从背小鼠皮肤分离毛囊干细胞和表皮角质形成细胞

成体干细胞（SCS）是用于通过替换死亡细胞维持组织稳态和在损伤修复受损的组织是至关重要的。这些雪旺由它们经受持续自我更新和分化成各种细胞谱系^1-3能力来定义。最好研究的系统，这取决于他们的补给成人的SC，包括造血系统，肠和皮肤^1,2,4。

在胚胎发生期间，皮肤开始作为表皮细胞的一个单层。当间质细胞填充皮肤，形成一个基本的胶原真皮⁵毛囊（HF）的形态开始。专业间充质细胞，后来构成真皮乳头（DP），直接组织表皮层下方，刺激上皮以形成开始向下⁶长出头发placodes。高度增殖基质细胞，位于在HF的底部，信封这些间充质细胞，并形成毛球，而内层开始分化成同心圆柱体，以形成毛干（HS）及周边内根鞘^{（IRS）2,3。}

在出生后皮肤的表皮是由三个室：所述滤泡表皮（IFE），皮脂腺（SG）和HF。与此相反的IFE和SG这是在稳态的恒定状态时，HF是一个动态的微型器官而经历生长的连续周期（生长期），破坏（退化期）和其余（休止期^）4,7。毛囊干细胞（HFSCs），该燃料这个永久循环，驻留在HF内的一个专门利基称为凸起^4。在从DP生长期的HFSCs退出隆起，下面的启动信号，开始增殖并下降向下从而形成称为外根鞘细胞的长直线步道^{（ORS）8-10。}基质细胞，该包围的DP在HF，快速循环的基础和迁移向上进行从而产生在HS和IRS ^10（ 图1）终末分化。生长期的持续时间决定了头发的长度和依赖于基质细胞⁶的增殖和分化的能力。当高频进入退行期，在灯泡停止过境放大基质细胞增殖，凋亡和完全消退，而向上拉动DP直到它到达的高频^8,11非循环部分。在此回缩HF形成被称为上皮链，这是退行期的特征的临时结构，并且包含许多凋亡细胞。在小鼠中，退行期持续天3-4之间，并在第一毛发周期高度同步。当HF到达休止所有HFSCs变得静止。高频周期的不同阶段的特征还在于，由于到m在小鼠的皮肤的颜色变化elanin生产。从黑退行期期间生长期为深灰色期间皮肤的变化休止期^6,7,12,13时为粉红色。

图1：毛囊周期 。在HF由永久上部，并且经历了快速增长（生长期），破坏（退行期）和相对静止阶段或休息（静止期）的连续周期不断降低重塑，单车部分。 请点击此处查看大图版本这个数字。

维持HF南海初步确定使用追踪实验，以氚化胸苷，即透露，在HF的永久居住区就在SG ¹⁴下方慢骑自行车的标签滞留细胞（LRC）的人口。在HFSC进展表征揭示少量可用于从HF利基¹⁵鉴定和分离特定的SC标记。也许HFSCs富集的最佳标记是CD34，细胞表面标记也被确定为在人¹⁶造血SC标记。在这个CD34 ⁺人口两个不同的群体也被隔离的基础上整合α6表达式^2。另一个标志物是角蛋白15（K15），其在所述凸出区域中高度表达，具有CD34的表达共定位和K15启动子被用于定位和在转基因动物^15,17-19隔离HFSCs。在过去的十年中HFSCs和祖细胞的其它几个不同的种群也有报道驻留在HF ^17,20-27内。

HFSCs的另一个令人兴奋的是他们的皮肤修复的贡献。在正常情况下HFSCs补充HF和不参加IFE平衡的一部分。豪版本，以应对伤人，这些细胞退出他们的SC利基，并有助于重新填充IFE ^9。我们最近表明，删除小鼠促凋亡Sept4 /艺术基因显示CD34，K15和Sox9的⁺ HFSCs，这表明凋亡电阻的数量增加。 HFSCs从Sept4 /文理分离^{– / –}利用背皮荧光激活细胞分选（FACS），并有在CD34 ⁺和K15 ⁺ HFSCs的数目多于一个两倍。这些Sept4 /文理^{– / –} HFSCs 体外扩增和不仅引起了更多的菌落，但也能够承受更苛刻的条件下与对照相比^28。

作为具有HFSCs数目增加的结果，Sept4 /文理^{– / –}小鼠显著更快响应于皮肤切除损伤愈合。引人注目的是，Sept4 /艺术^{– / –}小鼠displayeDA大量从伤口床再生HFS和显著较小的疤痕。此外，对于XIAP（细胞凋亡的X连锁抑制 ​​剂），的文理生化靶，缺失的小鼠表现出受损的愈合^28。

我们的结果及其他实验室进行工作已经表明，HFSCs作为研究成人的SC的生物学和功能的理想模型。在这里，我们描述了用于浓缩和HFSCs并基于四种标志物的表达表皮角化细胞的分离方法：整合α6;整合β1;的Sca-1（对于表皮角化细胞的标记）和CD34。也可以使用K15-GFP报告鼠标¹⁹执行K15 ⁺ HFSCs的类似的隔离。