鼠标颈淋巴结高频超声成像

在这个协议证明所有动物的程序进行了审查，并根据协议11-0412和14-0514批准西弗吉尼亚大学动物护理和使用委员会，并按照NIH指南中列出的照顾和使用的原则和程序进行动物。 1.动物的制备麻醉一个单一的鼠标使用3％异氟烷与1.5升/分钟100％的氧气混合感应室。除去从吸气室和地点的动物在预热至40℃之间，37-42℃（ 图2A）维护的成像平台上仰卧位置。由于缺乏响应脚趾捏麻醉确认。 连接到麻醉系统在鼻锥内将鼠标吻。应用麻醉维持稳态镇静（1.5％异氟烷以1.5升/分钟100％的氧气混合）。 敷眼润滑剂的每只眼睛以防止dryinG。应用电极凝胶到电极，并使用磁带的每个的四个爪固定到相应的电极上。电极焊盘将发送动物的心电图，以在成像系统，以允许监测心脏速率和呼吸速率。润滑和插入直肠温度探头进行连续监测体温。正常小鼠体温36.9℃。 1-2℃的变化是正常的，而在麻醉下。 使用脱毛霜从鼠标的颈部取下毛皮。冲洗颈部用清水浸泡过的纱布去除毛发和多余的脱毛膏。任选地，使用的脱毛霜额外的应用以除去任何剩余的体毛（ 图2B）。 2.识别和图像采集鼠颈淋巴结使用HFUS 首先，涂上一层温暖的超声波凝胶的颈部区域缺乏皮草。使用凝胶的最佳图像自由主义的应用质量（ 图2C）。避免引入气泡在应用过程中的凝胶，它可以与超声成像造成干扰。 调整成像平台20-30°使鼠标定位，微微隆起的头部。这个位置有助于确保最佳呼吸速率为鼠标。放置40兆赫传感器横向于所述安装系统和小心降低，直到换能器扫描头的前浸在超声凝胶（ 图2C）。 注意：一定不要把过多的压力到鼠标的脖子，因为它可能会导致不必要的呼吸窘迫。此外，它是有帮助的用于成像具有换能器和鼠标之间的凝胶的缓冲。 淋巴结B型成像与检测： 利用计算机控制HFUS采集软件，调节亮度（B-）模式设置以下参数：增益22分贝，深度10.00毫米，宽14.08毫米。 注意：这些设置建议的出发点，可能需要略微调整为不同的应用程序之间的最佳图像采集。周围的高回声区域内观察正常宫颈淋巴结肿大为附近的皮肤表面椭圆形低回声结构。的患病淋巴结的外观可以模型之间变化。为了系统图像颈部区域内的所有淋巴结使用以下步骤： 使用Y轴扫描颈部在颅尾鳍方式朝向胸部区域。使用X轴居中图像。 确定主要景点：口腔，舌头和甲状腺（ 图3A，B和C，分别）;倾斜成像平台水平调节鼠标颈的腹面，使得颈部两侧，即使在B模式图像显示。倾侧量取决于每个单独小鼠的生理学。 </l我> 对整个颈部区域的三维扫描从口腔/舌区域甲状腺，以图淋巴结和关联的地标整个颈部。 找到舌头/口腔区域（ 图3A），并注意在Y尺度数值位置。 找到甲状腺（ 图3C），并注意在Y尺度数值位置。 计算（2.4.1）和（2.4.2）所获得的值之间的差，以确定被成像颈部区域的总长度在毫米。 使用Y旋钮居中传感器上所确定的总长度的中点。 按“3D”。进入总长度。为3D的步长，使用0.076毫米以获取图像系列堆栈为整个颈部区域。 一旦扫描完成后，选择脖子的右侧或左侧和中心的传感器感兴趣的个人淋巴结上，然后抬起40兆赫传感器关闭鼠标。删除40 MHz的换能器和更换50兆赫的Microscan换能器（也处于横向位置​​），以获得更高分辨率的图像。补充鼠标颈部超声凝胶，降低了50兆赫传感器到超声波凝胶。 3D能量多普勒显像行为3D扫描与能量多普勒到驴的体积和个别颈部淋巴结如下血管： 按下电源按钮系统键盘上获得权力和多普勒调整以下供电模式设置：PRF 4千赫，多普勒获得34分贝，2D增益调整30 dB的深度5.00毫米，宽4.73毫米。注：如前，这些设置是一个建议的出发点，并根据需要在各种型号的最佳图像采集可被修改。 找到颅点最感兴趣的淋巴结，并注意在Y刻度的位置。 找到相同的节点和票据的最尾端点在Y刻度的位置。 计算距离差来确定淋巴结的总长度（见步骤2.4.3）。 围绕所确定的总长度的中点的换能器，使用Y标尺位置。 按“3D”，进入总淋巴结长度。使用0.051毫米为步长。 注意：由于该换能器到胸部区域的附近，在50兆赫传感器可能导致不稳定的多普勒图像由于检测正常呼吸运动。这可以通过使用“呼吸门控”选项中的“生理”标签下被淘汰。 与周围的黄色框指定的区域由能量多普勒进行分析，并选择“3D扫描”，以获取图像选定的淋巴结。提高换能器关闭鼠标的，并将其移动到颈部的相对侧。降低换能器上的鼠标，重复上述对伊马的步骤在颈部的这一边戈淋巴结。 保存图像集进行后续分析。 3.颈淋巴结活检选择用于活检所需淋巴结和保持HFUS成像的50兆赫传感器。选择了最大可见颈部淋巴结在小鼠颈部的每一侧。淋巴结肿大通常指示炎症反应，因此这样的节点是理想候选活检。 注意：我们已经发现这是很困难的，进行活组织切片检查的颈部淋巴结小于10 立方毫米。 通过将1ml注射器与一个附加的27克，0.5英寸针头插入注射器座准备的针头和注射器活检。调整针保持器以定向针90°到鼠标颈部（ 图4A）。 通过升高整个鼠标平台到针的水平制备。通过去除三维电机和切换到一个较高platf实现这一ORM，或者将合适的高度了坚实的对象下所提供的短期平台。使用塑料离心管架用于此目的。如果必要，可旋转平台180°，以位于所述颈部的侧相对的针头装置活检节点。 通过选择“首选项”，然后通过选择“最大和扩展缓冲区”调整收购设置。放大的视场，以8.00毫米，宽9.73毫米的深度。使用屏幕按键转盘转动的导针。导针将预测在屏幕上的针的路径，并允许用户排队感兴趣的淋巴结中的正确位置活检。 确保淋巴结由定心淋巴结中的中间或稍中心在屏幕（ 图4B）左侧恒定地保持在图。以获得该过程的整个电影回放，按系统键盘上预触发开始活检之前。 调整针支架，直到针尖进入视野并接触皮肤（ 图4B）。推进针坚定，快速推穿刺皮肤。继续推进针，直到针尖也刺穿胶囊（ 图4C），并且是髓质（ 图4D）中可见。 一旦针头被适当地定位在节点内，轻轻拉动针筒柱塞背面的200-300微升界线之间进行活检（ 图4D和4E）。需要注意的是活检材料通常不是注射器内可见。 轻轻地取出从鼠标的脖子针。驱逐注射器内容到1.5 ml离心管。从注射器除去针，留在管中的针。收集1毫升活检培养基（从等分试样，分离了库存源）具有相同的注射器，然后重新连接针的注射器，同时保持在第针Ë管。 由排出所述活检介质插入管冲洗注射器和针头与活检介质。 注意：不要拉回到了活塞，而针被安装在切片后的任何一点。这减少了损失的活检材料的风险由于小样本大小。 确认通过组织学装置（ 图4F）淋巴结内容和通过另外的方法（组织化学，流式细胞术， 等 ）在适当分析。 一旦活检完成后，关闭麻醉和删除直肠温度探头。从小鼠中取出多余的超声凝胶用纱布并从每个爪子取出磁带。 从成像平台移开鼠标并返回到笼子。从活检部位出血极少可能会发生，但是这没有停止干预。监测恢复过程中鼠标，直到充分的活动重新开始。 4.图像颈淋巴结分析<lI>在超声的软件，选择图像进行分析，然后导航到“图像处理”选项卡。选择“加载到3D”。 在左上角选择“3D重建图像”，点击“显示单一窗口”按钮。使用变焦功能，如果需要的放大图像。切换“显示布局”，以仅在B模式，这从图中移除功率多普勒叠加查看图像。这使得更容易地看到在随后的3-D分析的淋巴结的边缘。滚动图像系列以定位淋巴结的开头。 要外接淋巴结，定位到“3D设置”选项卡。选择“音量”，那么“开始”按钮旁边的“水货”。 通过滚动周围绘制单个图像中感兴趣的区域轮廓。继续，直到包括整个淋巴结图像标记。选择“完成”完成分析。 在图像的底部，3D体积和％血管将自动显示。 注：3D体积对应于淋巴结体积，以及百分之血管表示淋巴结阳性用于通过功率多普勒血流量的百分比。 切换“显示布局”，以查看电源多普勒成像为B-模式图像上叠加。在表面视图观察感兴趣体积区域的净图。在标记的图像文件（TIF）格式或三维扫描图像导出为动画（.AVI）继续使用。