- Daugherty, A. Mouse models of atherosclerosis. Am J Med Sci. 323 (1), 3-10 (2002).
- Xu, Q. Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts. Am J Pathol. 165 (1), 1-10 (2004).
- Daugherty, A., Cassis, L. A. Mouse models of abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc .Biol. 24 (3), 429-434 (2004).
- Zernecke, A., Shagdarsuren, E., Weber, C. Chemokines in atherosclerosis: an update. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (11), 1897-1908 (2008).
- Chereshnev, I., et al. Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation. J Surg Res. 111 (2), 171-176 (2003).
- Koulack, J., McAlister, V. C., Giacomantonio, C. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).
- Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. New rapid technique for renal transplantation in the rat. Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).
- Baxter, K., Hao, P. M., Howden, B. O., Saunder, A., Jablonski, P. Modified technique of abdominal heart transplantation in the rat. J Heart Lung Transplant. 17 (11), 1057-1064 (1998).
- Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis. J Heart Lung Transplant. 18 (10), 946-951 (1999).
- Siemionow, M. Histopathology of microarterial anastomoses: end-to-end versus end-in-end (sleeve) technique. J Hand Surg Am. 15, 619-625 (1990).
- Charo, I. F., Ransohoff, R. M. The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation. N Engl J Med. 354 (6), 610-621 (2006).
- Sun, H., et al. Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation. Microsurgery. 18 (6), 368-371 (1998).
- Guo, L., Agarwal, A., George, J. F. Orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease. J Vis Exp. (69), e4338 (2012).
