باستخدام هذه التقنية الأكمام في نموذج ماوس لزرع الابهري-فيديو التعليمية
Summary
نحن نقدم نموذجا زرع الابهري أورثوتوبيك باستخدام تقنية الأكمام في الفئران. وهي طريقة ملامسة سريعة جداً، التي يمكن استخدامها في الدراسات المتعلقة بأمراض الأوعية الدموية.
Abstract
أورثوتوبيك زرع الابهري باستخدام تقنية الأكمام يقلل الإصابة بالشريان الاورطي مع معدل الفشل فقط 10-20%. وكان الوقت ل anastomose الشريان الاورطي في الفئران باستخدام الأسلوب الأكمام قصيرة وسهلة في المتوسط 20 دقيقة، سمحت الدراسات الطعوم iso/الو. وصف المقال التالي الإجراء زرع الابهري المستخدمة في المختبر. تم تخديره الفئران بمزيج من إيسوفلوراني حجم 1.5% والأكسجين 100% من خلال قناع لوجه. عند هذه النقطة، كان الجزء من الشريان الاورطي بين الشرايين الكلوية والتشعب فصله عن الوريد الأجوف، أعد بحرية وكلامبيدات الأجزاء الدانية والبعيدة بخياطة حرير مفردة. قبل إزالة الشريان الاورطي، تم حقن حلاً مالحة التي تحتوي على الهيبارين الأجوف فينا أقل شأنا. ثم تم قطع الشريان الاورطي بين المشابك واستخدمت الهيبارين مالحة حل لمسح التجويف. استخدمت تقنية الأكمام مع شعيرات خيوط من أجل زرع الشريان الاورطي البطني في موقف أورثوتوبيك.
Introduction
كما أشار في دراسة سابقة، قد أولى اهتمام كبير لزرع الابهري مورين من النماذج التي تسمح بالتمييز بين الاستجابات المحددة الأوعية الدموية الناجمة عن الفساد نفسها وبعض العوامل المنهجية المرتبطة ببيئة أرتيريوجينيك 1 , 2 , 3-العامل الرئيسي الذي يضطلع بدور حاسم هنا هو توافر خروج المغلوب والفئران المعدلة وراثيا. مشاركتها في مثل هذا نموذج يتيح إمكانية تعيين وتحديد مسارات الفيزيولوجية المرضية الجديدة المرتبطة بتطور المرض الأوعية الدموية التنكسية، مثل تصلب الشرايين وتمدد الأوعية الدموية في تشكيل4، 5.
تجدر الإشارة إلى أن الضرر في الأوعية المخصصة للزرع قد تظهر أثناء تطعيم الاسكيمية/ضخه جوهرية. ذلك لا يمكن استبعاد حدوث مشاكل معينة مع السلامة الاختلاس أو فعل التهابية غير متوقع خلال الفترة اللاحقة للعمليات الجراحية ربما يحول دون التغييرات الفيزيولوجية المرضية في الأوعية الدموية من الأمراض التنكسية3 ،،من45،،من67. ملامسة كم هو الأسلوب في النهاية البديلة لملامسة الشرياني السفن التي يبلغ قطرها أقل من ملليمتر واحد وطبقت بنجاح في زرع الكلي والقلب في الفئران التي تم تكييفها لاحقاً إلى الابهر زرع في الفئران التي دامبرين et al. 8 , 9 , 10 , 11.
يتم تصغير الضرر الابهري باستخدام تقنية زرع الأكمام مع معدل فشل تقنية منخفضة جداً، نظراً لأنها دائمة إلا 20 دقيقة في المتوسط. أظهرت النتائج السابقة خصائص وظيفية وهيكلية ممتازة إيسوجرافت في فيفو بعد زرع الأعضاء باستخدام تقنية الأكمام1. وصف دامبرين et al. أن بعد كان منحنى التعلم قصيرة معدل نجاح أكثر من 78%10. مضاعفات مثل تجلط الدم نادرة، على سبيل المثال لم يلاحظ Engelbrecht et al. تجلط الدم باستخدام تقنية الأكمام في زرع الكلي في الفئران8.
نموذج مورين زرع الابهر مع أناستوموسيس كم أداة سريعة وسهلة لدراسة ردود الفعل iso/allograft في السفينة زرع. هذا الفيديو يوضح الإجراء الابهري زرع أجريت في المختبر. قد تكون مفيدة في تحديد آليات الأمراض التنكسية الأوعية الدموية المرضية الكامنة وراء هذا النموذج الزرع وقد تسهم في مزيد من التقييم للتدخلات الدوائية والجزيئية12.
Protocol
Representative Results
Discussion
قبل هذه الدراسة تم زرع نماذج أخرى مختلفة في الفئران تحليل دقيق3،،من67،10،13،14. تم اختيار نموذج زرع الابهري باستخدام هذه التقنية الأكمام مع التعديلات التي دامبرين et al. كما أنها مطابقة لمعايير لدينا وأظهر موثوقية عالية لملامسة الأكمام مقارنة بالأساليب التقليدية للنهاية خياطة 1 , 10.
هذا الأسلوب مواتية في نواح كثيرة مع الوقت عبر المشبك وقللت التقليل من الأضرار إلى الشريان الاورطي أثناء الجراحة. وقد لوحظ حدوث انخفاض تجلط الدم بالإضافة إلى تجنب عدم توافق محتملة في عيار السفينة بين الجهات المانحة والمتلقية. الملاحظات المذكورة أعلاه تجعل هذه التقنية مناسبة جداً للتحقيق في أمراض الأوعية الدموية في زرع الابهري في الفئران.
في دراسة لمتابعة التي أجريت بالموجات فوق الصوتية 8 أسابيع بعد زرع الأعضاء، لم يتم اكتشاف أي تغيرات هامة. وهذا تأكيد الافتراضات أن أي ضرر يلحق بالشريان الاورطي أثناء جراحة الحد الأدنى1.
إجراءات تطعيم المعروضة في هذه المقالة ضمانات عدم الإخلال في سلامة الاختلاس ووظيفتها. ولذلك، يمكن استنتاج أن هذا نموذج تجريبي زرع قد تخدم كأداة قيمة لإجراء تحقيقات الجزيئية والدوائي في المستقبل من الأمراض التنكسية السفينة في الفئران المهندسة وراثيا.
ونحن نعتقد أن الدليل الفيديو يمكن أن تعمل كتدريس المواد التي توضح استخدام هذا النموذج أرتيريو-الشرياني بسيطة، وأنها سوف تسهم في مواصلة المناقشة المثمرة بشأن العديد من القضايا الهامة في أمراض الأوعية الدموية. يمكن استخدام هذا الأسلوب ملامسة سريعة جداً لدراسة أمراض الأوعية الدموية في الفئران المهندسة وراثيا. يمكن استخدامه أيضا كتعديل في نموذج الأوعية الدموية جنبا إلى جنب مع زرع الأعضاء.
وهناك نقاط حرجة أثناء الإجراء. وضع خياطة نفسها هي الخطوة الأكثر أهمية. وقد الجراح الحرص على تجنب أي التواء في الشريان الاورطي بالمحاذاة الصحيحة للجهات المانحة والمتلقية. تتم إزالة المشابك بعناية بعد التفتيش ملامسة. ينبغي دائماً صدر المشبك القاصي أولاً أسفر الضغط المنخفض الضغط على الجدران معا قبل الإفراج عن الجانب ذات الضغط العالي الدانية. أن النزيف نتيجة اتباع تسلسل الإصدار غير صحيح.
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نود أن نشكر فايتسوريك الغجر وبيتر كورديباتشا لمساعدتها التحرير ممتازة، وديكر ليون وهيوتير فراج لمساعداتها التقنية الممتازة.
Materials
| Halsey Needle Holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Dumont #5-45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #5 Forceps – | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Lexer-Baby Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| Castroviejo Micro Needle Holder | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| Vannas Scissors | Aesculap, Germany | Typ OC498R | |
| Castroviejo Suture Forceps | Geuder, Germany | 19015 | |
| 6-0 silk black (Silk) | Deknatel, Research Triangle Park NC, USA | 18020-60- FST | |
| 11-0 monofilament (Ethilon) | Ethicon, Norderstedt, Germany | EH7438G | |
| 3-0 polyglycolic acid suture (Serafit) | Serag-Wiessner, Naila, Germany | 60203214 | |
| Isofluorane | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon | ||
| Bepanthene eye and nose cream | Bayer, Germany | ||
| Microscop | Zeiss | Opmi MDO/S5 | |
| Vaporiser | Eickemeyer | TEC3 | |
| Ultrasound | Vevo, Canada | 770,2100 |
Referenzen
- Rowinska, Z., et al. Non- invasive in vivo analysis of a murine aortic graft using high resolution ultrasound microimaging. Eur J Radiol. 81 (2), 244-249 (2012).
- Daugherty, A. Mouse models of atherosclerosis. Am J Med Sci. 323 (1), 3-10 (2002).
- Xu, Q. Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts. Am J Pathol. 165 (1), 1-10 (2004).
- Daugherty, A., Cassis, L. A. Mouse models of abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc .Biol. 24 (3), 429-434 (2004).
- Zernecke, A., Shagdarsuren, E., Weber, C. Chemokines in atherosclerosis: an update. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (11), 1897-1908 (2008).
- Chereshnev, I., et al. Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation. J Surg Res. 111 (2), 171-176 (2003).
- Koulack, J., McAlister, V. C., Giacomantonio, C. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).
- Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. New rapid technique for renal transplantation in the rat. Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).
- Baxter, K., Hao, P. M., Howden, B. O., Saunder, A., Jablonski, P. Modified technique of abdominal heart transplantation in the rat. J Heart Lung Transplant. 17 (11), 1057-1064 (1998).
- Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis. J Heart Lung Transplant. 18 (10), 946-951 (1999).
- Siemionow, M. Histopathology of microarterial anastomoses: end-to-end versus end-in-end (sleeve) technique. J Hand Surg Am. 15, 619-625 (1990).
- Charo, I. F., Ransohoff, R. M. The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation. N Engl J Med. 354 (6), 610-621 (2006).
- Sun, H., et al. Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation. Microsurgery. 18 (6), 368-371 (1998).
- Guo, L., Agarwal, A., George, J. F. Orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease. J Vis Exp. (69), e4338 (2012).
