발작과 같은 활동을 분석하고 운동을위한 저가의 방법<em> 초파리</em
Summary
무료로 제공하고 저렴 소프트웨어 프로그램의 웹캠과 조합하여, 초파리 melanogaster의 기관차 패턴은 속도, 거리, 다양한 모터 활동의 시간의 차이를 검출하기 위해 분석 될 수있다.
Abstract
비디오 추적 시스템은 초파리의 움직임을 분석하고 기관차 행동에 여러가지 이상을 검출하기 위해 널리 사용되어왔다. 이러한 시스템은 행동 풍부한 정보를 제공 할 수 있지만,이 시스템의 비용과 복잡성은 많은 실험실에 금지 될 수 있습니다. 우리는 D. melanogaster의 기관차 행동과 발작의 움직임을 측정하기위한 저가의 분석을 개발했습니다. 시스템이 거리를 이동 추적하는 저렴하고 자유 소프트웨어의 조합을 사용하여 처리 할 수있는 이미지를 캡처하는 웹 캠을 사용하여, 지정된 시간 기간 동안 움직임과 움직임의 지속 기간의 평균 속도. 이 시스템의 유용성을 입증하기 위해, 우리는 D.의 그룹이 3 ~ 10 배 더 민감 발작과 같은 활동 (SLA) 야생형 파리보다 돌연변이, 방에 민감한 (BS) 중풍 병자를 melanogaster의 조사. 이 새로운 시스템을 사용하여, 우리는 감지 할 수 있었다 BS mutanT 강타 무감각 (BSS)은 야생형 파리보다 새로운 환경에서 탐구 운동의 낮은 수준을 나타낸다. 또한, 시스템은 일반적으로 타입 II 당뇨병을 치료하는 데 사용되는 약물은 메트포민, BS 돌연변이의 SLA의 강도를 감소 시킨다는 것을 확인 하였다.
Introduction
짧은 수명 및 사용할 수있는 강력한 유전자 도구를 감안할 때, 초파리는 각종 질병의 원인 및 다양한 생물학적 과정의 기본 생리를 조사를위한 훌륭한 모델 시스템입니다. 많은 경우에, 그것은, 행동 또는 약리 유전 조작이 모델 생물 1,2 운동력에 미치는 효과를 측정하는 것이 유리하다.
일반적으로 이차원 3-7 플라이 움직임을 측정하기 위해 사용되는 다양한 방법이있다. 이 시스템은 동시에 여러 파리의 추적을 지원할 수와 속도, 레코드 경로의 길이를 측정하고 비행 이동 소요 시간의 백분율을 기록 할 수 있습니다. 그들은 운동 및 비행 이동 6-9의 성적으로 동종 이형의 성격에 약물의 효과를 포함하여 다양한 상황에서의 움직임을 연구하는 데 사용되었습니다. 이러한 시스템의 주요 단점은 추적 SYS의 비용이다TEM 또는 해당 소프트웨어와 카메라. 경우에 따라이 달러의 수천에서 실행할 수 있습니다. 비용은 새롭게 절연 돌연변이의 이동성 패턴을 정량화, 예를 들면, 이러한 시스템의 제한된 사용을 필요 랩위한 특정 관심사이다.
간단하지만 덜 강력한 방법은 레코드 운동 플라이가 폐쇄 관 10,11의 중간에 배치되어 외광의 빔 경로를 횡단하는 횟수에 기초하여 시스템을 사용하는 것이다. 이러한 시스템은 운동과 수면 각성주기에 대한 가치있는 정보를 제공 할 수 있지만, 그들은 그들이 비행의 실제 경로를 캡처로 장애 조치 또는 추정의 움직임에 따라 수 있기 때문이다. 추가 고해상도의 방법이 이러한 제한 12를 시도하고 회피하는 데 사용되었습니다 있지만, 예를 들어, 관의 끝에서 상당한 움직임을 전시 파리가 낮은 운동을 등록합니다 항공사.
간단하고 저렴 여전히 geotaxi를 측정하는 장치를 등반하는의, 하나의 튜브 또는 튜브를 2,13의 시리즈를 통해 파리의 상향 이동. 이러한 시스템은 저렴하고 쉽게 geotaxis 결함을 식별 할 수 있지만, 그들은 조사자가 관심을 가질 것 운동의 많은 다른 양상을 캡처하지 못한다.
많은 실험실 – 설치와 사용하는 것은 D. melanogaster의 균주의 행동 차이를 특성화 유익한 도구가 될 것입니다 간단한 저가의 강력한 분석 시스템하십시오. 여기에서 우리는 채 2 백 달러를위한 설정하고 파리의 이동 경로, 속도 및 시간에 대한 정보를 제공 할 수있는 할 수있는 분석을 설명합니다. 분석의 효능을 입증하기 위해, 우리는 그것을 식별하는 데 사용 될 수 있다는 것을 보여주는 데이터를 제시, 발작과 약물 메트포르민의 2) 능력에 취약 방에 민감한 (BS) 돌연변이는 1) 전위의 결함이있는 일반적 발작 같은 활성 (SLA) I의 강도를 줄이기 위해, II 형 당뇨병을 치료하는 데 사용N 개의 BS 돌연변이.
Protocol
Representative Results
Discussion
초파리 전위 또는 움직임 패턴을 검사 할 때, 이동 한 거리에 관한 정보, 움직임의 속도 및 이동 패턴을 추출 할 수있는 유용하다. 이러한 정보를 추출하기 위해, 고가의 장비는 전통적 종종 드물게 4,8,9 같은 분석법을 사용하고자 작은 실험실 또는 실험실에 대한 금지입니다 사용되어왔다.
여기에 설명 된 분석은 거리 (그림 2와 그림 6) 운동, 속도 ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 또한 미세 조정에 자신의 작품이 분석을 위해 크리스 버너, 스티븐 맥키 니, 로라 토빈, 제니 Gilbreath, 애슐리 Olley, 메간 호퍼, 그리고 메간 하이드에 대한 감사의 표현을하고 싶습니다.
Materials
| Name of the Reagent/Equipment | Company | Catalog Number/Model | Comments |
| WebCam | Logitech | Pro900 | Any quality webcam will suffice. |
| HandiAVI time-lapse software | Azcendant software | Latest version can be found at http://www.azcendant.com/ | |
| ImageJ | NIH | Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html | |
| Multiracker Plug-In | NIH | Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html | |
| Vortexer | VWR | Vortex Genie 2 | Most standard size vortexers such as the Vortex Genie 2 will suffice. |
| 5cm petri dish cover | LabM Limited | D011 | Smaller or larger petri dish covers can be used for an arena in movement assay. |
| Light box | Built from scrap material. | Illumination is used for the locomotion assay. Depending on the room lighting, it is possible to perform the assay without the light box. | |
Referenzen
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