Utilizando la técnica de la manga en un modelo murino de trasplante aórtico - un Video instructivo

procedimientos con sujetos animales fueron aprobados por el cuidado institucional del Animal y el Comité uso (IACUC) en RWTH Aachen University, Arizona 84-02.04.2012.A234. Nota: el procedimiento es demostrado utilizando ratones de tipo salvaje macho adulto con fondo CD1. Mantener los ratones en una unidad especializada de laboratorio antes y después de la cirugía, asegurando el acceso adecuado a alimentación, control veterinario especializado y el tratamiento. Si los animales se compran de afuera, permite la aclimatación de una semana antes de realizar cirugía. 1. preparación del donante utilizar instrumentos y materiales estériles para mantener las condiciones estériles durante la cirugía para evitar infecciones. Anestesiar cada ratón con una mezcla de 1.5% de isoflurano de volumen y oxígeno al 100% a través de una mascarilla. Coloque el ratón sobre una plataforma en la posición supina y la cinta todas sus patas a la mesa de operaciones. Compruebe sus reflejos pellizcando los pies traseros para asegurarse de que el ratón es suficientemente anestesiado. Poner pomada oftálmica en los ojos para evitar que se sequen durante el procedimiento. Remover todo el pelo del abdomen con un gel depilatorio o utilizar una máquina de afeitar. Realizar la operación bajo condiciones estériles. Desinfectar el abdomen alternando peelings de clorhexidina y agua estéril. Quitar la aorta del donante mediante una incisión abdominal de línea media con tijeras o bisturí. Retraiga el intestino manualmente hacia la derecha. Reflexionar con cuidado manualmente los intestinos sobre hacia el uso de guantes sin talco. Colocar el intestino en un trozo de gasa humedecido con solución salina para mantenerlo húmedo. a disecar la aorta abdominal con mucho cuidado de los tejidos circundantes mediante una disección Roma con una pinza. Separar el segmento de la aorta entre las arterias renales y la bifurcación de la vena cava con pinzas. Garantizar todas las ramas pequeñas de este segmento muy cuidadosamente usando una sutura de 11-0 monofilamento. Antes de quitar la aorta, inyectar 0,5 mililitros (mL) de solución salina que contiene 50 U de heparina en la vena cava inferior. Dejó el animal donante exsanguinate después de retira el segmento de la aorta. Enjuague la prótesis con solución salina y luego, transferir inmediatamente a un recipiente con solución salina helada. 2. Preparación del receptor anestesiar el animal receptor con una mezcla de 1.5% de isoflurano de volumen y oxígeno al 100% a través de una mascarilla, luego eliminar el vello y desinfectar (sección 1). Hacer una incisión en la línea media de la xifoides a la pelvis con un bisturí y retrae las paredes abdominales. Poner pomada oftálmica en los ojos para evitar la sequedad durante el proceso de. Abrigo al intestino en solución salina humedece una gasa y desplazar suavemente al animal ' s derecho. Diseque la aorta del infrarenal libre entre las arterias renales proximalmente y la bifurcación distal con una pinza. Garantizar todas las ramas pequeñas de este segmento muy cuidadosamente usando una sutura de 11-0 monofilamento. Abrazadera de las porciones proximales y distales de la aorta con una sutura de seda solo 6-0. Divide la aorta en el centro entre las abrazaderas y regar los extremos cortados con solución salina heparinizada para lavar el lumen abierto. Colocar el injerto en posición ortotópica con alimentación recipiente final insertado en el buque receptor seguido de sutura con monofilamento de 11-0, teniendo cuidado de evitar cualquier torsión de la aorta alineando correctamente el donante y receptor ( figura 1) 10. con cuidado suelte las ligaduras después de realizar una inspección de la anastomosis. Suelte la abrazadera distal primero. Esto se traduce en baja presión manteniendo las paredes juntos antes de ofrecer el lado de alta presión proximal. Perfusión del injerto inmediatamente y busque un pulso visible. Suavemente Quite los restos de la seda. La longitud de superposición óptima entre donante y receptor aorta es 1-2 mm. Devolver el contenido abdominal a la cavidad abdominal y cerrar toda la herida con una corriente sutura ácida de poliglicólico 3-0. Dar la buprenorfina de ratón (0,05 mg/kg de peso corporal por vía subcutánea (SC)) antes de terminar la anestesia. No descuide un animal hasta que esté completamente consciente. Manejar el dolor la terapia con buprenophine 0.05 mg/kg de peso corporal administrada SC tres veces al día durante tres días después de la operación aprobadas por el órgano de supervisión institucional. Para tejido cosecha, anestesiar los ratones receptores como descrita anteriormente y al ras los vasos con solución salina tamponada con fosfato (PBS) seguido por 4% formaldehído/PBS (pH = 7,4) por punción cardiaca. Retire suavemente los injertos. Después de la noche a la mañana fijación en formaldehído 4% / PBS, ejemplares de proceso más y embed en parafina.