Generación de células madre pluripotentes inducidas a partir de melanoma humano linfocitos infiltrantes de tumores,

Tecnología de reprogramación celular que permite la generación de células madre pluripotentes inducidas (iPSCs) a través de la sobreexpresión de un conjunto definido de factores de transcripción es una gran promesa en el campo de las terapias basadas en células ^1,2. Estas células iPS exhibir características transcripcionales y epigenéticos y tienen la capacidad de auto-renovación y pluripotencia, de manera similar a las células madre embrionarias (ESC) ^3-5. Notables progresos realizados en la técnica de reprogramación durante la última década ha permitido generar células iPS humanas, incluso a partir de células terminalmente diferenciadas, tales como las células T ^6-8. T iPSCs derivadas de células (TiPSCs) conservan la misma configuración reordenado de genes de la cadena del receptor de células T (TCR) como las células T originales, lo que permite la regeneración de las células T específicas de antígeno de TiPSCs ^9-11.

Casi el 80% de los linfocitos infiltrantes de melanoma (TIL) obtenido a partir de tumor de un paciente reconoce específicamente asociado a un tumor antígenos unand mantener la citotoxicidad contra las células cancerosas originales ^12. En particular, se encontró que la expresión de la muerte celular programada proteína-1 (PD-1) en los TIL para identificar el repertorio reactivos con tumor autólogo, incluyendo mutado CD8-neoantígeno específica ⁺ linfocitos ^13. La transferencia adoptiva de ex-vivo TILs autólogos expandidos en combinación con regímenes de lymphodepleting preparativa y la administración sistémica de la interleucina-2 (IL-2) puede causar regresión sustancial de melanoma metastásico en subgrupos de pacientes ^14. A pesar de los resultados alentadores en modelos preclínicos y en pacientes, la mala supervivencia de las células T infundidos y la existencia de vías inmunosupresores parecen poner en peligro todo el potencial de la terapia adoptiva de células T. Protocolos clínicos actuales requieren una extensa manipulación ex vivo de las células T autólogas con el fin de obtener grandes cantidades. Esto resulta en la generación de células T diferenciadas terminalmente que tienen pobre supervivencia, reducción de la proliferative capacidad, y altos niveles de PD-1 ^15.

Esta limitación de la terapia adoptiva de células T puede ser teóricamente superar mediante el uso de células iPS que pueden proporcionar una fuente ilimitada de células T autólogas para la inmunoterapia. Recientemente hemos informado de la reprogramación del melanoma TIL que expresan altos niveles de PD-1 por el virus Sendai (SEV) transducción mediada de los cuatro factores de transcripción, OCT3 / 4, Sox2, Klf4 y c-MYC ^16. Mientras que los vectores retrovirales requieren la integración en los cromosomas del hospedador para expresar genes de reprogramación, vectores SeV no se permite la integración y finalmente son eliminados del citoplasma. La reprogramación de la eficiencia es mucho mayor con un sistema de SeV en comparación con lentivirus o retrovirus vectores ^6-8. Además, SEV puede reprogramar específicamente a las células T en células mononucleares de sangre periférica (PBMCs), mientras que algunos clones IPSC generados por lentivirus o vectores de retrovirus pueden ser de linajes linfoides ^6-8. A continuación, detallamoslos procedimientos implementados para el aislamiento y la activación de melanoma humano TIL y para la generación de iPSCs derivados de TIL utilizando un sistema de reprogramación de SeV.