Molti nematodi sono associati con gli insetti, e le loro interazioni ospite variano da vantaggioso per dannosa. Qui, ci concentriamo su un gruppo di nematodi che sono patogeni di insetti, noto anche come nematodi entomopatogeni (o EPN). Due famiglie di nematodi appartengono a questo gruppo di nematodi: Steinernematidae e Heterorhabditidae ^11,13. Il loro effetto patogeno è infatti conferita dalla loro interazione con anaerobi facoltativi batteri enterici (batteri Xenorhabdus associano con steinernematids e batteri Photorhabdus associare a heterorhabditids) ^2. I batteri sono vectored da un host ad un altro insetto da parte l'unica tappa libero nematode vita, il giovane infettivo terzo stadio (noto anche come dauer giovanile, giovanile infettiva o IJ), che vive nel terreno. Una volta dentro l'insetto, i nematodi rilasciano i batteri nella emolinfa dell'insetto, che uccidono l'insetto ospite da una massiccia setticemia. I batteri anchedegradare i tessuti dell'insetto e diventano fonte di cibo dei nematodi ', consentendo loro di maturare e moltiplicarsi. Di solito, una o due generazioni di nematodi adulti sono prodotte all'interno del cadavere insetto. La progenie degli ultimi riassocia generazione adulta con poche cellule batteriche in più specializzarsi modo che il loro precedente rapporto nutrizionale, e coltivare queste cellule nei loro intestini mentre si muovono fuori dalla carcassa insetti nel terreno dove potranno attendere un altro insetto di parassitare ^6,11,14 (Figura 1).

Sin dalla loro scoperta nel 1927, EPN sono stati considerati importanti alternative ai pesticidi chimici in quanto possono parassitare una vasta gamma di insetti che sono parassiti agricoli ^3,4,5. Tuttavia, negli ultimi due decenni, questi nematodi e dei loro batteri simbionti sono stati riconosciuti come sistema modello malleabile per studiare aspetti biologici, ecologici ed evolutivi di ospite-microbo interactions ^14.

L'obiettivo di questa presentazione è quello di mostrare i metodi e le tecniche più comunemente utilizzate per il campionamento del suolo e l'isolamento di EPN. Una varietà di strumenti è disponibile e può essere utilizzato per raccogliere campioni di terreno, tra cui: defittonatrici suolo, cazzuole, trivelle, trivelle, tubi di campionamento, pale a mano, tra gli altri (Figura 2).

A seconda dello scopo dello studio, due strategie di campionamento possono essere considerati: a) stratificato, b) campionamento casuale (Figura 3). Il campionamento stratificato è solitamente utilizzato come parte di uno studio intensivo in una zona specifica o demarked in un determinato periodo di tempo. In generale, un transetto è demarked e campioni di suolo sono presi a intervalli stabiliti nel transetto per un periodo di tempo (Figura 3A) ^15. Il campionamento casuale viene generalmente impiegato quando concentrandosi su una vasta area. Questa strategia di campionamento è stato utilizzato per studiare la diversità di EPN fROM una vasta area geografica o regione (Figura 3B) ^12. Una serie di fattori può essere considerato in funzione del focus dello studio tra cui una vasta gamma di altezze, texture del suolo e degli habitat (ad es., Campi coltivati, boschi, pascoli, parchi, spiagge, aree ripariali, ecc.)

Mostriamo la tecnica dell'insetto adescamento, che è stato originariamente descritto da biancheria da letto e Akhurst ¹ e rappresenta un semplice e selettivo alternativa per il recupero EPN da campioni di suolo. Questa è una procedura selettiva che si basa sul presupposto che i nematodi (fase IJ) saranno attratti a un host insetto e parassitano esso. Questa tecnica può anche essere considerato per l'isolamento di altri patogeni insetti quali funghi e batteri ^8,10.

Abbiamo anche dimostrare la tecnica trappola bianco modificato, che viene utilizzato per il recupero nematode progenie di insetti infetti padroni di casa ^7,14. Si tratta di un sforzo incontratohod che offre il vantaggio di recuperare un 'clean' nematode progenie priva di detriti dai cadaveri di insetti degradanti.

Infine, le tecniche descritte ed illustrate in questo articolo corrispondono a quelli concepiti e / o eseguite nel nostro laboratorio così come quelli descritti da vari colleghi e collaboratori.