Analys av vidhäftning under Shear stress för studier av T-lymfocyter-adhesionsmolekyl interaktioner

T-lymfocyter vidhäftning förmedlar ett antal distinkta processer i ett friskt immunsystem, ^tre spela kritiska roller i T-cell trafficking och antigenpresentation. Huruvida under immunövervakning eller ett aktivt immunsvar dessa två breda roller för vidhäftning är kritiska. ⁴ De fysiologiska signaleringshändelser av T-cell-endoteliala cellinteraktioner är distinkta från T-cell-antigenpresenterande cell (APC) interaktioner, och därför kräver olika metoder för studie för att bäst förstå signaleringskaskader inblandade. Företaget vidhäftning av en T-cell till en blodkärlsvägg under lymfocyter extravasering kräver snabb och dynamisk grin aktivering. Den snäva växelverkan mellan ett aktivt tillstånd grin och adhesionsmolekyler längs endotelet leder till vidhäftning resistent mot flödet av blod, vilket gör att T-celler att krypa längs ytan på jakt efter ett område tillåtande till cellpassage. ⁵ för genomsökning av en T-cell bi -directionally alonga blodkärlsväggen är beroende av polariserade adhesion, med en distinkt adhesiv främre änden av den T-cellen. ⁶ Viktigast starka adhesion och migration kräver motstånd mot skjuvkraft som alstras genom att cirkulera blodflödet.

Vid utformningen av experiment för att studera lymfocytadhesion bör uppmärksamhet ägnas åt den specifika stimulansen av intresse. Medan integrinaktivering är en vanlig och viktig del av alla former av T-cell adhesion, kaskader av aktivering kommer sannolikt att vara unik nedströms individuella receptorer och co-receptorer. Likaså integrin och adhesionsmolekyl par fungerar i specialiserade mikromiljöer och på specifika subpopulationer. På detta sätt kan dessa par regleras helt annorlunda. Den modell som presenteras här är idealisk för att studera signaleringskaskader som leder till integrinaktivering sker under skjuvspänning förhållanden. ⁷ Dessa interaktioner kan inte förstås tillräckligt i en statisk adhesipå systemet på grund av effekterna dessa krafter har visat sig ha direkt på T-cellbeteende. ⁸ Även presenteras här med T-celler och CHO (Chinese Hamster Ovary) celler manipulerade att uttrycka human ICAM-1 (CHO-ICAM-celler) Systemet kan lätt modifieras för att studera olika leukocytpopulationer eller adhesionsmolekyler.

Denna analys tillhandahåller en metod för att kvantifiera T-cellvidhäftningsförmåga och integrin-aktivering med hjälp av skjuvspänning, vilket ger en modell för fast vidhäftning skede av leukocyter extravasering. Genom användning av CHO-ICAM-celler kan undersökas affiniteten hos LFA-1 för sin ligand i levande celler i realtid som svar på olika stimuli av intresse. Denna teknik kräver lätt erhållas, kommersiellt tillgängliga mikroflödeskammare i kombination med en sprutpump, kraftigt förenkla den utrustning som krävs för att modellera blodflödet och skjuvning stress jämfört med andra modeller. ⁹ En annan stor fördel med denna analys är att specifika signaleringskaskader och den resulterande aktiveringstillstånd enskilda integriner kan rent studeras genom användning av konstruerade CHO-celler som uttrycker humana adhesionsmolekyler av intresse. Dessutom är kombinationen av kvantitativa data med levande cell imaging en betydande fördel med denna metod. Sammantaget medan ett antal analyser av statisk T-cell adhesion har beskrivits som fint modell T-cell-APC-interaktioner, dessa modeller är otillräckliga i att fånga den dynamiska processen för T-cell-epitelial vidhäftning. Av denna anledning, när man väljer ett vidhäftningsanalysen stimulans i fråga måste övervägas.