リボフラビンとUVライトと血小板製品の治療：高力価の細菌汚染に対する有効

1.細菌懸濁液の調製： 画線培養プレートから、無菌的に無菌の接種ループを介して適切な成長培地（ 表1）の100 mlを含む250 mlの滅菌ボトルに単一コロニーを接種します。 定期的成長のためにチェックする、1〜2日間適切な条件（ 表1）での軌道振盪インキュベーターにボトルを置きます。 140 RPMにシェーカー速度を設定します。 無菌的に23℃で20分間3000×gで2滅菌50mlコニカルチューブと遠心チューブに細菌懸濁液を移します。 上清を吸引除去し、滅菌ペプトン水15mlで各細菌ペレットを再懸濁します。必要に応じて渦。 1チューブ/容器内に浮遊細菌文化を結合します。 保存培養力価を決定するために、セクション4につき三連でストック培養物を力価。 4時までの2週間冷蔵77; 2°C必要になるまで。再タイター使用時の文化は、ステップ4.8を参照してください。 2.血小板製品の製造： 認定血液バンクでの標準的なアフェレーシスヒト血小板製品を収集します。 90〜360ミリリットルの容量と0.8 -3.8×10 6血小板/μlの濃度：血小板製剤は、次のコレクションの仕様を満たしている必要があります。 血小板製剤は、病原体低減のための前処理に2時間の最小値のため休養していることを確認してください。これら2時間攪拌することなく、血小板インキュベーターで22±2℃で製品を保管してください。 2時間後、血小板製剤は、血小板インキュベーターで22±2℃で撹拌されていることを確認。最大22時間後の収集のために製品を使用してください。 3ミリリットルの注射器を使用すると、血小板製剤のpH 22Cを測定するための2ミリリットルのサンプルを削除します。製品を確実にするために、血液ガス分析装置を使用して、pHを> 6.6有し。血液学的分析器を用いて血小板製剤の血小板濃度を測定するために、同じサンプルを使用してください。製品は0.80から3.8×10 6血小板/μlの回収濃度の要件を満たしていることを確認します。 視覚的に血小板製剤の渦を評価します。製品は「0」を有する場合、製品が廃棄される渦。 直接白色光源下で血小板バッグを持ち、簡単に血小板バッグを絞ります。視覚的に血小板サンプルの旋回パターンを観察します。以下のスケールを使用して製品をスコア。 注：2 – 正渦巻き：強いコントラストでバッグ全体を通して目に見える不均一性を渦巻きます。 1 – 中級渦巻き：一部の不均一性の可視が、唯一のいくつかの場所でとコントラストが低いです。 0 – 負渦巻き：前と血小板バッグを圧搾した後、残りの濁り均質性 3.リボフラビンとUVライトプロセス： トラン滅菌チューブドッキングデバイスを使用して、リボフラビンおよびUV光照明や収納袋に血小板製剤sfer。転送後、チューブシーラーを使用して空の血小板ユニット収集袋を取り外し、バイオハザード廃棄物として空の袋を捨てます。 その光保護外側ラップから原液リボフラビン、500μMの35ミリリットルの袋を取り出します。治療と収納袋の入口ライン上に無菌ドックリボフラビンキット。内容は血小板ユニットに排出できるようにします。 リボフラビンポーチ/治療およびリボフラビンポーチから設定保存用バッグを掛け、ゆっくりと治療と収納袋の外へとリボフラビンバッグに残留空気を発現します。血小板製剤の少量はまた、血小板製剤に任意の残留リボフラビンをすすぐためにリボフラビンの袋の中に表現されていることを確認します。リボフラビンおよび血小板ソリューションが戻って治療や収納袋に排出できるようにして、入口ラインをクランプ。空のリボフラビンバッグ私たちを削除チューブシーラーをるとバイオハザード廃棄物として空の袋を捨てます。 無菌ドック照明およびストレージ袋の入口ライン上にメスシリンジコネクタと6 "チューブライン。メスシリンジコネクタに（プランジャーを削除）を10 mlシリンジバレルを取り付けます。 無菌ピペットシリンジバレルに株式細菌の5ミリリットルを追加します。入口ラインのクランプを開き、細菌が血小板製剤に排出することができます。いくつかの血小板製品を10mlのシリンジバレルに逆流することを可能にすることによって、シリンジバレルをすすぎます。 10ミリリットルのシリンジバレルを削除します。 無菌的に30mLのシリンジを接続して、血小板製剤に混入されたストック・細菌を確実にするために、入口ポートを最低2回フラッシュします。製品が十分に混合された後、きれいな5〜10ミリリットル注射器を使用し、2ミリリットルの前処理サンプルを削除します。新しい注射器を使用すると、接種工程やサンプリングステップから導入された空気がないことを確認してください。 部4ごとの前処理試料を滴定。 処理及び貯蔵バッグから入口ラインを取り外し、製品の重量を量ります。 照明に製品を置き、標準血小板治療を開始するために、画面上のコマンドを実行します。 オペレータIDに入力します。 照明装置のプラテンにバッグを固定し、マウントします。 バーコードリーダーまたは手動入力キーパッドのいずれかを使用して照明装置にサンプルIDを入力します。 スキャンの製品タイプ。 石英クランプを閉じます。 照明装置は、自動的にエネルギーの6.24 J / mlにお届けします。典型的な処理時間は5〜10分かかります。 治療と収納袋のサンプル電球ラインにメスシリンジコネクタと6 "チューブライン治療無菌ドックの後。製品が十分に混合されていることを確認した後、5 mlシリンジを接続し、2ミリリットル後処理サンプルを削除します。 後処理SAMを滴定セクション4あたりPLE。 4.細菌力価前処理および後処理のサンプルの力価を推定し、各サンプルの終点連続希釈を行うために必要な5 mlの希釈チューブの適切な数を準備します。無菌ペプトン水1.8 mlを必要とチューブを埋めます。 力価が10倍連続希釈スキームを用いて、各サンプル。無菌的には、最初の希釈用チューブ（10 -1）に希釈していないサンプルから0.2ミリリットルを転送します。渦この希釈管と、次の希釈チューブに0.2ミリリットルを転送します。希釈液の必要数を介して段階希釈を続行します。 無菌的に転送各希釈液100μlを、適 ​​切な寒天プレート（ 表1）にメッキします。 滅菌細胞スプレッダーを使用して、均等に各寒天プレート上にサンプルを配布します。 （反転して、適切な条件でプレートをインキュベート<stroNG>定期的に成長するためのチェック1-2日間表1）。 30〜300個のコロニーを有するプレートを数えます。 300より大きいコロニーを含むプレートを（TNTC）をカウントするためには多すぎると考えられています。 30未満のコロニーを含むプレートを、定量限界（LOQ）以下であると考えられます。 各試験サンプルの力価を計算し、CFU / mlとして結果を記録。 CFU / mlのを計算するには、次の式を使用します。 最低希釈プレートにはコロニーが存在しない場合は、検出（LOD）の限界を計算するために、以下の式を使用します。 とここで： P中の粒子のNは=最低数（CFU）自信を持って検出することができroduct。 微生物が検出されないであろうと、Pは=確率。微生物を検出する95％の信頼性のため、Pは0.05を=。 ミリリットルで、V =総生産量プレートのV =ボリュームメッキ（ミリリットル）×希釈レベルネガティブコントロールのために、2つの寒天プレートのそれぞれの上に連続希釈のために使用されるペプトン水0.5mlをプレート。サンプルをテストするのと同じプレート型を使用します。裏返し、1~2日は、定期的に成長するためにチェックするために適切な条件でプレートをインキュベートします。 成長がいずれかの寒天プレート上で観察されている場合は、使用ペプトン水のボトルを廃棄しなければなりません。この研究の結果はまた、無効化されています。 陽性コントロール、再タイターを使用した細菌の保存培養のために。裏返し、1~2日は、定期的に成長するためにチェックするために適切な条件で培養します。力価は、レコードの1.0ログCFU / mlの±でなければなりません有効と見なされるための研究のために（1.5節を参照してください）​​株式価を編。