Der Geschmackssinn kann ein Insekt eine breite Palette von lösliche Chemikalien zu erkennen und spielt eine wichtige Rolle bei der Akzeptanz einer nahrhaften Substanz oder die Ablehnung eines schädlichen oder giftigen ein. Geschmack ist auch gedacht, um eine Rolle bei der Partnerwahl spielen, durch den Nachweis von Pheromonen ^1-5. Diese wichtige und vielfältige Funktionen haben das Insekt Geschmack System ein überzeugendes Ziel von Ermittlungen, wie sensorische Systeme übersetzen Umweltreize in relevante Verhaltens Ausgänge gemacht.

Die Primäreinheit der Drosophila melanogaster Geschmack System ist der Geschmack Haar oder Sensillum. Moleküle geben Sie die Sensillum über eine Poren an seiner Spitze ^2,6. Sensillen auf der Lippe, der Beine, der Flügel-Marge und des Rachens ⁶ gefunden. Auf der Lippe, wird die Anzahl und Lage der Sensillen stereotyp. Es gibt drei Klassen von morphologischen Sensillen je nach Länge: die Länge (L), Mittelstufe (I) und kurze (S ) Sensillen ^7,8. Jeder Sensillum enthält entweder zwei (I-Typ) oder vier (L-und S-Typ) Geschmacksrezeptorzellen (KNS) ^9. Verschiedene KNS reagieren auf verschiedene Kategorien von Geschmack Reize: bitter, Zucker, Salz und Osmolarität ^7,10 und Express unterschiedliche Untergruppen von Geschmacksrezeptoren ^8,11-13. Nur I und S-Typ-Sensillen enthalten Bitter-responsive KNS ^8,10. Die KNS Projekt auf die Unterschlundganglion Ganglion (SOG) und deren Aktivierung durch Geschmacksmoleküle auf den höheren zentralen Nervensystems für die Decodierung weitergeleitet, was zu einer Verhaltensreaktion ^6. Die relativ kleine Zahl von Neuronen und die Zugänglichkeit für Molekular-und Verhaltensanalyse machen den Geschmack Drosophila-System ein hervorragendes Modell für die Untersuchung von Geschmacks-Systeme im Allgemeinen. Die relative Leichtigkeit, mit der das System über genetische Mutation oder der GAL4-UAS Expressionssystem manipuliert werden, dient auch als ein wertvolles Werkzeug ^14,15.

NHALT "> Da diese Sensillen ragen aus der Oberfläche der Lippe, machen sie hervorragende Ziele für die Elektrophysiologie. Das Brennen der KNS kann mit extrazellulären Aufnahme überwacht werden. Historisch gesehen, die Seitenwand-Aufzeichnungsverfahren, das eine Glaselektrode in die eingelegte verwendet Sensillum neuronale Aktivität aufzuzeichnen, ²⁶ verwendet. Jedoch ist dieses Verfahren technisch schwierig zu führen, und es ist schwierig, lange von jedem Präparat aufzunehmen. Die Spitze-Aufzeichnungsverfahren, das die Reaktion der Neuronen mit einer Elektrode Maßnahmen, gleichzeitig liefert ein Geschmacksträger ist, da die Methode der Wahl ^9,16 zu werden. Es wurde verwendet, um den Geschmack System von Drosophila melanogaster ^8,10,17,18 sowie eine Reihe von anderen Insektenarten ^19-23 zu untersuchen. Es hat wurde durch die Entwicklung der tastePROBE Verstärker, der eine der wichtigsten Nachteile der Spitze-Aufzeichnungsverfahren durch Kompensation erleichtert wandDie große Potentialdifferenz zwischen der Bezugselektrode und der Insekten Sensillum, so dass die GRN Aktionspotentiale ohne übermäßige Verstärkung oder Filterung ²⁴ aufgezeichnet werden. Eine weitere wichtige Entwicklung war die Verwendung von Citrat als tricholine der Aufnahme Elektrolyt ^25. TCC unterdrückt Antworten von der Osmolarität empfindlichen GRN und nicht stimulieren die salzempfindlichen GRN, so dass Reaktionen, die durch bittere Geschmacksstoffe und Zucker erzeugt viel einfacher zu analysieren ^25.

Hier beschreiben wir, wie Spitze Aufnahme von Drosophila labellar Sensillen ist derzeit in der Carlson Labor durchgeführt. Dieses Protokoll wird erklären, wie man einen geeigneten Elektrophysiologie rig, wie die Fliege vorzubereiten, und wie man Geschmack Aufnahmen durchführen zu etablieren. Auch bei der Verwendung dieses Wir präsentieren einige durch die Aufnahme von Teilmengen von Drosophila Sensillen, sowie einige häufig auftretende Probleme und mögliche Lösungen, die auftreten können, erhalten repräsentative DatenTechnik.