マウスの樹状細胞サブセットの単離のための効率的かつ高収率方法

「大きな星状（ギリシャデンドロン ）細胞」は、リンパ系器官¹に見られるような樹状細胞（DC）は、ほぼ40年前に発見されました。多くの研究は、DCが効果的にナイーブT細胞^2を刺激^することができる唯一の抗原提示細胞であることを示しています。これらの細胞の主要な機能は、抗原提示分子への取り込みおよび抗原の提示とその効率的な処理およびこれらのロードをです。マウスの脾臓において、DCは、形質従来のサブセットに分離することができます。形質DCはCD11cの低い発現とB220とのGr-1の高レベルによって特徴付けられます。彼らはまた、表面マーカーmPDCA1に対して陽性であると私は受容体9（TLR9）リガンドなどの通行料に応じて型インターフェロンを分泌します。従来のDCはCD11cのとMHCクラスII発現のために高いです。彼らはそのようなCD4、CD8α、DEC205、CDなどの表現型マーカーの表面発現に基づいて、三つの異なるサブセットに分割することができます11b及び（33D1抗体によって認識DCIR2、）樹状細胞阻害受容体2タンパク質^3,4。 CD8α ^順位のDCも、CDC1として知られているDEC205に陽性であるが、このようなCD11bおよび33D1などの骨髄性マーカーについて陰性です。また、CDC2呼ば^CD8αNegの DCは、33D1、CD11bおよびCD4陽性であるが、DEC205を欠いています。ダブルネガティブサブセット（CD4およびCD8αの両方のための、すなわち 、負）は、比較的まれで、DEC205および33D1のために負です。これは、少なくとも特徴づけられたサブセットであり^{、CD8αNegの} DCのあまり分化の形態であってもよいです。

様々なDCサブセットにおける表現型の違いはまた、in vivoでの機能を拡張します。 ^CD8αNegの DCは、高い食作用であり、主にCD4 T細胞³にMHCクラスIIを介して外因性抗原を提示すると考えられています。対照的に、CD8α ^順位 DCは、MHCクラスIの可溶性タンパク質抗原の提示のために特化されメカニズムに交差提示と呼ばれます。交差提示の結果は、これらのDC ⁵の活性化状態に依存し、細胞傷害性T細胞（CTL）または制御性T細胞を^{6 2,7}の開発の拡大につながることができます。感染アポトーシス細胞由来抗原の提示は、強力なCTL応答^9を誘導^するのに対し、主としてT細胞⁸の削 ​​除に抗DEC205抗体媒介送達の結果を用いて、CD8α ^順位 DCに抗原の標的。

ペプチド抗原の認識に加えて、哺乳動物の免疫系は、脂質と糖脂質抗原を認識するように進化してきました。これらの抗原は、種々の哺乳動物における関連する複数の形で存在するMHCクラスI様細胞表面タンパク質であるCD1分子によって提示されます。マウスでは、CD1dのと呼ばれる高度に保存されたCD1分子の単一型は、糖脂質抗原¹⁰のプレゼンテーションを担当しています。メジャーな CD1d /脂質複合体を認識するT細胞の集団は、インバリアントNKT細胞（iNKT細胞）と呼ばれます。これらの細胞は、多様^11が制限されているTCRβ鎖と対になっている不変のTCRα鎖からなる半不変T細胞受容体（TCR）を発現します。増殖し、活性化されたエフェクターT細胞になるように分化する必要があり、従来のT細胞とは異なり、iNKT細胞は、エフェクター集団として存在し、糖脂質、投与¹²後に迅速に対応を開始します。生理学的に関連する脂質抗原提示細胞の同定は、研究の活発な領域であり、例えば、B細胞、マクロファージ及び樹状細胞などのいくつかの異なる細胞型は、この機能を実行するために提案されています。しかし、DCのCD8α ^{順位サブセット}マウスiNKT細胞¹³およびCD8 T細胞の¹⁴の糖脂質媒介性クロスプライミングの取り込みおよび脂質抗原の提示を媒介する主要な細胞であることが実証されました。

別抗原提示細胞による抗原提示の効率を比較するためにove_content ">、直接的なアプローチは、ナイーブな宿主に抗原の等量でパルス精製APCの異なる種類を転送することである。このタイプの細胞移入実験は、多くの場合、免疫学的研究のために行われます。これらの細胞は、それらが全細胞¹⁵の2％未満を構成しているリンパ器官のような稀な集団が存在しかし、 エクスビボ抗原処理されたDCと転写研究を行うことは、困難である。ドナー動物におけるこれらの細胞の発達を強化することが必要です分離プロトコルの効率を増加させます。

それは、共通のpDC、CD8 ^POSおよびCD8 ^Negの DCサブセットの生成に必要とされるリンパ系および骨髄系共通前駆細胞、明示FMS関連受容体チロシンキナーゼ3（FLT-3）ことが知られています。 in vivoでのFlt-3リガンド（FLT-3L）投与、emigrat時に骨髄からのFlt-3を発現する前駆細胞のイオンは、末梢リンパ器官の増加播種およびそれらの成熟DCの子孫¹⁶の膨張を生じ、増加されます。 FLT-3の発現はB、TまたはNK細胞の分化経路へのコミットメントの間に失われます。したがって、最小限の変更は、FLT-3Lの投与の際に、これらの細胞で観察されます。 DC集団において同様の拡大はFLT-3L ^17,18の持続的な全身レベルを提供するための簡単で経済的な方法を提供するマウスのFlt-3Lを、分泌B16メラノーマ細胞株の注入によって生成された腫瘍を有するマウスで観察されます。このアプローチを使用して、我々は大幅その後の実験のために単離することができ、これらの細胞の収量を増加させる、マウス脾臓中のすべての通常のDCサブセットの拡大を刺激するのFlt-3Lを分泌B16黒色腫細胞の移植に基づくプロトコルを開発しました。 14日間皮下イムを次の – 私たちは常に10内にいることを見つけます総脾臓細胞の60％ – FLT-3分泌腫瘍のプランテーションは、マウス40を構成するDCの著しい富化と脾腫発症します。これらの脾臓から、異なるDCサブセットは、サブセット特異的な表現型マーカーを用いる標準的な市販の細胞精製キットを用いて高純度で単離することができます。