細胞ベースのELISAアッセイを使用して、HIV-1エンベロープ糖タンパク質三量体の構造評価

三量体ウイルスエンベロープ糖タンパク質（Envの）によって媒介されるヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）のエントリは、感染サイクルの第一段階である。ビリオンの表面に提示のみさらさウイルス抗原なので、Envの三量体は、中和および非中和抗体を誘発する。このように、ワクチンの免疫原の設計のための興味深い候補を表わす。しかし、可溶性または組換え形態におけるのEnvを用いたワクチン接種試験は最も主要なHIV-1に対する最小限の有効性応答を誘発し^1-3を分離^します。それにもかかわらず、RV144ワクチン臨床試験⁴で観察された部分的な有効性は、免疫原候補として、HIV-1のEnvに興味をリニューアルしました。これは、ワクチン誘発抗-ENV抗体はSIVとHIV ^5挑戦に対する保護のある程度を生成するのに十分であったことを記述した最近の研究によって確証された。

小胞体内で合成された後、Envのglycoprote前駆体のgp160に、ウィルス融合プロセスを燃料する能力にとって重要なさまざまな翻訳後修飾を受ける。のEnv前駆体は、gp120-gp41の ​​リエゾンを維持し非共有相互作用で、その細胞質外gp120およびgp41の ​​膜貫通サブユニット^6-10に切断される前に、三量体で適切に関連付ける倍なければなりません。感染した細胞の機構も大きく、その総質量^11,12の約​​50％を占めたEnvをグリコシル化する責任があります。良い異なるコンホメーションを理解することの重要性を強調し、Envのが適応し、それ以外の場合は^15〜19を暴露される特定の高度に免疫原性エピトープを非表示にすることを可能にすると考えられている準安定性を提供しながら、得られた複合体構造は、Envのは^13,14立体構造的に柔軟であることを可能にするネイティブのEnv三量体によってサンプリング。

今日までに、いくつかの技術が開発され、首尾よくEnvのコンホメーションchのを研究するために使用されているアンジェス。しかし、それらは多くの場合、特定のEnvコンテキストに限定されるものでは、その限界が異なります。例えば、表面プラズモン共鳴またはコンフォメーション特異的モノクローナル抗体を用いた免疫沈降アッセイ（mAb）は、どちらかは、それらの三量体形態^20,21からの免疫遺伝学的に異なることが知られている単量体の可溶性または可溶化のEnv分子に依存している。最近の研究ではまた、切断は主に抗体^14,22,23を非中和により認識されるエピトープの露出をもたらしたEnvのコンフォメーションに影響を与えることを示唆している。

ここでは詳細にcellularly発現さのEnv三量体^18,24-26のコンフォメーションの迅速かつ容易な決定を可能にする方法が記載されている。ヒトの付着性細胞株におけるのEnvの一過性トランスフェクション後のEnv特異的抗体の結合は、単純な化学発光反応を用いて検出される。この技術は、コンフォメーションdepenの立体配座優先性を特徴付けるために使用することができる凹み抗体。したがって、このアッセイは、堅牢で柔軟性の高い検出方法を提供する。