と陽電子放射断層撮影法を用いた非侵襲的イメージングとリビングラットにおける脳虚血の分析¹⁸ F-FDG

動物の取り扱いと彼らとすべての実験は、厳密にノートルダム大学の制度的動物実験委員会（プロトコル番号14から086）によって承認されたプロトコールに従って実施した。 1.動物動物とストロークの開始：すべての脳卒中研究のためのグラム220との間に、270の重さを使用雄Sprague Dawleyラット。 ノーズコーンを用いて2.5％イソフルラン（100％O 2中の2 L /分）を用いてラットを麻酔。 加熱パッド上に背側横臥位で動物を置きます。前足ダウンテープ。 首のventralsurfaceを剃る。準備の10％プロビドンのヨウ素溶液に続いて70％のEtOHで剃っエリア。 滅菌機器は、この手順のために使用されます。手袋は、動物の準備後に交換されている。無菌の先端技術が採用されている。 はさみを使用して、気管の右側に、気管に0.5cmに2〜2.5センチメートル切開を平行にする。鈍いdissectioの使い方n個の頸動脈を探します。 血管を視覚化するために開創を使用してください。総頸動脈（CCA）上にマイクロクランプを置きます。 外頸動脈（ECA）と内頸動脈（ICA）となる最初の分岐点の位置を確認します。そのような後頭動脈などのECAに添付小さい枝を、焼灼する。 4-0絹縫合糸で甲状腺動脈への分岐の近くにECAを結紮。縫合糸は、縫合糸を保持するために止血剤を有効にするには、余分な長さを有している必要があります。 縫合糸（頭側）上記のECAを焼灼。止血と縫合糸をクランプするには、尾側ECAを引き出し、それはCCAと平行になる。 ICAを見つけて、この動脈を閉塞するために、別のマイクロクランプを使用しています。 小さな春のはさみを使用してECAに小さな穴を作る。 ECAにオクルダーを挿入し、血液の流れを防止するために閉塞器の周りに縫合糸を結ぶ。 ICA上のマイクロクランプを外し、抵抗が感じられるまで、閉塞器を進める。 ICAとしないpterygopalatin動脈に閉塞器の進歩を確認してください。閉塞器をスムーズに進める必要があり、閉塞器が適切に配置されている場合、白先端が見えないようにしてください。 CCAからマイクロクランプを取り外します。余分な閉塞器または縫合糸をカットします。 皮膚切開を閉じるために9ミリメートルオートクリップを配置。 麻酔から動物を削除し、動物が目覚めることができます。 2時間後： イソフルランでラットを麻酔。 創傷クリップを外します。 閉塞器の終わりを見つけて、閉塞器の白い先端が縫合糸に接触するまで、ゆっくりと引いて、中大脳動脈から取り外します。すべての道からそれを引っ張らないでください、これは出血の原因となります。 切開創傷クリップを交換してください。 麻酔から動物を削除し、動物が目覚めることができます。 2.画像​​取得 3 PETとCT Sを実行します各ラットのための缶。 18 F-FDGの取り込みのためのベースラインを提供するために、1〜2日脳卒中を誘発する前に、事前にスキャンしてください。再灌流が（まだ動物における閉塞物の画像）が実行される前に、脳卒中後の各ラット1.5時間をスキャンします。脳卒中損傷による脳組織の損傷を定量化するために各ラットの26時間後のストローク（24時間後の再灌流）をスキャンする。 注：原稿の残りの部分で述べた24時間の時点でラットをスキャンした後の再灌流時間を指す。 麻酔チャンバー内で2.5％イソフルランガス下でラットを麻酔し。 ラットの尾静脈に18 F-デオキシグルコース（FDG）（200μlの総容量）の約500μCiのを注入。 1時間待ってください。 ノーズコーンイソフルラン麻酔下で、標準的なラットベッドの上で麻酔したラットを置きます。水平用ラットの鼻とラットのベッドの端の間にmm単位で測定距離がオフセット。 3.画像取得オープンAlbira Suiteの SOFtware。 買を選択します。 新しい研究に名前を付けます。 PETまたはSPECTの下で選択> PETプロトコルの追加]をクリックします。 [追加]をクリックします。 CT下>を選択CTプロトコルを追加]をクリックします。 [追加]をクリックします。 PET下の初期水平位置の下に数字をクリックします。ラットの鼻とラットのベッドの前の間にmm単位で測定された距離に設定数。 CTのために繰り返します。 ラットに従うことを条件として設定し、グラムで体重を入力してください。 FDGに化合物を設定してください。 注入時間と注入日付と投与量を設定。 スタートスタディ ] ボタンをクリックします。 注：PET CTスキャンが完了すると、データは自動的に保存される。 Albiraリコンストラクタを開きます。 チャン最後の10またはすべてのGE 保留 。 スキャンファイル名を選択します。 [追加]をクリックします。 スタート復興をクリックします。注：ファイルがマイクロPET形式で保存されます。 4.画像解析 W.シファー脳アトラスと一緒にPMOD分析ソフトウェアを用いて画像解析を行う。 オープンPMOD>フュージョン 。 画面の上部にCoRegistration前処理 ] タブに移動します。 画面中央部の負荷リファレンス ] ドロップダウンメニューを開き、NifTIを選択します。 Cに移動します//PMOD3.2/resources/templates/usertemplatesを 。 ラット（W.Schiffer）を選択し-FDG.nii、[開く]をクリックします。 画面の右側の負荷入力 ] ドロップダウンメニューを開き、 マイクロPETを選択します。希望に移動しますマイクロPETファイル。それを選択し、[開く]をクリックします。 画面上部のマニュアルCoRegistration]タブに移動します。 右（Reslicing）のタブの真ん中グループ内の4番目のタブを選択します。 注：2つのボタンがマイクロPETスキャンに表示されます。 マイクロPETスキャンを移動するためにマイクロPETスキャンと満たされた白い長方形を回転させるために開いた白い長方形を使用してください。 2つのスキャンを合わせます。これを行うために、脳モデルとマイクロPETスキャンを一致させるために使用することができるハーダー腺、上部および後部脳の機能のようなランドマークを見つける。それは脳アトラス（W.シファー）で、最大一致するまで続いて、マイクロPETスキャンを調整します。 注：例えば、ハーダー腺はマイクロPETスキャンおよび脳アトラス（W.シファー）の両方で明るく表示され、位置合わせのための基準として使用することができる。 必要に応じて、マイクロPETは冠状ビューで180°をスキャン回転させ、目で有意にスキャンを上げる他のマイナーな向きの変更に伴い、電子矢状ビュー、。 画面の上部にあるフルスクリーンフュージョン（のVOI）タブに移動します。 画面右上のソースAを選択します。 ページの下部にある[テンプレート]> [アトラスに移動します。 ドロップダウンメニューからラット（W.シファー）を選択します。 注： アトラスは脳アトラス（W.シファー）の上に重ねて表示されなければならない手動CoRegistrationタブに（オプション）リターン。アトラスは、マイクロPETスキャンおよび脳アトラス（W.シファー）を整列させるために使用することができる。整列した後、 フルスクリーンフュージョン（のVOI）タブに戻ります 。テンプレートは、脳のセクションでは、VIO統計のために測定されるかを示す、脳に表示されます。 画面右上のソースBを選択します。 トップRIGHでVOI統計のボタンを選択します画面のトン。 注：スプレッドシートが表示されます。 [保存]を選択します。 注：[VOI統計]ウィンドウが表示されるように記述します。 システムをファイルに保存]を選択します。 注：PMOD（保存）：コンポーネントウィンドウが表示されます]を選択します 。 ファイル名フィールドで、目的のファイル名を入力します。 [保存]を選択します。 は、Microsoft Office Excel 2010を使用してデータ分析を実行。 Excelを起動。 [ファイル]> [開く]を選択します。 すべてのファイルにすべてのExcelファイルからファイルの種類を変更します。 保存されたVIOSTATファイルに移動します。目的のファイルを選択します。 注：インポートウィザードが表示されます。 [完了]を選択します。 VOISTATファイル上のMac、ダブルクリックを使用している場合、それは、Excelファイルとして直接開きます。 フィールドVoiName（Rを含む列を選択しますegion）。情報をコピーし、新しいExcelファイルに貼り付けます。 フィールドを含む列を選択し[1/1]平均し、。情報をコピーし、新しいExcelファイルに貼り付けます。 すべてVOISTATファイルに対して、この手順を繰り返します。 各データセットのための新しいタブを開始します。 最初のタブに戻ります。新しいセルを選択します。左脳によって脳の右側の値を割ることにより脳切片の左側脳切片の右側の比率を計算する。脳の右側に属する脳切片は、脳の左側に属するセクションの前にリストされている。すべての脳切片のためにこれを繰り返します。 新しいセルを選択します。すべてのマウス間で以前に計算された比率のそれぞれの平均値を計算するAVERAGE関数を使用します。 新しいセルを選択します。 STDEV関数を使用して、私を分割して、各脳切片のSEMを計算マウスの数の平方根によってトン。 各データセットのためにこれを繰り返します。 5.画像の可視化 PMOD分析ソフトウェアを用いて解析するファイル形式に画像を変換する。 オープンPMOD>ビュー 。 画面の上部にある[表示 ] タブに移動します。 画面の右側にあるロード ] ドロップダウンメニューを開き、 マイクロPETを選択します。希望マイクロPETやCTファイルに移動します。それを選択し、[開く]を押します。 画面の右側にある[保存 ] ドロップダウンメニューを開き、 分析を選択します。所望の目的地に移動します。 [ファイル名 ] フィールドに目的の名前を入力します。 [保存]を選択します。 VolViewイメージングソフトウェアを用いて画像シーケンスを作成する。 オープンVolView。 ファイルを開く]を選択し</stroNG>画面の左側にある。 所望のスキャン用のCTデータファイルの分析バージョンに移動します。それを選択し、[開く]を押します。 注：オープンファイルウィザードが表示されます。 ポップアップウィンドウで[次へ]を押してデフォルト設定を使用します。 画面の左側にあるプラグイン ] タブを選択します。 プラグインのドロップダウンメニューを開き、 ユーティリティを選択>ボリュームをマージします 。 チェックを外し再スケールコンポーネント 。 割り当てセカンド入力を選択。 同じスキャン用のマイクロPETデータファイルの分析バージョンに移動します。それを選択し、[開く]を押します。 注： オープンファイルウィザードが表示されます。 各画面で[次へ]を押してデフォルト設定を使用します。 注：マイクロPETスキャンはCTスキャン上にオーバーレイ表示されます。 カラー/不透明度の設定を選択します画面の左側のsのタブ。 画面右下のコンポーネントのドロップダウンメニューを開きます。 1を選択します。 注：これはCTスキャンは、以下の方向性によって影響を受ける唯一のイメージであることを保証します。 スカラカラーマッピング ] セクションで、中点を選択します。スライダーエリアの外にドラッグして、それを削除します。 左のポイントを選択します。 注： カラーピッカーウィンドウが表示されます。 黒に点の色を変更します。 右のポイントを選択します。 注： カラーピッカーウィンドウが表示されます。 白に点の色を変更します。 スカラ不透明度のマッピング ] セクションで、ボックス内の任意の場所をクリックすることでポイントを追加。 CT画像のみラットの骨格が表示されるまでのセクションを調整します。 シェーディングを有効にする ] にチェックマーク。 Rを選択画面の左側のeviewタブ。 72にフレーム数を変更します。 360にX回転を変更します。 作成]を選択します。 所望の目的地に移動します。空のスペースを右クリックして画像を保存するための新しいフォルダを作成し、[新規]> [フォルダ]を選択する。 [ファイル名 ] フィールドに目的の名前を入力します。 [保存]を選択します。 注： フレームサイズのウィンドウが表示されます。 [OK]を選択します。 Volview画像を生成します。それが終了すると、ウィンドウが示すメッセージが表示されます"あなたの映画が正常に作成された！」[OK]を選択します。 カラー/不透明度の設定 ]タブに戻ります。 成分重量（s）は 、成分1スライダーを調整下のでバリューを有する0の電子。 注：のみマイクロPETスキャンが表示されます。 繰り返しは、第2の画像シーケンスを作成するには5.2.21-28を繰り返します 。 カラー/不透明度の設定 ]タブに戻ります。 それは0の値を持っているように、 コンポーネント重量（S）の下では、成分2のためのスライダーを調整します。 注：のみのCTスキャンが表示されます。 繰り返して第3の画像シーケンスを作成する5.2.21-28を繰り返します 。 ImageJソフトウェアを使用して、（ビデオに示されている）は、回転のムービーを生成します。 ImageJのを開きます。 [ファイル]> [インポート]> [イメージシーケンスを選択します。 プリスキャンのための唯一のCTデータを表示する画像を含むファイルに移動します。最初の画像を選択し、[選択]を押します。 注： シーケンスオプション]ウィンドウが表示されます。 [OK]を選択します。 [ファイル＆＃62。インポート>イメージシーケンス。 プリスキャンのための唯一のマイクロPETデータを表示画像を含むファイルに移動します。最初の画像を選択し、[選択]を押します。 注： シーケンスオプション]ウィンドウが表示されます。 [OK]を選択します。 [ファイル]> [インポート]> [イメージシーケンスを選択します。 事前スキャンCTやマイクロPETデータの両方を表示する画像を含むファイルに移動します。最初の画像を選択し、[選択]を押します。 注：シーケンスオプション]ウィンドウが表示されます。 [OK]を選択します。 画像>スタック>ツールを選択します>コンバイン 。 注： コンバイナウィンドウが表示されます。 STACK1ドロップダウンメニューを選択します。 CTデータが含まれているスタックを選択します。 Stack2ドロップダウンメニューを選択します。ミが含まれているスタックを選択croPETデータ。 [OK]を選択します。 注：両方のスキャンを持つ新しいスタックが表示されます。 画像>スタック>ツールを選択します>コンバイン 。 注： コンバイナウィンドウが表示されます。 STACK1ドロップダウンメニューを選択します。組み合わせたスタックを含むスタックを選択します。 Stack2ドロップダウンメニューを選択します。 CTデータとマイクロPETデータの両方を含むスタックを選択します。 [OK]を選択します。 注：すべての3つのスキャンを持つ新しいスタックが表示されます。 オープン組み合わせたスタックを保管してください。繰り返します1.5時間後にスキャンし、24時間後にスキャン画像スタック用5.3.2-16を繰り返します 。 画像>スタック>ツールを選択します>コンバイン 。 注：コンバイナウィンドウが表示されます。 STACK1ドロップダウンメニューを選択します。すべてのプリスキャンデータが含まれているスタックを選択します。 Stack2を選択</st栄>ドロップダウンメニュー。すべての1.5時間後にスキャンデータが含まれているスタックを選択します。 垂直組み合わせを確認してください。 [OK]を選択します。 注：プリスキャンとスキャンが表示されます1.5時間後の両方で新しいスタック。 画像>スタック>ツールを選択します>コンバイン 。 注： コンバイナウィンドウが表示されます。 STACK1ドロップダウンメニューを選択します。組み合わせたスタックを含むスタックを選択します。 Stack2ドロップダウンメニューを選択します。全24時間後にスキャンデータが含まれているスタックを選択します。 垂直組み合わせを確認してください。 [OK]を選択します。 注：すべての9のスキャンを持つ新しいスタックが表示されます。 [ファイル]> [名前を付けて保存> AVI。 [OK]を選択します。 所望の目的地に移動します。 ファイル名に任意の名前を入力します</strong>フィールド。 [保存]を選択します。