تشريح الفطري اشارة المناعة في التهرب الفيروسية من الإنتاج خلوى
Summary
وصفنا بروتوكول لقياس إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات في الفئران المصابة مع هربس النموذج، الفئران غاما هربس 68 (γ HV68) التي هي ذات الصلة ارتباطا وثيقا المرتبطة ساركوما هربس الإنسان كابوزي (KSHV) وفيروس ابشتاين بار (EBV). استخدام سلالات الفئران المعدلة وراثيا والخلايا الليفية الماوس الجنينية (MEFs)، قمنا بتقييم إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات سواء في الجسم الحي وخارج الحي. "اعادة تشكيل" التعبير عن مكونات المناعة الفطرية في الخلايا الليفية الجنينية خروج المغلوب من قبل تنبيغ lentiviral، ونحن كذلك تحديد جزيئات محددة المناعة الفطرية وتشريح الأحداث الإشارات الرئيسية التي تنظم بشكل مختلف في إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات.
Abstract
ردا على عدوى فيروسية، يتم تنشيط الاستجابة المناعية الفطرية المضيفة ليصل تنظيم التعبير الجيني وإنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات. على العكس، تطورت الفيروسات استراتيجيات معقدة للتهرب واستغلال المضيف يشير المناعي من أجل البقاء والانتشار. التهرب المناعة الفيروسية، تستتبع دفاع المضيف والتهرب الفيروسية، ويوفر واحدة من أروع واجهات وديناميكية لتبين التفاعل المضيفة للفيروسات. هذه الدراسات تقدم فهمنا في تنظيم المناعة الفطرية ويمهد طريقنا لتطوير علاجات مضادة للفيروسات الرواية.
الفئران γHV68 هو الممرض الطبيعية من القوارض الفئران. الإصابة γHV68 الفئران تقدم نموذجا حيوان صغير الانقياد لدراسة الاستجابة المضادة للفيروسات لKSHV الإنسان وEBV منها اضطراب في الجسم الحي التفاعلات الفيروسات المضيف ليست قابلة للتطبيق. نحن هنا وصف بروتوكول لتحديد إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات. هذا البروتوكول يمكن تكييفها لفير أخرىويستخدم مسارات الإشارات.
مؤخرا، اكتشفنا أن يخطف γHV68 مافريكس وIKKβ، الفطرية مكونات إشارات المناعية الرئيسية المصب من عصاري خلوي RIG-I وMDA5، لإلغاء تفعيل NFΚB وإنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات. على وجه التحديد، والعدوى γHV68 ينشط IKKβ وأن تنشيط IKKβ phosphorylates RELA لتسريع تدهور العالقات. على هذا النحو، γ HV68 uncouples بكفاءة تفعيل NFΚB من المنبع لها IKKβ تفعيلها، يلغي المضادة للفيروسات التعبير خلوى الجينات. يلقي ضوءا هذه الدراسة استراتيجية معقدة حيث يتم اعتراضها تفعيل المناعة الفطرية المنبع من قبل الممرض الفيروسية لإلغاء تفعيل النسخي المصب الفوري والتهرب من إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات.
Introduction
وقد أوجز الدراسات الحديثة على شلالات إشارات الشاملة في تصاعد المضيف الاستجابات المناعية الفطرية. المقيمين داخل مقصورات مميزة، والمستقبلات التعرف على الأنماط (خنازير) كشف أنماط الجزيئية المرتبطة الممرض (PAMPs) المنشأ متنوعة لتحريك المناعة الفطرية يشير 1. التي يسببها حمض الريتينويك الجين الأول (RIG-I) وسرطان الجلد التمايز مستضد 5 (MDA5) البروتينات هي أجهزة الاستشعار التي تعترف عصاري خلوي الأنواع RNA مع سمات هيكلية محددة 2. عند التنشيط، RIG-I يتفاعل مع مافريكس في المصب (المعروف أيضا باسم IPS-1، فيزا، وCARDIF) المحول الذي، بدوره، ينشط IKK (IKKαβγ) وكيناز المتعلقة IKK (TBK1 وIKKε، المعروف أيضا باسم IKKI ) مجمعات 3-6. تنشيط المناعة الفطرية تحركات الفوسفات المنظمين الرئيسيين في التعبير الجيني، بما في ذلك عوامل النسخ ومثبطات منها، وتمكين تفعيل الجينات المضادة للفيروسات النسخي المضيف (على سبيل المثال IL6، TNF & #945؛، CCL5، وIFNβ). هذه الشلالات يشير تشكل الاستجابات الفطرية المتأصلة قوية المناعي أن إقامة دولة المضادة للميكروبات لتقييد انتشار مسببات المرض خلال المراحل المبكرة من العدوى.
ويرتبط ارتباطا وثيقا الفئران γHV68 أنكجنيك KSHV الإنسان وEBV. وهكذا، والعدوى من الفئران γHV68 نموذجا حيوان صغير الانقياد لدراسة استجابة المضيف المناعية لعدوى فيروس قوباء جاما في الجسم الحي 7. باستخدام γHV68، كشفت مختبرنا استراتيجية معقدة حيث يخطف γHV68 استضافة إشارات المناعية الفطرية لتمكين عدوى فيروسية. من جهة، γHV68 ينشط مسارا مافريكس-IKKβ لتعزيز تفعيل النسخي الفيروسية عن طريق توجيه تنشيط IKKβ لالفوسفات transactivator النسخ المتماثل (RTA)، والنسخ مفتاح عامل فيروسي للγHV68 تكرار 8. من ناحية أخرى، فإن الفسفرة IKKβ بوساطة يعبي RELA لتدهور والمدىinates تفعيل NFΚB 9. على هذا النحو، والعدوى γHV68 يتجنب إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات بشكل فعال. ومن المثير للاهتمام، والفحص باستخدام مكتبة تعبير عن γHV68 حددت هيئة الطرق والمواصلات باعتبارها يغاز E3 للحث على تدهور العالقات وإلغاء تفعيل NFΚB 10. هذه النتائج تكشف عن استراتيجية التهرب المناعي معقدة حيث يتم تسخيرها المنبع الأحداث يشير المناعي عن طريق γHV68 لينفي في نهاية المطاف إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات.
نحن هنا وصف بروتوكول لقياس إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات في الفئران المصابة مع γHV68 سواء في الجسم الحي وخارج فيف س. في البروتوكول ومواصلة استكشاف "المعاد" التعبير عن مكونات المناعة الفطرية في الخلايا الليفية الجنينية خروج المغلوب من قبل تنبيغ lentiviral، والذي يبرز وظيفة المناعة الفطرية جزيئات محددة في تنظيم إنتاج السيتوكينات المضادة للفيروسات. هذا البروتوكول يمكن تكييفها بسهولة إلى فيرو أخرىسيس ومسارات الإشارات.
Protocol
Representative Results
Discussion
التهرب المناعة الفيروسية هي واحدة من التفاعلات الأكثر ديناميكية ومثيرة تفاعل جريمة الفيروسية والدفاع المضيف 9. وتنظم المضيف المكونات المناعية الفطرية بحيث يتم نقل الإشارة بدأت تنتقل بفعالية وإخلاص. ترسيم وتنظيم التسلسل الهرمي يشير شلالات هو موضوع بارز الحصا?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
البرية من نوع (مافريكس + / +) وخروج المغلوب (مافريكس – / -) الفئران، وايلد من نوع (مافريكس + / +) وخروج المغلوب (مافريكس – / -) وMEFs المقدمة التفضل الدكتور تشي جيان تشن J. (جامعة تكساس جنوب غرب المركز الطبي) 13. ويستند هذا المنشور على العمل الممولة من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (R01 R01 CA134241 وDE021445) والجمعية الأميركية للسرطان (RSG-11-162-01-MPC).
Materials
Referenzen
- Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell. 124, 783-801 (2006).
- Kato, H., Takahasi, K., Fujita, T. RIG-I-like receptors: cytoplasmic sensors for non-self RNA. Immunol. Rev. 243, 91-98 (2011).
- Kawai, T., et al. IPS-1, an adaptor triggering RIG-I- and Mda5-mediated type I interferon induction. Nat. Immunol. 6, 981-988 (2005).
- Seth, R. B., Sun, L., Ea, C. K., Chen, Z. J. Identification and characterization of MAVS, a mitochondrial antiviral signaling protein that activates NF-kappaB and IRF 3. Cell. 122, 669-682 (2005).
- Xu, L. G., et al. VISA is an adapter protein required for virus-triggered IFN-beta signaling. Mol. Cell. 19, 727-740 (2005).
- Meylan, E., et al. Cardif is an adaptor protein in the RIG-I antiviral pathway and is targeted by hepatitis C virus. Nature. 437, 1167-1172 (2005).
- Speck, S. H., Virgin, H. W. Host and viral genetics of chronic infection: a mouse model of gamma-herpesvirus pathogenesis. Curr. Opin. Microbiol. 2, 403-409 (1999).
- Dong, X., et al. Murine gamma-herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to initiate lytic replication. PLoS Pathog. , (2010).
- Dong, X., Feng, P. Murine gamma herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to abrogate NFkappaB activation and antiviral cytokine production. PLoS Pathog. 7, (2011).
- Dong, X., et al. Murine gammaherpesvirus 68 evades host cytokine production via replication transactivator-induced RelA degradation. J. Virol. 86, 1930-1941 (2012).
- Dong, X., Feng, P. Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus. J. Vis. Exp. , (2011).
- He, S., et al. Receptor interacting protein kinase-3 determines cellular necrotic response to TNF-alpha. Cell. 137, 1100-1111 (2009).
- Sun, Q., et al. The specific and essential role of MAVS in antiviral innate immune responses. Immunity. 24, 633-642 (2006).
