Usando a técnica de manga em um modelo do rato da transplantação da aorta - um vídeo instrutivo
Summary
Apresentamos um modelo de aórtica transplante ortotópico utilizando a técnica de manga em ratos. É um método de anastomose muito rápida, que pode ser empregado em estudos de doença vascular.
Abstract
Ortotópico aórtica transplante utilizando a técnica de manga reduz lesões na aorta com taxa de falha de apenas 10-20%. O tempo que se anastomosam da aorta em camundongos, usando o método de manga foi curto e fácil, em média 20 min, permitindo estudos de iso/allo enxertos. O seguinte artigo descreve o procedimento de transplante aórtica usado em nosso laboratório. Os ratos foram anestesiados com uma mistura de isoflurano volume de 1,5% e 100% de oxigênio através de uma máscara facial. Neste ponto, o segmento da aorta entre as artérias renais e sua bifurcação foi separado da veia cava, livremente preparado e clampedat os segmentos proximais e distais, com uma única sutura de seda. Antes da remoção da aorta, uma solução salina contendo heparina foi injetada na veia cava inferior. Então a aorta foi cortada entre as pinças e uma solução de heparina salina foi usada para irrigar o lúmen. A técnica de manga com suturas monofilamento foi usada para a aorta abdominal na posição ortotópico de transplante.
Introduction
Como apontado em estudo anterior, foi dada grande atenção murino aórtica transplante modelos que permitem a discriminação entre respostas vasculares específicas causadas por enxerto em si e certos fatores sistêmicos conectados com um ambiente de arteriogenic 1 , 2 , 3. o principal fator que desempenha um papel crucial aqui é a disponibilidade de nocaute e ratos transgénicos. Seu envolvimento em tal modelo oferece a possibilidade de identificar e determinar novos caminhos fisiopatológicos associados com o desenvolvimento da doença vascular degenerativa, tais como a arteriosclerose e aneurisma formação4, 5.
É interessante notar que, durante a enxertia uma intrínseca isquemia/reperfusão lesão aos vasos destinados o transplante pode aparecer. Portanto, a ocorrência de problemas específicos com integridade de enxerto ou reação inflamatória inesperada durante o período pós-operatório não pode ser excluída possivelmente impedindo alterações fisiopatológicas em doenças vasculares degenerativas3 ,4,5,6,7. Anastomose de manga é o método alternativo de fim-de-final para anastomose arterial dos navios de menos de um milímetro de diâmetro e tem sido aplicada com sucesso em transplante renal e cardíaca em ratos, que foi posteriormente adaptado para aórtica transplante em camundongos por Dambrin et al 8 , 9 , 10 , 11.
Dano da aorta, usando a técnica de transplante de manga é minimizado com uma taxa de falha técnica muito baixa, devido à sua duração apenas de 20 min em média. Nossos resultados anteriores têm demonstrado excelentes propriedades funcionais e estruturais de um isograft na vivo após transplante usando a técnica de manga1. Dambrin et al descrevem que, depois de uma curta curva de aprendizado, a taxa de sucesso foi superior a 78%10. Complicações como trombose são raras, por exemplo. Engelbrecht et al não observaram trombose utilizando a técnica de manga em transplante renal no rato8.
O modelo murino transplante da aorta com anastomose de manga é uma ferramenta rápida e fácil para estudar reações de iso/aloenxerto no vaso transplantado. Este vídeo ilustra o procedimento de transplante aórtica realizado em nosso laboratório. Este modelo de transplante pode ser útil na definição dos mecanismos patológicos subjacentes da doença degenerativa vascular e pode contribuir para a nova avaliação de intervenções molecular e farmacológica12.
Protocol
Representative Results
Discussion
Antes deste estudo vários outros modelos de transplante em camundongos foram exaustivamente analisadas3,6,7,10,13,14. O modelo de transplante da aorta, usando a técnica de manga com modificações por Dambrin et al foi selecionado como combinado nossos critérios e mostrou uma alta confiabilidade de anastomose em comparação com métodos convencionais-to-end de sutura manga 1 , 10.
Esta técnica é favorável em muitos aspectos com grampear tempo consideravelmente reduzido, minimizando os danos para a aorta durante a cirurgia. Observou-se uma baixa incidência de trombose, além de evitar uma potencial incompatibilidade no calibre de navio entre o dador e o receptor. As observações acima fazem esta técnica altamente apropriado para investigar doença vascular em aorta transplantes em ratos.
Em um estudo de acompanhamento, em que um ultra-som foi realizado a 8 semanas após o transplante, sem alterações significativas foram detectadas. Isto confirmado suposições que qualquer dano na aorta durante a cirurgia seria mínimo1.
O procedimento de enxerto apresentado neste artigo não garante nenhum comprometimento tanto em sua função e a integridade do enxerto. Portanto, pode-se concluir que este modelo experimental de transplante pode servir como uma ferramenta valiosa para futuras investigações moleculares e farmacológicas da doença degenerativa do navio em camundongos geneticamente modificados.
Acreditamos que o guia vídeo pode funcionar como ilustrando o uso deste modelo simples de artério-arterial de material de ensino e que contribuirá para mais frutífero debate em muitas questões importantes em patologias vasculares. Este método de anastomose muito rápida pode ser usado para estudar a doença vascular em ratos geneticamente modificados. Ele também pode ser usado como uma modificação no modelo de aneurisma, combinado com o transplante.
Há pontos críticos durante o procedimento. A colocação da sutura em si é o passo mais crítico. O cirurgião tem que ter cuidado para evitar qualquer torção da aorta por alinhamento adequado do doador e do receptor. Os grampos são cuidadosamente removidos após a inspeção da anastomose. A pinça distal sempre deve ser lançada primeiro, resultando em baixa pressão, segurando as paredes juntos antes do lançamento do lado de alta pressão proximal. A consequência de não corretamente seguindo a sequência de lançamento poderia estar sangrando.
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gostaríamos de agradecer a Roma Wieczorek e Peter Kurdybacha por sua excelente assistência de edição e Leon Decker e Uli Heuter para sua assistência técnica excelente.
Materials
| Halsey Needle Holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Dumont #5-45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #5 Forceps – | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Lexer-Baby Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| Castroviejo Micro Needle Holder | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| Vannas Scissors | Aesculap, Germany | Typ OC498R | |
| Castroviejo Suture Forceps | Geuder, Germany | 19015 | |
| 6-0 silk black (Silk) | Deknatel, Research Triangle Park NC, USA | 18020-60- FST | |
| 11-0 monofilament (Ethilon) | Ethicon, Norderstedt, Germany | EH7438G | |
| 3-0 polyglycolic acid suture (Serafit) | Serag-Wiessner, Naila, Germany | 60203214 | |
| Isofluorane | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon | ||
| Bepanthene eye and nose cream | Bayer, Germany | ||
| Microscop | Zeiss | Opmi MDO/S5 | |
| Vaporiser | Eickemeyer | TEC3 | |
| Ultrasound | Vevo, Canada | 770,2100 |
Referenzen
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