Utilizzando la tecnica di manica in un modello murino di trapianto aortico - un Video didattico
Summary
Vi presentiamo un modello aortico trapianto ortotopico utilizzando la tecnica di manica in topi. È un metodo molto rapido anastomosi, che possa essere impiegato negli studi della malattia vascolare.
Abstract
Trapianto orthotopic aortica utilizzando la tecnica di manica riduce la lesione all’aorta con tasso di fallimento di solo 10-20%. Il tempo per anastomotizzare l’aorta nei topi utilizzando il metodo di Manica era breve e facile con una media di 20 min, permettendo studi di iso/allo innesti. Il seguente articolo descrive la procedura di trapianto aortico utilizzata nel nostro laboratorio. I topi sono stati anestetizzati con una miscela di 1,5% volume isoflurano e 100% ossigeno attraverso una maschera. A questo punto, il segmento dell’aorta tra le arterie renali e relativa biforcazione è stato separato dalla vena cava, liberamente preparato e clampedat i segmenti prossimali e distali con una singola sutura seta. Prima della rimozione dell’aorta, una soluzione salina contenente eparina è stata iniettata in vena cava inferiore. L’aorta è stato tagliato tra i morsetti, quindi una soluzione salina eparinizzata era utilizzata per irrigare il lume. La tecnica di manica con suture monofilamento è stata usata per trapianto di aorta addominale nella posizione ortotopica.
Introduction
Come sottolineato in un precedente studio, grande attenzione è stata dedicata ai modelli murini trapianto aortico che permettono la distinzione tra specifiche risposte vascolari causate tramite l’innesto stesso e determinati fattori sistemici connessi con un ambiente di arteriogenica 1 , 2 , 3. il fattore principale che svolge un ruolo cruciale qui è la disponibilità di knockout e transgenici. Loro coinvolgimento in tale modello offre la possibilità di identificare e determinare nuovi percorsi fisiopatologici associati con lo sviluppo della malattia vascolare degenerante, quali aterosclerosi e aneurisma formazione4, 5.
Vale la pena notare che durante l’innesto di un intrinseco ischemia/riperfusione possono comparire lesioni ai vasi destinati al trapianto. Pertanto, il verificarsi di problemi specifici con l’integrità dell’innesto o un’inaspettata reazione infiammatoria durante il periodo post-operatorio non si può escludere eventualmente precludendo cambiamenti patofisiologici in malattie vascolari degenerative3 ,4,5,6,7. Anastomosi manica è il metodo alternativo in fine per anastomosi arteriosa dei vasi con un diametro di meno di un millimetro ed è stato applicato con successo nel trapianto renale e cardiaco in ratti che è stato successivamente adattato per aortica trapianto in topi da altresí et al. 8 , 9 , 10 , 11.
Aortico danni usando la tecnica di trapianto di manica sono ridotto al minimo con un tasso di guasti tecnici molto bassa, a causa di esso dura solo 20 minuti in media. I nostri risultati precedenti hanno dimostrato eccellenti proprietà funzionali e strutturali di un isograft in vivo dopo trapianto usando la tecnica di manica1. Altresí et al descrivere che dopo una breve curva di apprendimento, il tasso di successo è stato oltre il 78%10. Le complicazioni quali trombosi sono rare, ad esempio Engelbrecht et al non ha rispettato la trombosi utilizzando la tecnica di manica nel trapianto renale nel ratto8.
Il modello murino trapianto aortico con manica anastomosi è uno strumento rapido e facile per studiare le reazioni di iso/del documento non autografo nel vaso trapiantato. Questo video illustra la procedura di trapianto aortico effettuata nel nostro laboratorio. Questo modello di trapianto può essere utile nel definire i meccanismi patologici della malattia degenerativa vascolare e può contribuire a un’ulteriore valutazione di interventi farmacologici e molecolari12.
Protocol
Representative Results
Discussion
Prima di questo studio diversi altri modelli di trapianto in topi sono stati accuratamente analizzati3,6,7,10,13,14. Il modello di trapianto aortico usando la tecnica di manica con modifiche di altresí et al è stato selezionato come e ‘ abbinato ai nostri criteri e hanno mostrato un’elevata affidabilità dell’anastomosi manica rispetto ai metodi convenzionali-to-end sutura 1 , 10.
Questa tecnica è favorevole in molti modi con tempo di cross-clamp notevolmente ridotto riducendo al minimo i danni all’aorta durante la chirurgia. Oltre ad evitare una potenziale mancata corrispondenza nel calibro di nave tra il donatore e il ricevente è stata osservata una bassa incidenza di trombosi. Le osservazioni di cui sopra rendono questa tecnica altamente adatto per indagare la malattia vascolare nei trapianti aortici nei topi.
In uno studio di follow-up in cui l’ecografia è stata effettuata 8 settimane dopo il trapianto, senza i cambiamenti significativi sono stati rilevati. Questo confermato le ipotesi che eventuali danni all’aorta durante la chirurgia sarebbe minima1.
La procedura d’innesto presentata in questo articolo non garantisce nessun danno sia per l’integrità dell’innesto e la sua funzione. Pertanto, si può concludere che questo modello sperimentale di trapianto può servire come uno strumento prezioso per le indagini molecolari e farmacologici futuri della malattia degenerativa del vaso in topi geneticamente modificati.
Noi crediamo che la video guida può funzionare come materiale che illustrano l’utilizzo di questo semplice modello di artero-arteriosa di insegnamento e che ciò contribuirà ulteriormente fecondo dibattito su molte questioni importanti nella patologia vascolare. Questo metodo di anastomosi molto rapido può essere utilizzato per studiare la malattia vascolare in topi geneticamente modificati. Può anche essere utilizzato come una modifica nel modello aneurisma combinato con trapianto.
Ci sono punti critici durante la procedura. L’immissione della sutura stessa è la fase più critica. Il chirurgo deve aver cura di evitare qualsiasi torsione dell’aorta da un allineamento corretto del donatore e del ricevente. I morsetti vengono accuratamente rimossi dopo l’ispezione dell’anastomosi. Il morsetto distale dovrebbe essere rilasciato sempre prima con conseguente bassa pressione che tiene le pareti insieme prima del rilascio di lato ad alta pressione prossimale. La conseguenza di non correttamente seguendo la sequenza di rilascio sarebbe essere sanguinamento.
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vorremmo ringraziare Roma Wieczorek e Peter Kurdybacha per la loro eccellente assistenza editing e Leon Decker e Uli Heuter per la loro eccellente assistenza tecnica.
Materials
| Halsey Needle Holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Dumont #5-45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #5 Forceps – | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Lexer-Baby Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| Castroviejo Micro Needle Holder | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| Vannas Scissors | Aesculap, Germany | Typ OC498R | |
| Castroviejo Suture Forceps | Geuder, Germany | 19015 | |
| 6-0 silk black (Silk) | Deknatel, Research Triangle Park NC, USA | 18020-60- FST | |
| 11-0 monofilament (Ethilon) | Ethicon, Norderstedt, Germany | EH7438G | |
| 3-0 polyglycolic acid suture (Serafit) | Serag-Wiessner, Naila, Germany | 60203214 | |
| Isofluorane | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon | ||
| Bepanthene eye and nose cream | Bayer, Germany | ||
| Microscop | Zeiss | Opmi MDO/S5 | |
| Vaporiser | Eickemeyer | TEC3 | |
| Ultrasound | Vevo, Canada | 770,2100 |
Referenzen
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