Малый Порядок громкости для концентрации вируса из воды

Человека кишечные вирусы являются важными возбудителями заболеваний, переносимых водой ^1-3, но, как правило, присутствуют в небольших количествах в загрязненных вод окружающей среды, что делает их обнаружение трудно без концентрации. Процедуры, используемые, чтобы сконцентрироваться вирусы, как правило, включать в себя стадию фильтрации с последующим элюированием фильтра, и вторичную концентрацию фильтра элюата. Общая процедура фильтрации основан на использовании заряженных мембран, таких как электроположительных фильтров (недавно рассмотренных в ^4,5). Эти фильтры полагаться на захвате вирусы, взвешенные в воде, используя электростатические взаимодействия между поверхностью фильтра (положительно заряженных) и целевых вирусных частиц (отрицательно заряженных). Два электроположительные фильтры, которые имеются в продаже полагаться на эту технологию, стекло / целлюлоза и нано-оксид алюминия / фильтры из стекловолокна. Стоимость фильтр стекло / целлюлозу до 10 раз больше, чем / стекловолокна нано-оксида алюминия, которые ограничивают использование стеклянной / CEllulose фильтры для рутинного мониторинга вируса. Недавние исследования пришли к выводу, различия являются номинальными между этими двумя фильтрами в восстановлении энтеровирусов из воды в окружающей среде ^6,7, оправдывая использование более дешевой альтернативой фильтра. Другие опции фильтра, такие как электроотрицательных и стекло ваты фильтров были изучены, однако, они либо требуют предварительной обработки исходной воды (электроотрицательные фильтров) или нет в продаже (стекло вата фильтры). Разработка процедур концентрации вируса в основном сосредоточена на оптимизации методов первичных концентрации (фильтры), чтобы улучшить вирусов извлечения из воды. Тем не менее, процедуры вторичные концентрации, которые снижают объем элюента обычно от 1 л до миллилитр объемы, также могут оказать существенное влияние на вирус извлечения ^8.

Вторичный концентрации кишечных вирусов, как правило, зависит от флокулянта, например, некоторых видов мясного экстракта (органической floccuтельства) или обезжиренное молоко флокуляции ^9-12, чтобы удалить вирусные частицы с поверхности фильтра. Недавно одна процедура вторичного содержание мясного экстракта с использованием в сочетании с добавлением целит (мелких частиц) показал перспективы для восстановления аденовируса, энтеровирус, и Norovirus ^8,13,14. Целит концентрации работает под тем же принципам, что входили в органический метод флокуляции в этом вирусных частиц прикрепляются и освобождаются от частиц (хлопьев или целит) путем изменения рН раствора суспензии. Сравнения между этими двумя вторичными методами концентрации были оценены в восстановлении шипами аденовируса (ADV) типов 40 и 41 ^8. Это исследование показало, что две вторичные методы концентрации были статистически похожи восстановления аденовирусов. Тем не менее, метод органического флокул требует 30 мин. инкубации при рН 3,5, в то время как технология целит требует более короткого инкубации (10 мин) при рН 4,0. Органический flocculatионов и требует использования дорогостоящего лабораторного оборудования (центрифуг), чтобы собрать частицы хлопьев при концентрации третичного, техника целит в отличие использует только основной лабораторное оборудование (вакуумной фильтрации), чтобы отделить целит частиц из суспензии.

Определенные комбинации фильтров и вторичных методов элюирования может также повлиять на вирусные восстановления. Один исследование показало, что определенные комбинации первичных (электроположительных фильтров) и вторичных методов концентрации (целит или органический флокуляции) оказали значительное влияние на восстановление аденовируса ^13. Эти данные свидетельствуют о том, что оптимизация требуется для того, чтобы оптимально восстановить целевой вирус из данного водного матрицы при использовании этих методов. Оптимизация затрат времени, трудоемкий процесс многие исследователи активно избегают, так как многочисленные переменные будут оценены (тип фильтра / бренда, рН раствора элюции, целит / органического флокуляции).

Для этого ˘STudy, была разработана процедура, чтобы определить оптимальные условия для концентрации вируса из воды с помощью шипами аденовируса человека штаммов 40 и 41. По-видимому, так как каждый тип вируса отображает уникальный капсида морфологию и удельную капсида заряд, протоколы концентрации возможно, должны быть оптимизированы для каждого вируса цели в целях достижения оптимального вирусного выздоровления. Это исследование представляет собой подход к AdV 40 и 41 концентрирования: 1) оценка вирусных извлечения в водопроводной воде с использованием электроположительных диски фильтра с последующим 2) оценка установленном органического метода флокуляции по сравнению с техникой целит в качестве вторичного концентрации и 3) оценки элюции буфера для высшего концентрации.