Генерация индуцированные плюрипотентные стволовые клетки от меланомы человека Опухоль-инфильтрации лимфоцитами

Клеточная технология перепрограммирования , что позволяет генерировать индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) с помощью избыточной экспрессии определенного набора факторов транскрипции имеет большие перспективы в области клеточной терапии ^1,2. Эти иПСК обладают транскрипционные и эпигенетические особенности и обладают способностью к самообновлению и плюрипотентности, подобно эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) ^3-5. Примечателен прогресс в перепрограммирования технологии за последнее десятилетие позволило нам генерировать человеческие иПСК даже из терминально дифференцированных клеток, таких как Т – клетки ^6-8. Т – клеточные производные иПСК (TiPSCs) сохраняют ту же переставить конфигурацию Т – клеточного рецептора (TCR) генов цепи как исходных Т – клеток, что позволяет регенерацию антиген-специфических Т – клеток из TiPSCs ^9-11.

Почти 80% с меланомой инфильтрации лимфоцитов (Тилсом), полученные из опухоли пациента специфически распознавать опухолевый антигены, ассоциированные с Aй поддерживать цитотоксичность против первоначальных раковых клеток ^12. Следует отметить, что было установлено , что экспрессия смерти запрограммированным клеток белок-1 (ПД-1) на Тилсом для идентификации аутологичных опухоле-реактивных репертуар, в том числе мутантным неоантигена-специфических CD8 ⁺ лимфоциты ^13. Адаптивная передача экс-виво расширенных аутологичных Тилсом в сочетании с препаративных режимами lymphodepleting и системного введения интерлейкин-2 (IL-2) , может привести к существенной регрессии метастатической меланомой в группах пациентов ^14. Несмотря на обнадеживающие результаты в доклинических моделях и у пациентов, плохое выживание вливали Т-клеток и наличие иммуносупрессивной путей, по всей видимости поставить под угрозу весь потенциал приемному клеточной терапии Т. Текущие клинические протоколы требуют больших ех естественных условиях манипулирование аутологичных Т – клеток, чтобы получить большое количество. Это приводит к образованию терминально дифференцированных Т-клеток, которые имеют плохую выживаемость, снижение Proliferative потенциала, а также высокие уровни PD-1 ^15.

Это ограничение приемному клеточной терапии Т теоретически может быть преодолен с помощью ИПСК, которые могут обеспечить неограниченный источник аутологичных Т-клеток для иммунотерапии. Недавно мы сообщали о перепрограммирование меланомой Tīls , выражающую высокие уровни PD-1 от вируса Сендай (SeV) опосредованной трансдукции четырех факторов транскрипции, Oct3 / 4, Sox2, Klf4 и с-Мус ^16. В то время как ретровирус векторы требуют интеграции в хромосомы хозяина, чтобы выразить гены перепрограммировать, SEV векторы неинтегрирующих и в конечном счете исключены из цитоплазмы. Перепрограммирование эффективность значительно выше , с системой SeV по сравнению с лентивирусов или ретровирусов векторами ^6-8. Кроме того, SEV может специфически перепрограммировать Т – клеток в мононуклеарных клетках периферической крови (МКПК), в то время как некоторые Ipsc клоны , порожденные лентивирусов или ретровирусов векторы могут быть из нелимфоидных родословных ^6-8. Здесь мы подробнопроцедуры реализованы для выделения и активации меланомы человека Тилсом и для генерации TIL-производных ИПСК с использованием системы перепрограммирования SEV.