Capsular serotipificación de<em> Streptococcus pneumoniae</em> Uso de la Reacción Quellung

1. Preparación de la suspensión celular para la tipificación El uso de un bucle de 1 l desechable estéril, tomar un pequeño barrido de fresco durante la noche cultivo puro de neumococos crecido en agar sangre de caballo no selectivo sólido e inocular 100 l Heart Infusion (HI) de caldo. La suspensión debe aparecer ser apenas visiblemente turbia. Agitar suavemente el tubo para emulsionar. Nota: otros medios, como el caldo de infusión cerebro corazón también pueden ser adecuados. La adición de suero (por ejemplo, una concentración final de 10% (v / v) de suero de caballo) y una incubación a 37 ° C durante aproximadamente 1 hora antes de su uso se puede usar para mejorar la reacción. 2. Comprobación de la densidad de la suspensión celular La suspensión celular preparada en la etapa 1.1 también se utilizará como control negativo, y se debe comprobar para densidad celular antes de añadir los sueros a escribir. El uso de un bucle de 1 l, transferir una gota de inóculo preparado en la etapa 1.1 en un vasodiapositiva s microscopio. Con un par de pinzas, coloque una pequeña cubreobjetos circular sobre la suspensión. Usando ajuste de contraste de fase, observar la preparación al microscopio bajo magnificación 400X, para comprobar la densidad de la suspensión (Figura 1A). Si el inóculo es demasiado pesada (Figura 2A), añadir más caldo a la suspensión de células realizado en el paso 1.1 para diluirlo. Mezcle suavemente de nuevo. Si el inóculo es demasiado clara, por ejemplo, hay <50 células visibles en el campo microscópico (Figura 2B), añadir más bacterias a la preparación de la suspensión de células realizado en el paso 1.1 y mezclar suavemente. Nota: Con la experiencia, la densidad de la suspensión de células se puede juzgar por agitación y sosteniendo a la luz, en el que debe aparecer ser simplemente visiblemente turbia. Repetir los pasos 2.1 a 2.3 hasta que un número adecuado de células son visibles en el campo microscópico. Nota: diapositivas y coversl Vidrioips presentan un peligro de objetos punzantes. Después de su uso, diapositivas y cubreobjetos están contaminados con material infeccioso y deben desecharse en un recipiente previsto. 3. Mecanografía Transferencia ~ 1 l del inóculo preparado (por ejemplo, utilizando un bucle de 1 l) sobre el portaobjetos de microscopio de vidrio. Tire el asa en el recipiente previsto. Añadir un volumen igual (1 l asa) del antisuero a temperatura ambiente en la diapositiva y mezclar dos gotas de bien con el bucle. Con un par de pinzas, coloque una pequeña cubreobjetos circular sobre la suspensión, teniendo cuidado de no tocar la gota. Coloque el cubreobjetos sobre la suspensión inmediatamente después de la adición de antisueros para evitar que el fluido en la diapositiva de la desecación. Usando un microscopio, observar la suspensión bajo contraste de fase con una ampliación de 400X. Se observa una reacción negativa Quellung cuando poco o nada de 'hinchazón' de las células neumocócicas pueden verse en 40Magnificación 0X, similar a lo que se observa en la suspensión celular neumocócica sin antisueros añadió (control negativo). Se observa una reacción positiva de Quellung cuando las células aparecen ampliada o "hinchado" y más visible cuando se compara con las células en el control negativo. Nota: reacciones dudosos deberán investigarse más a fondo, por ejemplo mediante el examen de la reacción después de 5-10 minutos de incubación a temperatura ambiente, o mediante la repetición de la reacción con antisuero más. Realizar la serotipificación neumocócica con pruebas sucesivas de piscinas antisueros individuales hasta que se observa una reacción positiva. Alternativamente, las piscinas se pueden aplicar en 'rondas', dependiendo de la incidencia local de la serotipos. Nota: Las pruebas en "rounds" asegura que las piscinas que contienen anticuerpos contra los serotipos más comunes se prueban primero, minimizando el esfuerzo y el costo. Ensayo simultáneo de varias piscinas también proporciona controles negativos adicionales, que puede ser útil en interpretation. Si todas las piscinas en un 'round' particular, son negativos, probar el aislamiento con las siguientes rondas de piscinas. Pruebe el aislado utilizando el tipo apropiado o antisuero grupo contenida dentro de la piscina reactiva. En su caso, utilizar factor de antisueros para diferenciar aún más el serotipo. Nota: Claves para antisueros neumocócica suministrados por el fabricante se utilizan en la selección de la piscina, el tipo y grupo o factor de antisueros y la interpretación de los resultados (incluidas posibles reacciones cruzadas). Si se obtienen resultados negativos con todas las piscinas, probar el aislamiento con el reactivo Omniserum (contiene anticuerpos contra 91 serotipos 21). Si todavía no se observa una reacción positiva de Quellung cuando se prueba un neumocócica aislar con el reactivo Omniserum, esto puede ser debido a que el aislamiento está expresando poca o ninguna cápsula, o que los anticuerpos contra el serotipo no están representados en la Omniserum. Esta última categoría puede incluir nuevos serotipos. </ Ol>